Ентеровіруси в патології плода та новонароджених - Автореферат

Участь інфекційних агентів у формуванні патології вагітності, плода та новонароджених вивчається вже багато десятиріч. В авторитетних дослідженнях зазначається, що 10% вагітностей супроводжується внутрішньоутробним інфікуванням. Свого часу вивчення патогенезу, закономірності участі у внутрішньоутробних інфекціях вірусів краснухи, герпесу, гепатиту дозволили розробити ефективні засоби профілактики, оптимальні схеми ведення вагітності, що у сукупності призвело до різкого зменшення репродуктивних втрат при цих інфекціях (Фризе К. и др., 2003; Чайка В.К., 2006; Кузьмин В.Н., 2001). Які ж чинники визначають особливості перебігу ентеровірусних інфекцій у вагітних та плодів, наскільки поширені внутрішньоутробні ентеровірусні інфекції, чи можливе їх попередження та лікування? Усвідомлення необхідності пошуку відповідей на поставлені запитання як умови розвязання проблеми інфекційної патології плода та новонароджених обумовило зміст, логіку та актуальність проведення досліджень з вивчення закономірностей ентеровірусних інфекцій в антенатальному та перинатальному періоді.Для проведення досліджень були використані отримані з Інституту поліомієліту та вірусних енцефалітів АМН СРСР в 1983 році вакцинні штами вірусу поліомієліту (далі - ВПМ): І тип - LSC2ab, ІІ тип - P-712, ch 2ab, ІІІ тип - Leon12 ab; віруси групи Коксакі: Коксакі А4 штам Highpoint, Коксакі В1 штам Connecticut, Коксакі В2 штам Ohio, Коксакі В3 штам Nancy, Коксакі В4 штам Powers; Коксакі В5 штам Faulkner, Коксакі В6 штам Hammon; віруси ЕСНО: ЕСНО 4 штам Du Toit, ЕСНО 9 штам Vispo, ЕСНО 11 штам Gregory, ECHO 19 штам Burke, ЕСНО 21 штам Farime, ЕСНО 33 штам Toluca-3. Виділення вірусів із органів і тканин експериментальних тварин, а також із матеріалів, отриманих в ході параклінічних досліджень, проводили шляхом підготовки суспензії в середовищі 199 з наступним триразовим заморожуванням-розморожуванням для вивільнення вірусів з клітин, центрифугуванням, обробкою надосадової рідини діетиловим ефіром для деконтамінації та визначенням наявності вірусів шляхом інфікування відповідних культур клітин. Визначення типової належності вірусів, виділених із клінічного матеріалу, проводили в реакції нейтралізації вірусів із використанням діагностичних сироваток до вірусів поліомієліту І-ІІІ типів, вірусів Коксакі В 1-6 типів та ЕСНО 1-34 типів (виробництва Інституту поліомієліту та вірусних енцефалітів ім. Генетичний варіант Абент-є значно більш вірулентним для вагітних мишей у порівнянні із варіантом Абент , спричиняючи більш важкий перебіг захворювання, що закінчується летально для 68,7% вагітних самок, тоді як варіант Абент того ж вірусу обумовлює загибель лише 6,3% тварин (табл. На сьомий день після інфікування на І тижні вагітності вірус виявляли лише в печінці, підшлунковій залозі, селезінці та мязах кінцівок, тоді як на ІІІ тижні вагітності - в усіх органах.У роботі вирішено актуальну наукову проблему - встановлено закономірності внутрішньоутробної ентеровірусної інфекції, доведено підвищення чутливості до ентеровірусів під час вагітності, виявлено фактори, що визначають особливості перебігу ентеровірусної інфекції вагітних, показано здатність до вертикальної передачі ентеровірусів різних груп, вивчено особливості патогенезу ентеровірусної інфекції плода, зясовано роль ентеровірусів та їхніх генетичних варіантів у патології плода та новонароджених і особливе значення варіанту Абент-у формуванні цих процесів, проведено патогенетичне обґрунтування можливостей специфічної профілактики та корекції біохімічних порушень при Коксакі В інфекції вагітних. У ході експериментальних досліджень показано, що вагітність підвищує чутливість до ентеровірусної інфекції. Вагітність призводить до зростання рівня смертності у 2,4 рази та захворюваності - у 2,7 рази, підвищення інтенсивності та тривалості репродукції ентеровірусів в організмі самок. Характер перебігу ентеровірусної інфекції у вагітних визначається стадією гестації, генетичними особливостями макроорганізму, віком тварин та інфікуючою дозою. Ембріо-та фетопатогенність Коксакі В вірусів переважно асоційована з генетичним варіантом Абент-, який викликає загибель 91,2% плодів і новонароджених мишенят, у той час як варіант Абент - 30,3%.

