Підвищення ступеня збереженості ізольованої печінки щурів під час гіпотермічного зберігання та нормотермічної реперфузії шляхом підтримки енергетичного метаболізму та прооксидантно-антиоксидантного статусу. Обробка тварин цитозолем фетальних тканин.
При низкой оригинальности работы "Енергетичний та прооксидантно-антиоксидантний стан печінки щурів при гіпотермічному зберіганні та реперфузії", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Проте досліджень впливу розєднувачів окислювального фосфорилювання на енергетичний і прооксидантно-антиоксидантний стан ізольованої печінки щурів при ГЗ і реперфузії дотепер не проводилось. Мета і задачі дослідження: Мета роботи - оцінити особливості енергетичного та прооксидантно-антиоксидантного стану ізольованої печінки щурів при гіпотермічному зберіганні та нормотермічній реперфузії за умов попереднього уведення тваринам цитозоля фетальних тканин і модифікації консервуючого розчину. Вивчити вплив попередньої обробки тварин цитозолем фетальних тканин на рівень АТФ, дихальну активність ізольованих мітохондрій і активність ферментів, які беруть участь в обміні відновлювальних еквівалентів при гіпотермічному зберіганні ізольованої печінки щурів. Вивчити вплив розєднувача окислювального фосфорилювання 2,4-динітрофенолу (ДНФ) у складі консервуючого середовища на енергетичний і прооксидантно-антиоксидантний стан ізольованої печінки щурів при гіпотермічному зберіганні та нормотермічній реперфузії. Вивчити комбіновану дію попередньої обробки тварин цитозолем фетальних тканин і внесення до модифікованого середовища розєднувача окислювального фосфорилювання 2,4-динітрофенолу на енергетичний та прооксидантно-антиоксидантний стан ізольованої печінки щурів після гіпотермічного зберігання та нормотермічної реперфузії.Дослідження проводили згідно з вимогами Етичного комітету ІПКІК НАН України, розробленими відповідно до "Загальних принципів експериментів на тваринах", схвалених I Національним конгресом з біоетики (Київ, Україна, 2001) і погоджених з положеннями "Європейської конвенції з захисту хребетних тварин, що використовуються в експериментальних та інших дослідних цілях" (Страсбург, Франція, 1986). Для гіпотермічного зберігання печінку відмивали від крові та насичували консервуючим розчином через портальну вену in situ. Після закінчення перфузії до портальної вени вводили катетер, печінку ізолювали і переносили до консервуючого розчину. Рівень АТФ у печінці після її насичення консервуючим розчином (контроль) становив 5,38 ± 0,5 мкмоль АТФ/г тканини і після 1 год ГЗ знижувався на 40 % (р <0,05) Уведення ЦФТ (дослід) не впливало на вихідний рівень АТФ, але попереджало його зниження після ГЗ. Після 1 год ГЗ печінки в обох експериментальних групах спостерігалось достовірне підвищення швидкості дихання мітохондрій у стані 3 при окисленні як НАД-залежних субстратів, так і сукцинату.В дисертаційній роботі наведено теоретичне й експериментальне узагальнення, а також нове розвязання наукової проблеми, що стосується підвищення ступеня збереженості ізольованої печінки у ході гіпотермічного зберігання і реперфузії шляхом підтримки її енергетичного метаболізму і прооксидантно-антиоксидантного статусу за допомогою попередньої обробки тварин цитозолем фетальних тканин і модифікації консервуючого розчину. Попереднє уведення тваринам цитозоля фетальних тканин призводить до збільшення швидкості окислення мітохондріями сукцинату у стані 3 і 4 та вмісту АТФ після короткострокового гіпотермічного зберігання печінки протягом 1 год. Попередня обробка тварин цитозолем фетальних тканин стимулює у цитоплазмі клітин гліколіз і негліколітичні редокс-ферменти, про що свідчить активність окислювально-відновних ферментів, визначена за допомогою ALAMARBLUE-тесту в різних фракціях печінки у поєднанні з інгібіторним аналізом. Порівняльний аналіз енергетичного і прооксидантно-антиоксидантного стану печінки засвідчив, що модифікація сахарозо-вміщуючого розчину шляхом заміни трис-HCL буфера на фосфатний буфер, а бичачого сироваткового альбуміну на ПЕГ-8000 забезпечує високий ступінь збереженості органа як при короткостроковому (1 год), так і тривалому (18 год) ГЗ. Комбіноване застосування попередньої обробки тварин ЦФТ і доповнення консервуючого розчину ДНФ спричиняє адитивний ефект, який проявляється у додатковому зниженні рівня ТБК-активних продуктів, підвищенні рівня GSH і АТФ у печінці як на етапі ГЗ, так і після НР.
