Интерфероны: понятие, методы получения, применение - Реферат

В 1957 году в Национальном институте медицинских исследований в Лондоне было установлено, что клетки человека и животных, подвергнутые воздействию вируса, выделяют вещества, придающие непораженным клеткам устойчивость к вирусной инфекции. Они как бы препятствуют (интерферируют) размножению вирусов в клетке и поэтому были названы интерферонами.В зависимости от типа клеток-продуцентов все интерфероны можно разделить на: • ?-интерфероны. Природные, получаемые из культуры клеток лейкоцитов человека, стимулированных вирусами: ?-интерферон, ?-интерферон, интерферон-? Nl;Получают интерфероны двумя способами: а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов крови человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона;Известны способы получения лейкоцитарного интерферона человека из лейкоцитов донорской крови человека, индуцированных вирусами и другими индукторами [2]. Известна технология производства человеческого лейкоцитарного интерферона, которая включает в себя следующую последовательность операций: выделение лейкоцитов из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы, суспензирование их в питательной среде при температуре (37±0,5)OC, добавление к лейкоцитам аллантоисного вирус-индуктора и инкубирование при (30±0,5)OC 3 ч. С целью увеличения продукции интерферона лейкоцитами на стадии биосинтеза в другом регламенте производства человеческого лейкоцитарного интерферона N 302-82 суспензию лейкоцитов выдерживают при 37,5OC в течение 2-10 ч в питательной среде, содержащей 100-200 ед/мл человеческого лейкоцитарного интерферона и 0,0015 ед/мл инсулина стадия прайминга добавляют вирус-индуктор на 1-2 ч стадия индукции интерферона. Затем удаляют вирус-индуктор, а к осадку лейкоцитов добавляют питательную среду и суспензию выдерживают при 37,5OC в течение 18-20 ч стадия биосинтеза интерферона, а надосадочную жидкость, содержащую интерферон, подвергают инактивации. Необходимо отметить, что во всех вышеприведенных производственных технологиях и других известных способах получения человеческого лейкоцитарного интерферона, лейкоциты выделяют из крови, которая хранится при 4-6OC, а сам процесс выделения идет при такой же температуре с последующим внесением их в питательную среду с температурой 37,5OC и проведение стадии прайминга, стадии индукции и биосинтеза интерферона [4].Известно большое количество плазмид и созданных на их основе штаммов Е. coli, экспрессирующих интерферон: штаммы Е. coli ATCC 31633 и 31644 с плазмидами Z-PBR322 (Psti) HCLF-11-206 или Z-PBR 322(Pstl)/HCLN SN 35-AHL6 (SU 1764515), штамм Е. coli PINF-AP2 (SU 1312961), штамм Е. coli PINF-F-Pa (AU 1312962), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой p280/21FN, штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой PINF14 (SU 1703691), штамм E.coli SG 20050 с плазмидой PINF16 (RU 2054041) и др. Известен способ получения интерферона, включающий в себя культивирование клеток Ps. putida, разрушение биомассы, обработку полиэтиленимином, фракционирование сернокислым аммонием, гидрофобную хроматографию на фенилсилохроме С-80, РН-фракционирование лизата, его концентрирование и диафильтрацию, ионообменную хроматографию на целлюлозе DE-52, элюирование в градиенте РН, ионообменную хроматографию полученного элюента на целлюлозе СМ-52, концентрирование пропусканием через кассету фильтров и гель-фильтрацию на Сефадексе G-100 (SU 1640996). В качестве наиболее близкого аналога (прототипа) может быть указан способ получения лейкоцитарного интерферона человека, заключающийся в культивировании рекомбинантного штамма E.coli, замораживании полученной биомассы при температуре не выше-70°С, размораживании, разрушении клеток микроорганизма лизоцимом, удалении ДНК и РНК введением в лизат ДНК-азы и очисткой выделенной нерастворимой формы интерферона отмывкой буферным раствором с детергентами, растворении осадка интерферона в растворе гуанидин гидрохлорида, ренатурации и одностадийной очистке ионообменной хроматографией. В качестве продуцента используют штамм E.coli SS5, полученный с помощью рекомбинантной плазмиды PSS5, содержащей три промотора: Plac, Pt7 и Ptrp, и ген альфа-интерферона с введенными нуклеотидными заменами. Недостатками данной плазмиды и штамма на ее основе являются использование в плазмиде сильного нерегулируемого промотора фага Т7 в штамме Е. coli BL21 (DE3), в котором ген Т7 РНК полимеразы находится под промотором lac оперона и который всегда "течет".ИФН I типа, действующие преимущественно как ингибиторы репликации вирусов в клетке, реализуют свой эффект, стимулируя выработку рибосомами клеток хозяина клеточных ферментов, которые тормозят продукцию вирусов, нарушая трансляцию вирусной МРНК и синтез вирусных белков [2]. Интерфероны вырабатывают большинство видов животных, но проявление их активности видоспецифично, т.е. они действуют только у того вида животных, в которых вырабатываются.Интерфероны (ИНФ) обладают универсально широким спектром антивирусной активности, пос

Содержание

Введение

1 Классификация интерферонов

2 Методы получения интерферонов

2.1 Получение путем инфицирования лейкоцитов человека

2.2 Получение интерферонов генноинженерным способом

3. Механизмы действия интерферонов

4. Терапевтическое применение интерферона человека

Заключение

Список использованной литературы

В 1957 году в Национальном институте медицинских исследований в Лондоне было установлено, что клетки человека и животных, подвергнутые воздействию вируса, выделяют вещества, придающие непораженным клеткам устойчивость к вирусной инфекции. Они как бы препятствуют (интерферируют) размножению вирусов в клетке и поэтому были названы интерферонами. Интерфероны помогают нашему организму бороться со множеством вирусных заболеваний. [9]

Препараты на основе различных видов интерферонов используются как иммуномодуляторы для нормализации и усиления иммунной системы, в т. ч. для лечения различных тяжелых заболеваний - острого вирусного гепатита, рассеянного склероза, остеосаркомы, миеломы и некоторых видов лимфом.

Интерфероны представляют собой белковые молекулы с молекулярной массой от 15000 до 21000 дальтон, продуцируемые и секретируемые клетками в ответ на вирусную инфекцию или другие возбудители. [1]

Интерфероны (ИФН) - группа аутогенных гликопротеинов, биомеханизм действия которых связан с одновременным противовирусным эффектом - активацией клеточных генов, в результате чего синтезируются белки, ингибирующие синтез вирусной ДНК (РНК) и обладающие иммуномодулирующим эффектом - способностью усиливать экспрессию антигенов на клеточных мембранах и увеличивать активность цитотоксических Т-клеток и естественных киллеров [3,4,7,8].