2. Основний зміст роботи

У роботі вирішено актуальну наукову проблему - встановлено закономірності внутрішньоутробної ентеровірусної інфекції, доведено підвищення чутливості до ентеровірусів під час вагітності, виявлено фактори, що визначають особливості перебігу ентеровірусної інфекції вагітних, показано здатність до вертикальної передачі ентеровірусів різних груп, вивчено особливості патогенезу ентеровірусної інфекції плода, зясовано роль ентеровірусів та їхніх генетичних варіантів у патології плода та новонароджених і особливе значення варіанту Абент- у формуванні цих процесів, проведено патогенетичне обґрунтування можливостей специфічної профілактики та корекції біохімічних порушень при Коксакі В інфекції вагітних.

1. У ході експериментальних досліджень показано, що вагітність підвищує чутливість до ентеровірусної інфекції. Здатність до розмноження в органах вагітних мишей проявляють ентеровіруси різних груп, у тому числі атенуйовані віруси поліомієліту. Вагітність призводить до зростання рівня смертності у 2,4 рази та захворюваності - у 2,7 рази, підвищення інтенсивності та тривалості репродукції ентеровірусів в організмі самок.

2. Провідна роль у патогенезі експериментальної інфекції вагітних належить біологічним властивостям збудника. Найбільшу чутливість вагітні миші проявляють до вірусів Коксакі В, а найменшу - до атенуйованих вірусів поліомієліту. Вірулентність генетичного варіанту Абент- вірусу Коксакі В3 в 11 разів вища, ніж варіанту Абент . Він інтенсивніше розмножується у внутрішніх органах (титри на 2 lg вищі) та здатен до тривалої персистенції (Абент- знаходиться в організмі до двадцятої доби, Абент - до третьої).

3. Характер перебігу ентеровірусної інфекції у вагітних визначається стадією гестації, генетичними особливостями макроорганізму, віком тварин та інфікуючою дозою. Із збільшенням терміну вагітності чутливість зростає, досягаючи максимуму на останньому тижні. Різні генетичні лінії мишей неоднаково реагують на інфікування ентеровірусами. Старіння підвищує резистентність тварин до ентеровірусної інфекції. Зі збільшенням інфікуючої дози вірусу пропорційно зростає смертність та захворюваність.

4. Можливість реалізації захисної функції плаценти при ентеровірусній інфекції значною мірою залежить від біологічних властивостей збудника та терміну вагітності. Віруси поліомієліту долають плацентарний барєр у 54,2% випадків, Коксакі В3 вихідної популяції - у 64,7%, варіант Абент- - у 97,2%, Абент - у 13,6%. Наприкінці вагітності здатність вірусів до проходження крізь плаценту зростає.

5. Атенуйовані віруси поліомієліту, віруси Коксакі В та ЕСНО здатні до вертикальної передачі. Факторами, що визначають особливості перебігу експериментальної ентеровірусної інфекції плода, є ступінь зрілості зародка, інфікуюча доза та генетичні особливості вірусу. Можливими наслідками внутрішньоутробного інфікування є загибель ембріона або плода, мертвонародження, поява нежиттєздатного потомства, гіпотрофія та розвиток імунологічної толерантності. Ембріо- та фетопатогенність Коксакі В вірусів переважно асоційована з генетичним варіантом Абент-, який викликає загибель 91,2% плодів і новонароджених мишенят, у той час як варіант Абент - 30,3%.

6. Вперше показано, що віруси Коксакі В та поліомієліту у клітинах плода спричиняють виникнення хромосомних аберацій, які проявляються появою полі- та анеуплоїдних клітин, розривами хромосом, передчасним розходженням хромосом на хроматиди. Хромосомні порушення мають тимчасовий характер, їхні вираженість та тривалість визначаються біологічними властивостями збудника. Коефіцієнт перевищення контрольного рівня хромосомних аберацій для вірусів Коксакі В3 становить 2,3; вірусів Коксакі В1 - 2,1; для поліовірусів - 1,84; для варіанту Абент- та Абент Коксакі В3 - 3,1 та 1,45 рази відповідно.

7. В експерименті вперше встановлено, що в організмі вагітних при ентеровірусній інфекції мають місце порушення метаболізму ліпідів, що проявляється зниженням вмісту загальної суми поліненасичених жирних кислот у мембранах в 1,3 рази, переважно за рахунок w-3 ПНЖК та виникнення негативного співвідношення w-3 та w-6 ПНЖК.