План
Основний зміст роботи
Вывод
В дисертаційній роботі наведено теоретичне й експериментальне узагальнення, а також нове розвязання наукової проблеми, що стосується підвищення ступеня збереженості ізольованої печінки у ході гіпотермічного зберігання і реперфузії шляхом підтримки її енергетичного метаболізму і прооксидантно-антиоксидантного статусу за допомогою попередньої обробки тварин цитозолем фетальних тканин і модифікації консервуючого розчину.
1. Попереднє уведення тваринам цитозоля фетальних тканин призводить до збільшення швидкості окислення мітохондріями сукцинату у стані 3 і 4 та вмісту АТФ після короткострокового гіпотермічного зберігання печінки протягом 1 год.
2. Попередня обробка тварин цитозолем фетальних тканин стимулює у цитоплазмі клітин гліколіз і негліколітичні редокс-ферменти, про що свідчить активність окислювально-відновних ферментів, визначена за допомогою ALAMARBLUE-тесту в різних фракціях печінки у поєднанні з інгібіторним аналізом. Показано збільшення активності малатдегідрогенази і гліцеролкінази - ферментів, що приймають участь у переносі відновних еквівалентів у мітохондрії.
3. Порівняльний аналіз енергетичного і прооксидантно-антиоксидантного стану печінки засвідчив, що модифікація сахарозо-вміщуючого розчину шляхом заміни трис-HCL буфера на фосфатний буфер, а бичачого сироваткового альбуміну на ПЕГ-8000 забезпечує високий ступінь збереженості органа як при короткостроковому (1 год), так і тривалому (18 год) ГЗ.
4. Присутність у середовищі зберігання розєднувача окислювального фосфорилювання ДНФ на етапі тривалого ГЗ печінки спричиняє зниження базального рівня ТБК-активних продуктів, а також збільшення активності каталази і глутатіонпероксидази.
5. Після НР позитивний ефект ДНФ на прооксидантно-антиоксидантний стан печінки зберігається та додатково проявляється у зниженні іонної проникності внутрішньої мембрани мітохондрій (швидкості дихання V4) і збільшенні ДК, що сприяє підвищенню рівня АТФ.
6. Комбіноване застосування попередньої обробки тварин ЦФТ і доповнення консервуючого розчину ДНФ спричиняє адитивний ефект, який проявляється у додатковому зниженні рівня ТБК-активних продуктів, підвищенні рівня GSH і АТФ у печінці як на етапі ГЗ, так і після НР.
Перелік робіт, опублікованих за темою дисертації
1. Петренко О.Ю., Черкашина Д.В., Сомов О.Ю., Семенченко О.А., Ткачова О.М., Фуллер Б.Д. Експериментальне обґрунтування застосування консервуючих розчинів при трансплантації печінки // Трансплантологія. - 2004. - Т. 7, № 4. - С. 167 - 169.
2. Черкашина Д.В., Ткачева Е. Н., Сомов А.Ю., Семенченко О.А., Петренко А.Ю., Фуллер Б. Дж. Перспективы применения биорегуляторов стволовых клеток при трансплантации печени // Проблемы криобиологии. - 2005. - Т. 15, № 3. - С. 389 - 392.
3. Petrenko Yu. A., Gorokhova N. A., Tkachova E. N., Petrenko A. Yu. The reduction of Alamar Blue by peripheral blood lymphocytes and isolated mitochondria // Укр. Біохім. журн. - 2005. - Vol. 77, № 5. - P. 100 - 105.
4. Черкашина Д.В., Ткачова О.М., Сомов О.Ю., Лебединський О.С., Семенченко О.А., Грищенко В. І., Петренко О.Ю. Прооксидантно-антиоксидантний баланс у печінці щурів після холодової ішемії в присутності 2,4-динітрофенолу та наступної реперфузії // Доповіді НАН України. - 2007. - № 10. - С. 168 - 173.
5. Черкашина Д.В., Петренко А.Ю., Ткачева Е. Н., Сомов А.Ю., Семенченко О.А., Сосимчик И.А., Лебединский А.С. Сочетание различных экспериментальных подходов к продлению сроков гипотермического хранения печени для трансплантации // Трансплантология. - 2007. - Т. 9, № 1. - С. 306 - 308.
