Francisella tularensis: некоторые аспекты экологии и диагностики - Автореферат

На правах рукописи Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Francisella tularensis: некоторые аспекты экологии и диагностики 03.00.07 - микробиология Романова Людмила Васильевна Ставрополь - 2008 Работа выполнена в ФГУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора РФ. Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Борис Николаевич Мишанькин. Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Нина Пантелеймоновна Буравцева; доктор биологических наук, профессор Виктор Григорьевич Майский; доктор биологических наук Ирина Сергеевна Мещерякова. Туляремия - зоонозное природно-очаговое инфекционное заболевание, известное еще с давних времен. Несмотря на несомненные успехи в борьбе с возбудителями особо опасных болезней в целом, значимость туляремийного микроба, как этиологического фактора в патологии человека, не только не снижается, но и проявляет тенденцию к нарастанию (Мещерякова И.С., 1983, 1997, 2002, 2003; Онищенко Г.Г., 1998, 2001, 2002, 2005; Сергиев В.П. и др.,1999; Покровский В.И. и др., 1999; Шаханина И.Л. и др. Для решения проблемы национальной биологической безопасности издан Указ Президента Российской Федерации № 2194 от 4.12.2003 г., определяющий основы государственной политики в области обеспечения химической и биологической безопасности Российской Федерации на период до 2010 года и дальнейшую перспективу. В настоящее время род Francisella включает два вида - Francisella tularensis и Francisella philomiragiа, а вид F. tularensis представлен четырьмя подвидами - F. tularensis subsp. tularensis (тип А), F. tularensis subsp. holarctica (тип В), F. tularensis subsp. mediaasiatica и F. tularensis subsp. novicida. Не учитывается возможность пребывания туляремийного микроба в окружающей среде в виде некультивируемых форм. Цель исследования: изучение феномена перехода возбудителя туляремии в некультивируемое состояние, в котором он может существовать в межэпизоотический период, исследование механизмов адаптации патогена к неблагоприятным условиям среды, разработка новых методических подходов к идентификации как типичных, так и атипичных штаммов F. tularensis, включая его некультивируемые формы, с использованием молекулярно-биологических методов. Сконструировать специфические праймеры для индикации возбудителя туляремии в ПЦР. 6. Апробировать методы ДНК - зондирования и ПЦР - анализа для детекции и идентификации атипичных штаммов F. tularensis, включая некультивируемые формы возбудителя. 7. В Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб» депонирован штамм - продуцент плазмидной ДНК E.coli JM 103 pRD6-KM7, Саратов, 1988. В работе использовали штаммы F. tularensis, неарктического, среднеазиатского и голарктического подвидов а также штаммы F.novicida, F.novicida-like и F.philomiragia (любезно предоставленные И.С.Мещеряковой), штаммы бактерий родов Yersinia, Vibrio, Escherichia и др. из музея живых культур РПЧИ. Методы. При сравнении локализации первичной структуры полученного Eco RI-фрагмента ДНК туляремийного микроба в пределах недавно прочитанной полной нуклеотидной последовательностью хромосомной ДНК F. tularensis Schu (Larsson P. et al., 2005) удалось определить его местоположение (рис.