8. Вперше на патогенетичних засадах експериментально обґрунтовано можливість успішної специфічної профілактики Коксакі В внутрішньоутробної вірусної інфекції із застосуванням інактивованої вакцини та корекції порушень метаболізму ліпідів за допомогою препарату Теком, який містить w-3 та w-6 ПНЖК. Імунізація попереджує розвиток Коксакі В3 вірусної інфекції, що проявляється у статистично достовірному зменшенні кількості вірусів у тканинах плодів до 74 разів. У мишей на фоні застосування препарату Теком відновлюється ліпідний склад мембран, а інтенсивність репродукції Коксакі В3 вірусів у тканині плодів зменшується у понад 20 разів.

9. Одним з провідних факторів, що зумовлюють характер перебігу ентеровірусної інфекції, є термін вагітності. Експериментально доведено, що чутливість вагітних і плодів до ентеровірусної інфекції та вираженість хромосомних порушень зростає зі збільшенням терміну вагітності, досягаючи максимуму наприкінці гестації. Це проявляється, з одного боку, більш тривалою персистенцією Коксакі В вірусів в організмі самок, інфікованих на ІІІ тижні, з іншого, - загибеллю вагітних мишей та їхнього потомства, порівняно з інфікованими на І та ІІ тижні. Летальність плодів у самок, інфікованих на ІІІ тижні вагітності вірусом Коксакі В3, становить 59,0%, інфікованих на початку гестації - 48,5%.

10. Параклінічними дослідженнями підтверджено здатність різних типів ентеровірусів проникати крізь плаценту і розмножуватися в організмі ембріонів та плодів людини на всіх етапах внутрішньоутробного розвитку. Інфікованість ентеровірусами при ранніх штучних абортах становить 1,7%, при пізніх абортах - 2,6%, у мертвонароджених - 12,5%, у дітей, що померли у ранньому неонатальному періоді - 11,8%, у новонароджених з вродженими патологіями - 5,8%. З інфікованістю ентеровірусами асоційовані порушення з боку дихальної системи у новонароджених, гіпотрофія, вади розвитку.

11. Переважна частина вірусів, виділених від зародків, новонароджених та їхніх матерів, належать до вірусів поліомієліту. З 30 досліджених обєктів 61,3% інфіковано ВПМ ІІІ типу, 29,0% - ВПМ ІІ типу, 9,7% - ВПМ І типу. Інфікування відбувається на фоні відсутності в Україні протективного рівня антитіл до поліовірусу ІІІ типу у 33,8% осіб, які досягли фертильного віку, до ВПМ ІІ типу - у 15,8%, до ВПМ І типу - у 16,6%.

1. Павленко Л.В., Евтушенко А.И., Широбоков В.П. Влияние Коксаки-вирусной инфекции на хромосомный аппарат клеток плодов и новорожденных мышей // Микробиологический журнал. - 1992. - т. 54, №5. - С. 59-62 (здобувачем здійснювалось моделювання інфекції та визначались хромосомні аберації, проводився порівняльний аналіз хромосомних порушень та репродукції вірусів).

2. Бойко В.І., Євтушенко О.І., Артамонов, В.С., Широбоков В.П. Особливості перебігу вагітності та пологів при інфікуванні ентеровірусно-бактеріальними асоціаціями // Педіатрія, акушерство, гінекологія. - 1993.- №5-6. - С. 35-38 (здобувачем проводилось виділення вірусів із клінічного матеріалу, кореляційний аналіз ентеровірусної інфекції та патології вагітності).

3. Євтушенко О.І., Бойко В.І., Широбоков В.П., Артамонов В.С. Ентеровіруси при невиношуванні вагітності // Педіатрія, акушерство, гінекологія. - 1994. - №1. - С. 57-58 (здобувачем проводилось виділення вірусів із клінічного матеріалу, кореляційний аналіз ентеровірусної інфекції при невиношуванні вагітності, підготовлено роботу до публікації).

4. Євтушенко О.І., Широбоков В.П., Корнюшенко О.М., Ахрамєєва Н.В. Експериментальне обґрунтування профілактики внутрішньоутробної Коксаки В вірусної інфекції // Довкілля і здоровя. - 2004. - Т. 31, №4. - С. 63-67 (здобувачем виготовлено інактивовану Коксакі В вірусну вакцину та визначено рівні накопичення вірусів у вагітних мишей при її застосуванні).

5. Євтушенко О.І. Порівняльна чутливість клітинних культур до ентеровірусів // Лабораторна діагностика. - 2004. - №4. - С. 42-46

6. Євтушенко О.І., Широбоков В.П., Корнюшенко О.М., Ахрамєєва Н.В., Кротенко О.В. Роль вірусів Коксаки в розвитку ускладнень вагітності та патології новонароджених (за даними серологічних досліджень) // Журнал Академії медичних наук України. - 2004. - №4. - С. 746-755 (здобувачем визначено звязок між перебігом вагітності та станом плода і наявністю та титром антитіл до вірусів Коксакі В, підготовлено роботу до публікації).