6. Ткачева Е. Н., Семенченко О.А., Сомов А.Ю., Петренко А.Ю. Энергетическое состояние печени крыс при краткосрочном гипотермическом хранении // Проблемы криобиологии. - 2007. - Т. 17, № 1. - С. 38 - 43.
8. Petrenko A. Yu., Cherkashina D. V., Semenchenko O. A., Somov A. Yu., Tkacheva E. N. Fetal-specific factor pretreatment attenuates rat liver damage during organ hypothermic storage and following reperfusion // Abstracts of the 41th Annual Meeting of the Society for Cryobiology. - Beijing, 2004. - Р. 147.
9. Ткачева Е. Н., Сомов А.Ю., Петренко А.Ю. Использование функциональных параметров митохондрий для оценки сред гипотермического хранения печени // Тези доповідей І Української наукової конференції "Проблеми біологічної і медичної фізики" (20 - 22 вересня 2004). - Харків, 2004. - С. 170.
10. Tkacheva E. N. The mechanisms of ATP generation during short-term liver hypothermic preservation after rat preconditioning with fetal-specific factors // Матеріали конференції молодих учених ІПКІК НАН України "Холод у біології та медицині". Проблеми кріобіології. - Харків. - 2005. - Т. 15, № 4. - С. 722.
11. Ткачева Е. Н., Черкашина Д.В., Семенченко О.А., Петренко А.Ю. Влияние эмбриоспецифических факторов на энергетическое состояние печени при гипотермическом хранении // Матеріали ІХ Українського біохімічного зїзду. - Харків. - 2006. - Т. 1. - С.185 - 186.
12. Petrenko A. Yu., Cherkashina D. V., Tkacheva E. N., Semenchenko O. A., Somov A. Yu., Lebedinsky A. S., Fuller B. J. Supplementation of medium with an uncoupler of oxidative phosphorylation reduces liver damage during hypothermic storage and reperfusion in a rat model // Abstracts of the 43rd Annual Meeting of the Society for Cryobiology and Society for Low Temperature Biology. - Hamburg, 2006. - P. 119.
13. Semenchenko O. A., Cherkashina D. V., Tkacheva E. N., Lebedinsky A. S., Fuller B. J., Petrenko A. Yu. Sucrose-based preservation solution modified by PEG-8000 for cold storage of isolated rat liver // Abstracts of the 43rd Annual Meeting of the Society for Cryobiology and Society for Low Temperature Biology. - Hamburg, 2006. - P. 121.
14. Cherkashina D. V., Tkacheva E. N., Semenchenko O. A., Somov A. Yu., Fuller B. J., Petrenko A. Yu. Pretreatment with fetal-specific factors positively affects rat liver metabolic activity after short-term cold storage // Abstracts of the 43rd Annual Meeting of the Society for Cryobiology and Society for Low Temperature Biology. - Hamburg, 2006. - P. 129.
15. Горохова Н.А., Петренко Ю.А., Ткачева Е. Н., Петренко А.Ю. Изучение активности метаболических процессов в клетках по восстановлению ресазурина // Матеріали ІХ Українського біохімічного зїзду. - Харків, 2006 - Т. 1. - С.117.
16. Cherkashina D. V., Somov A. Yu., Tkacheva E. N., Semenchenko O. A., Lebedinsky A. S., Petrenko A. Yu. Combined effect of pretreatment and 2,4-dinitrophenol on liver prooxidant/antioxidant state during cold storage/warm reperfusion // Acta Biochimica Polonica. - 2007. - Vol. 54, Suppl. 2. - P. 38.
17. Petrenko A. Yu., Cherkashina D. V., Somov A. Yu., Tkacheva E. N. Two approaches to reduce cold ischemia-reperfusion liver damage // Abstracts of the 6th Parnas conference "Molecular mechanisms of cellular signaling" (Krakow, Poland, May 30th- June 2nd // Acta Biochimica Polonica. - 2007. - Vol. 54, Suppl. 2. - P. 36.
18. Petrenko A. Yu., Cherkashina D. V., Tkacheva E. N., Somov A. Yu., Semenchenko O. A., Lebedinsky A. S., Fuller B. J. New approaches to reduce liver damage after hypothermic storage and reperfusion in rat model // Abstracts of the 44th Annual Meeting of the Society for Cryobiology. - Canada, 2007. - P. 47.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
