Дослідження властивостей Мg2 , АТР-залежної Са2 -помпи в ендоплазматичному ретикулумі гладеньком"язових клітин міоцитів матки. Чутливість компоненти до дії різноманітних інгібіторів, обмінників й іонів металів. Вивчення впливу окситоцину на Са2 -помпу.
При низкой оригинальности работы "Енергозалежний транспорт Са2 в ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Мета: у дослідах, проведених з використанням ізотопного (45Са2 ) методу на оброблених розчином дигітоніну ГМК матки естрогенізованих невагітних щурів, ідентифікувати Са2 -помпу ЕР клітин міометрію, вивчити її кінетичні властивості та чутливість до дії окситоцину. Дослідити властивості Mg2 , АТР-залежної Са2 -помпи ЕР міоцитів матки - спорідненість до реагентів (АТР, Mg2 ), субстратну та катіонну специфічність, чутливість до дії двовалентних катіонів та класичних інгібіторів мембранозвязаних Са2 -помп. Вперше у комплексних дослідах, що були проведені з використанням ізотопного (45Са2 ) методу на суспензії клітин міометрію, оброблених розчином дигітоніну, ідентифікована та систематично вивчена компонента Mg2 , АТР-залежного накопичення Са2 , що є нечутливою до дії інгібітора акумуляції Са2 в мітохондріях (МХ) рутенієвого червоного і відображає функціонування Са2 -помпи ЕР ГМК матки. У теоретичному відношенні вищенаведені дані розширюють сучасні уявлення щодо властивостей Mg2 , АТР-залежної Са2 -помпи ЕР клітин міометрію і вказують на важливу роль цієї Са2 -транспортуючої системи як фактора окситоцинчутливого позитивного зворотного звязку, спрямованого на підтримання підвищеної концентрації йонів Са у клітинах матки. Незалежно від концентрації дигітоніну (0,02-0,2 мг/мл) в інкубаційному середовищі, селективний інгібітор Са2 -помпи Е(С)Р терпеновий лактон тапсигаргін [Sagara Y. and Inesi G., 1991; Lytton J. et al., 1991], що був використаний у концентрації 50 НМ, повністю пригнічував акумуляцію Са2 в міоцитах (рис.1, графік 2).У дослідах, проведених на суспензії клітин міометрію невагітних естрогенізованих щурів, показано, що оптимальна концентрація дигітоніну, при котрій спостерігається нечутливе до дії рутенієвого червоного Mg2 , АТР-залежне накопичення Са2 у внутрішньоклітинному немітохондріальному кальцієвому депо, становить 0,05-0,1 мг/мл. Доведено, що нечутливе до дії рутенієвого червоного накопичення Са2 у пермеабілізованих клітинах міометрію потенціюється оксалатом і фосфатом, запобігається кальцієвим йонофором А 23187 та інгібується тапсигаргіном і циклопіазонієвою кислотою і, відповідно, є проявом функціональної активності Mg2 , АТР-залежної Са2 -помпи ендоплазматичного ретикулуму. Залежності початкової швидкості накопичення Са2 в ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію від концентрації АТР та Mg2 характеризуються насиченням. Катіони двовалентних металів неспецифічно пригнічували Mg2 , АТР-залежне накопичення Са2 в ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію. Інгібітори енергозалежних мембранозвязаних Са2 -транспортуючих систем з різним ступенем ефективності пригнічували Mg2 , АТР-залежну Са2 -помпу ендоплазматичного ретикулуму клітин міометрію.
Вывод
1. У дослідах, проведених на суспензії клітин міометрію невагітних естрогенізованих щурів, показано, що оптимальна концентрація дигітоніну, при котрій спостерігається нечутливе до дії рутенієвого червоного Mg2 , АТР-залежне накопичення Са2 у внутрішньоклітинному немітохондріальному кальцієвому депо, становить 0,05-0,1 мг/мл.
2. Доведено, що нечутливе до дії рутенієвого червоного накопичення Са2 у пермеабілізованих клітинах міометрію потенціюється оксалатом і фосфатом, запобігається кальцієвим йонофором А 23187 та інгібується тапсигаргіном і циклопіазонієвою кислотою і, відповідно, є проявом функціональної активності Mg2 , АТР-залежної Са2 -помпи ендоплазматичного ретикулуму.
3. Залежності початкової швидкості накопичення Са2 в ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію від концентрації АТР та Mg2 характеризуються насиченням. У присутності 10 ММ оксалату величини уявної константи Міхаеліса Км по АТР та константи активації Ка по Mg2 становлять відповідно 1,0 і 0,6 ММ і є фізіологічно значимими.