7. Широбоков В.П., Євтушенко О.І., Кротенко О.В., Брюзгіна Т.С. Порушення метаболізму жирних кислот при експериментальній Коксаки В вірусній внутрішньоутробній інфекції // Вісник проблем біології і медицини. - 2004. - вип. 4. - С. 60-66 (здобувачем здійснено моделювання внутрішньоутробної інфекції та підготовлено матеріали для біохімічних досліджень).

8. Євтушенко О.І. Особливості патогенезу експериментальної внутрішньоутробної ентеровірусної інфекції // Інфекційні хвороби. - 2005. - №1. - С. 56-59.

9. Євтушенко О.І. Генетичні маркери вірулентності для диференціації вірусів поліомієліту // Довкілля та здоровя. - 2005. - №3. - С. 25-28.

10. Євтушенко О.І. Поліовіруси у плода та новонароджених // Довкілля та здоровя. - 2005. - №4. - С. 18-20.

11. Євтушенко О.І. Роль ентеровірусів у перинатальній патології // Український медичний часопис. - 2005. - т. 48, №4. - С. 105-108.

12. Євтушенко О.І. Материнські фактори та внутрішньоутробна ентеровірусна інфекція // Здоровье женщины. - 2005.- т.24, №4. - С.41-42.

13. Євтушенко О.І. Ентеровіруси в антенатальному періоді // Перинатология и педиатрия. - 2005. - т. 24, №4-5. - С. 29-32.

14. Євтушенко О.І., Ніколаєнко І.В., Ахрамєєва Н.В. Діагностика антенатальної та неонатальної ентеровірусної інфекції з використанням ПЛР // Лабораторна діагностика. - 2005. - т. 34, №4. - С. 21-24 (здобувач проводив організацію дослідження, аналіз отриманих результатів та формулювання висновків щодо ефективності різних лабораторних методів діагностики).

15. Євтушенко О.І., Приходько Є.Ф. Профілактика поліомієліту та внутрішньоутробна ентеровірусна інфекція // Современная педиатрия. - 2005. - т. 9, №4. - С. 119-120 (здобувачем проведено аналіз та узагальнення даних щодо колективного імунітету до поліомієліту в Україні та визначено звязок із поширеністю поліовірусів при внутрішньоутробному інфікуванні, підготовлено роботу до публікації).

16. Євтушенко О.І., Широбоков В.П. Моделювання Коксаки В вірусної інфекції у вагітних мишей // Доповіді Національної академії наук України. - 2005. - №4. - С. 175-180 (здобувачем визначені фактори, що обумовлюють особливості патогенезу інфекції у вагітних в експерименті та підготовлено роботу до публікації).

17. Євтушенко О.І., Широбоков В.П., Павленко Л.В. Вірусіндуковані порушення хромосомного апарату // Біополімери і клітина. - 2005. - т. 21, №5. - С. 454-457 (здобувачем визначено звязок біологічних властивостей ентеровірусів та характеру хромосомних порушень, підготовлено матеріали до публікації).

18. Широбоков В.П., Євтушенко О.І., Кротенко О.В., Брюзгіна Т.С. Вплив ентеровірусів на вміст жирних кислот у фібробластах ембріонів людини // Мікробіологічний журнал. - 2005. - т. 67, №6. - С. 79-87 (здобувачем проводилось отримання ембріональних клітин та моделювання вірусної інфекції клітин, підготовлено роботу до публікації).

19. Широбоков В.П., Євтушенко О.І., Кротенко О.В., Брюзгіна Т.С. Патогенетичне обґрунтування застосування w-3 ПНЖК для корекції порушень метаболізму ліпідів при Коксаки В3 внутрішньоутробній інфекції (експериментальні дослідження) // Педіатрія, акушерство, гінекологія. - 2005. - №3. - С. 5-11 (здобувачем визначено динаміку вірусної репродукції в організмі експериментальних тварин при застосуванні Текому, підготовлено роботу до публікації).

20. Євтушенко О.І., Некрасова Л.С., Приходько Є.Ф. Ентеровіруси у навколишньому середовищі та серед людей // Довкілля та здоровя. - 2006. - №3. - С. 66-69 (здобувачем проведено узагальнення та аналіз матеріалів щодо циркуляції ентеровірусів в Україні та визначено звязок із внутрішньоутробним інфікуванням, підготовлено роботу до публікації).

21. Євтушенко О.І. Особливості перебігу експериментальної ентеровірусної інфекції на різних етапах вагітності // Перинатология и педиатрия. - 2006. - №3. - С. 84-88.

Размещено на .ru