Группа пневмовирусов - Реферат

1.2 Номенклатура 1.3 Выделение вируса 1.4 Хранение вируса 2. Основные методы 2.1 Культивирование респираторно-синцитиального вируса 2.1.1 Чувствительные культуры клеток 2.1.2 Цитопатогенное действие 2.1.3 Методы повышения инфекционное ™ 2.1.4 Методы стабилизации инфекционное 2.2 Методы определения инфекционности 2.3 Гемагглютинация 2.4 Гемадсорбция 2.5 Иммунофлуоресцентные методы 2.6 Твердофазный иммуноферментный анализ 3. Аналитические методы 3.1 Радиоактивное лечение, радиоиммуноанализ и радиоиммунопреципитация 3.1.1 Введение радиоактивной метки в вирусные белки в зараженных РСВ клетках 3.1.2 Радиоиммуноанализ 3.1.3 Радиоиммунопреципитация 3.2 Метод выявления дефектных интерферирующих частиц 3.3 Электронная микроскопия 3.3.1 Морфология вирионов 3.3.2 Морфогенез вирионов 3.3.3 Сканирующая электронная микроскопия 3.3.4 Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков 3.4 Концентрирование вируса 3.5 Очистка и радиоактивное мечение РСВ 3.5.1 Градиентное центрифугирование 3.5.2 Очистка РСВ методом изопикнического центрифугирования 3.6 Радиоактивное мечение вирионной РНК 3.7 Анализ вирусных РНК и белков методом электрофореза в полиакриламидном геле 3.7.1 Анализ белков 3.7.2 Анализ РНК 3.8 Очистка матричной РНК для трансляции 3.9 Молекулярное клонирование и олигонуклеотидное секвенирование 3.10 Очистка вирусных белков 3.10.1 Вирусные полипептиды 3.10.2 Очистка капсидного белка 3.10.3 Очистка вирионных гликопротеинов 4. Прототип этой группы, респираторно-синцитиальный вирус, - это плеоморфный оболочечный вирус, геном которого представлен несегментированной РНК негативной полярности. Общие свойства пневмовирусов Известные представители рода Нуклеиновая кислота Белки> Вирионные ферменты Плавучая плотность частиц Морфология частиц Морфология нуклеокапсида Морфология мембранных выростов Генетические взаимодействия Стабильность Круг хозяев Патогенность Цитопатогенность РСВ человека РСВ крупного рогатого скота Вирус пневмонии мышей Однонитевая несегментированная РНК с коэффициентом седиментации 50S; мол. масса >5 - 10е 2 гликопротеина оболочки: гликопротеин G мол. масса 90 кД и связанные между собой дисульфидными связями продукты расщепления гликопротеина F 2 негликозилированных белка оболочки: белок матрикса мол. масса 26 кД и белок с неизвестной функцией мол. масса 24 кД 3 белка сердцевины: гипотетическая полимераза, нуклеокапсидный белок и фосфопротеин 3 неструктурных белка неизвестной функции РНК-полимеразная активность Гемагглютинин Нейраминидазная активность отсутствует 1.15-1,26 г/см3 Плеоморфные частицы диаметром 80^ - 500 нм и нитевидные частицы диаметром 60-ПО нм и длиной до 5 мкм. Для успешного выделения РСВ важно избегать замораживания и оттаивания образцов, при их хранении поддерживать достаточно низкую температуру, как можно быстрее использовать материал для заражения чувствительной культуры и включать в состав культуральной среды ЭТС или БСА. Например, после трех пассажей через, индивидуальные бляшки на культуре клеток WI-38 полученный изолят вируса давал на этих клетках в 50 раз более высокий титр, чем вирус, пассируемый на клетках BS-C-1. Для приготовления разведений можно использовать буферный раствор, например PBS, или, предпочтительно, среду MEM. . 2.5 Иммунофлуоресцентные методы Иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью поликлональной антисыворотки представляет собой удобный и точный метод подсчета зараженных клеток и выявления места размножения вируса при анализе фиксированных срезов зараженных тканей.