Функціональні характеристики органної культури надниркових залоз при кріоконсервуванні та ксенотрансплантації - Автореферат

НАЦІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ НАУК УКРАЇНИДля зясування функціональних характеристик органних культур надниркових залоз, включаючи етапи росту культури, її обробку кріопротекторами, заморожування, низькотемпературне зберігання і таке інше, дуже важливим моментом є реєстрація рівнів як біосинтезу, так і секреції гормонів. Досліджувати функціональні характеристики КОКНЗНП у залежності від термінів зберігання в низькотемпературному банку на основі дослідження рівня споживання культурами для стероїдогенезу екзогенного холестерину, їхніх морфологічних характеристик, а також визначення базальної і стимульованої секреції гормонів адаптованим методом, що забезпечує максимальну екстрактивність гормонів за результатами оцінки факторів середовища, включаючи температуру на всіх етапах визначення глюкокортикоїдів. У роботі використовувався метод органного культивування надниркових залоз, метод заморожування культури у присутності 5% димексиду, флуориметричний метод визначення 11-ОКС, спектрофотометричний метод визначення холестерину, колориметричний метод визначення білка для дослідження біохімічних параметрів, методи світлової мікроскопії для дослідження морфологічних характеристик нативної, кріоконсервованої ОКНЗНП, трансплантатів культури і надниркової залози щурів. До 45-ої доби після трансплантації він характеризується наявністю секретуючих клітин, що мають здатність до стероїдогенезу і забезпечують підтримку рівня глюкокортикоїдів у адреналектомованих тварин на 80-87% в порівнянні з контрольними тваринами, що ще раз свідчить про придатність використання матеріалу в клінічних цілях. У першій серії експериментів експериментальні тварини були розбиті на групи (100 шт): ложнооперовані (Л/О) тварини, Л/О тварини з КСТЦ КОКНЗНП без впливів, з інкубацією з 10 мкл ЕГ і 50 мкл ЕГ, адреналектомовані (А/Э), А/Е тварини з КСТЦ КОКНЗНП без впливів, з інкубацією з 10 мкл ЕГ і 50 мкл ЕГ.Низькотемпературне зберігання протягом 1-го року органної культури надниркової залози, замороженої за двоетапною програмою незалежно від термінів зберігання в цей період забезпечує, за даними гістологічних досліджень, збереження морфологічної структури і функціональних характеристик - стероїдогенезу екзогенного холестерину, базальної і стимульованої секреції глюкокортикоїдів, а також здатність до рекультивування після відігрівання. Підвищення температури до 37°С, концентрація гормонів шляхом вакуумного випарювання і використання термостатування забезпечує розвиток максимальної флуоресценції за 6 хв у порівнянні з 1,5 годинами за стандартною методикою, що дозволяє скоротити втрату гормонів на 20% і поліпшити відтворюваність існуючого методу. Ксенотрансплантація кріоконсервованої органної культури новонароджених поросят адреналектомованим тваринам незалежно від умов підготовки розмороженого матеріалу до трансплантації сприяє нормалізації гормонального статусу експериментальних тварин. В усіх випадках до 30-ої - 45-ої доби після підсадження в гістологічних препаратах трансплантатів реєструвалася наявність життєздатних секреторних клітин культури. Компенсаторна функція кріоконсервованої органної культури надниркової залози в організмі адреналектомованих тварин визначається умовами підготовки матеріалу для трансплантації.

ФУНКЦІОНАЛЬНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ ОРГАННОЇ КУЛЬТУРИ