4. Для Mg2 , АТР-залежної Са2 -помпи ендоплазматичного ретикулуму клітин міометрію не властива абсолютна катіонна специфічність щодо йонів Mg. Йони Mn i Co можуть замінювати йони Mg у забезпеченні АТР-залежного накопичення Са2 . При заміні Mg2 на Ni2 , Zn2 i Cu2 акумуляція Са2 у цій субклітинній структурі не спостерігалась.
5. Катіони двовалентних металів неспецифічно пригнічували Mg2 , АТР-залежне накопичення Са2 в ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію. Ступінь гальмівного ефекту зменшувався у ряду: Cu2 " Zn2 " Ni2 = Mn2 = Co2 .
6. Інгібітори енергозалежних мембранозвязаних Са2 -транспортуючих систем з різним ступенем ефективності пригнічували Mg2 , АТР-залежну Са2 -помпу ендоплазматичного ретикулуму клітин міометрію. У відповідності зі значеннями коефіцієнту інгібування К 0,5 інгібіторний ефект відповідає послідовності: тапсигаргін (К 0,5=0,9 НМ) " циклопіазонієва кислота (К 0,5=0,6 МКМ) » п-хлормеркурібензоат (К 0,5=0,6 МКМ) » еозин Y (К 0,5=0,8 МКМ) " о-ванадат (К 0,5=45,0 МКМ). Рутенієвий червоний (100 МКМ) не впливав на активність цієї помпи.
7. У ендоплазматичному ретикулумі клітин міометрію відсутня система Na -Ca2 -обміну. На користь цього свідчить той факт, що тапсигаргін і циклопіазонієва кислота повністю інгібували енергозалежне накопичення Са2 у цій субклітинній структурі і це накопичення не є чутливим до ізотонічної заміни К на Na у середовищі інкубації.
8. Mg2 , АТР-залежна Са2 -помпа ендоплазматичного ретикулуму клітин міометрію є чутлива до дії стимулятора скоротливої активності матки окситоцину (100 НМ), котрий на 25-30 % пригнічував активність цієї помпи.
Список литературы
1. Костерин С.А., Бабич Л.Г., Шлыков С.Г., Ровенец (Струтинская) Н.А. Mg2 , АТР-зависимый транспорт Са2 в эндоплазматическом ретикулуме клеток миометрия // Биохимия.- 1996.- Т.61, N 1.- С.73-81.
2. Шлыков С.Г., Бабич Л.Г., Ровенец (Струтинская) Н.А., Костерин С.А. Обработка окситоцином интактных клеток миометрия ингибирует Mg2 , АТР-зависимую аккумуляцию Са2 в эндоплазматическом ретикулуме // Укр. биохим. журн.- 1996.- Т.68, N 5.- С.25-34.
3. Костерин С.А., Браткова Н.Ф., Бабич Л.Г., Шинлова О.П., Слинченко Н.Н., Шлыков С.Г., Зимина В.П., Ровенец (Струтинская) Н.А., Веклич Т.А. Влияние ингибиторов энергозависимых Са2 -транспортирующих систем на кальциевые насосы гладкомышечной клетки // Укр. биохим. журн.- 1996.- Т.68, N 6.- С.5-61.
4. Бабич Л.Г., Костерин С.А., Шлыков С.Г., Ровенец (Струтинская) Н.А. Влияние тапсигаргина и циклопиазониевой кислоты на стимулируемую оксалатом (фосфатом) Mg2 , АТР-зависимую аккумуляцию Са2 в пермеабилизированных клетках миометрия // Доклады АН России.- 1995.- Т.345, N 2. - С.259-262.
5. Бабіч Л.Г., Шликов С.Г., Струтинська Н.А., Костерін С.О. Суспензія хімічно скінованих клітин - модель для вивчення Mg2 , АТР-залежної кальцієвої помпи ендоплазматичного ретикулуму // Тези доповідей VII Укр. біохім. зїзду (м. Київ).- вересень, 1997.- Ч.1.- С.34-35.
6. Шликов С.Г., Бабіч Л.Г., Струтинська Н.А. Обробка інтактних міоцитів окситоцином призводить до інгібування Mg2 , АТР-залежної кальцієвої помпи ендоплазматичного ретикулуму міометрію // Тези доповідей VII Укр. біохім. зїзду (м. Київ).- вересень, 1997. - Ч.1. - С.55-56.
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
