Диагностика мутаций гена BRCA1 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в лечении рака молочной железы - Дипломная работа

Наиболее часто в клинической практике врачи обращаются к биохимическим методам, которые позволяют оценить состояние организма и/или отдельных органов, но, к сожалению, эти методы не дают точной и ранней информации о развитии заболевания. ПЦР в реальном времени - это метод диагностики, который позволяет проверить генетический материал, экстрагированный из исследуемого клинического образца, на наличие в его составе участка чужеродной или измененной генетической информации. Большим преимуществом ПЦР метода является то, что для анализа требуется ДНК, содержащаяся в клетках организма и поэтому для ПЦР анализа можно брать любую ткань. Одним из анализов является выявление мутации в гене BRCA1, которая приводит к развитию рака молочной железы и раку яичника. В мире ежегодно выявляется более одного миллиона случаев рака молочной железы, а в РФ свыше 5·103 случаев [Гарин, 2006].Полимеразная цепная реакция - метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определенных фрагментов ДНК в биологическом материале (пробе). Помимо амплификации ДНК, ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с нуклеиновыми кислотами (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК) и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, выделения новых генов. Метод ПЦР основан на многократном избирательном копировании определенного участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). ПЦР в реальном времени (или количественная ПЦР, англ. real-time PCR) - лабораторный метод , основанный на методе полимеразной цепной реакции , используется для одновременной амплификации и измерения количества данной молекулы ДНК . Метод включает в себя одновременно детекцию и количественное определение (измерение непосредственно количества копий, либо измерение копий относительно внесенной ДНК или дополнительных калибровочных генов) специфической последовательности ДНК в образце.Ген BRCA1 - ген-супрессор, ответственный за развитие рака молочной железы , кодирует белок из 1863 аминокислотных остатков. Сходство этого белка с другими известными белками минимально, однако, изучение структуры белка помогло выделить несколько областей конкретного функционального значения (домены): - RING домен (или цинк-связывающий домен); BRCT домены (состоят из двух BRCT-N и BRCT-C доменов) гомология между геном BRCA1 человека и его мышиным аналогом составляет только 58%; низкое сходство указывает на быструю эволюцию этого гена. Несмотря на низкую консервативность гена в эволюции, BRCA1 имеет две высоко консервативные последовательности - RING домен на N-конце и BRCT домен на С-конце. В данном гене происходит делеция (выпадение) нуклеотида С, что приводящая к сдвигу рамки считывания и появления стоп-кодона: wt 5’-AAGCGAGCAAGAGAATTCCAG-3’ mut 5’-AGCGAGCAAGAGAATTCCCA-3’Большое значение в диагностике рака молочной железы получил рентгенологический метод исследования - бесконтрастная маммография [Farooq, Walker, Bowling, 2010]. Она проводится с целью уточнения размеров, характера роста опухоли, выявления инфильтративного компонента рака. Наиболее часто (около 68%) встречается спорадический рак молочной железы, характеризующийся отсутствием злокачественных новообразований в семье. Наследственный, или генетически детерминированный рак молочной железы является следствием терминальных мутаций в генах предрасположенности, передающихся из поколения в поколение (5-15%) [Карпухин, Поспехова, Любченко, 2002]. На молекулярном уровне измена структуры гена BRCA1 объясняет восприимчивость к мутациям, что приводят к возникновению рака молочной железы или рака яичников.В Краснодарском крае приказом департамента здравоохранения на базе ГБУЗ «Клинический онкологический диспансер № 1» был организован Краевой маммологический центр на функциональной основе для обеспечения эффективной своевременной диагностики заболеваний молочных желез у женщин [Галуев, Шелякина, Мхитарьян, 2005]. С целью уточнения диагноза и дифференциальной диагностики с другим и заболеваниями в ходе проведения «Онкопатруля» большинству осмотренных были выполнены дополнительные методы исследования - маммография и ультразвуковое исследование. Подозрения на злокачественные новообразования молочных желез обнаружены в 0,6% случаев (129 человек) от всех обследованных женщин. Заболеваемость злокачественными новообразованиями молочной железы среди женщин Кубани снизилась с 82,1 до 77,2 % (на 100 тысяч женщин) в 2011 г.Материалом исследования нашей работы являлась кровь, взятая у пациенток страдающих раком молочной железы и раком яичников. Выборку вошли женщины больные раком молочной железы и раком яичников, разделили на две группы с учетом возрастных категорий: первая группа от 25 до 40 лет (14 человек), вторая группа от 41 до 90 лет (58 человек). Выборка составляла в количестве 72 больных раком молочной железы и раком яичника в возрасте от 25 до 90

СОДЕРЖАНИЕ

Введение

1. Аналитический обзор

1.1 Метод ПЦР в реальном времени

1.2 Действие генов-супрессоров на формирование опухолевого процесса

1.3 Наследственные формы рака молочной железы и рака яичника

1.4 Профилактика развития рака молочной железы в Краснодарском крае

2. Материал и метод исследования

2.1 Материал исследования

2.2 Исследование мутации методом ПЦР

2.3 Статистические методы и программы

3. Диагностика мутаций гена BRCA1 методом ПЦР в лечении рака молочной железы

Заключение

Библиографический список

ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ПЦР - полимеразная цепная реакция