Исследование цитоморфологического полиморфизма, характеристика клинических изолятов Trichomonas vaginalis. Оценка фагоцитарной активности различных цитоморфологических форм трихомониаза. Оптимизация методики криоконсервации T. vaginalis, ее эффективность.
При низкой оригинальности работы "Диагностическое значение цитоморфологических, культуральных и иммуногенных свойств Trichomonas vaginalis", Вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100%
Экспериментально обоснованные оптимальные составы питательной среды TYM с внесением сыворотки крупного рогатого скота, а также клеточной линии MDCK, позволяют накапливать максимальные концентрации T. vaginalis округлого морфотипа на ранних сроках культивирования, что повышает чувствительность лабораторной диагностики трихомониаза. Исследования проводились в период с 2006-2009 гг. Культуры T. vaginalis получали из клинического материала пациентов, обращавшихся с жалобами на урогенитальные расстройства в клиники Санкт-Петербурга: кожно-венерологические диспансеры (КВД) №3, №4; Ленинградский областной КВД; клинику кожных и венерических болезней Военно-медицинской академии им. Для культивирования и выделения T. vaginalis использовали модифицированный вариант питательной среды TYM с добавлением лошадиной сыворотки (Биолот, С.-Петербург), сыворотки крупного рогатого скота (Биолот, С.-Петербург), сыворотки человека и эмбриональной сыворотки коров (Биолот, С.-Петербург) и коммерческий вариант среды для выделения трихомонад (СВТ), производства отдела новых технологий НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Для моделирования инфекционного процесса in vitro и характеристики вирулентных форм применяли различные клеточные линии: Hep-2 - культура клеток карциномы гортани человека, L-41 - культура клеток лимфобластоидного происхождения, MDCK - культура клеток почки собаки, MA-104 - культура клеток почки эмбриона макаки-резус, культивированные по стандартным методикам (Адамс Р., 1983) в соответствии с рекомендациями соответствующего паспорта. При микроскопировании показано, что переход грушевидных клеток в округлые происходил в период накопления максимальных концентраций; на среде №5 практически сразу, на среде №1 - на 3-и сутки, на среде №3 - на 4-е, на среде №4 - на 5-е.При лабораторной диагностике трихомониаза микроскопическими и культуральными методами в большинстве случаев выделяются нетипичные округлые, неподвижные морфотипы T. vaginalis (74,9%). Применение фазово-контрастной микроскопии и дифференциально-интерференционного контраста позволяет дифференцировать все доступные цитоморфологические признаки округлого морфотипа, что повышает эффективность витальной микроскопии. Использование электронной микроскопии показало наличие деления у округлых морфотипов T. vaginalis, что свидетельствует об их принадлежности к одной из стадии жизненного цикла простейшего. При потере контакта данные формы переходят в округлые морфотипы, а полное разрушение монослоя индуцирует переход в грушевидный морфотип. Комбинация питательной среды TYM с сывороткой крупного рогатого скота и клеточной линией MDCK позволяет достичь максимальной концентрации T. vaginalis, что способствует повышению эффективности культуральной диагностики трихомониаза.
Вывод
1. При лабораторной диагностике трихомониаза микроскопическими и культуральными методами в большинстве случаев выделяются нетипичные округлые, неподвижные морфотипы T. vaginalis (74,9%). Применение фазово-контрастной микроскопии и дифференциально-интерференционного контраста позволяет дифференцировать все доступные цитоморфологические признаки округлого морфотипа, что повышает эффективность витальной микроскопии. Использование электронной микроскопии показало наличие деления у округлых морфотипов T. vaginalis, что свидетельствует об их принадлежности к одной из стадии жизненного цикла простейшего.
2. При взаимодействии типичных грушевидных морфотипов T. vaginalis с монослоем происходит переход в амебоидные морфотипы. При потере контакта данные формы переходят в округлые морфотипы, а полное разрушение монослоя индуцирует переход в грушевидный морфотип. В разработанной модели инфекционного процесса in vitro происходит воспроизведение нетипичных цитоморфологических форм T. vaginalis, являющихся активно размножающимися стадиями жизненного цикла.
3. Комбинация питательной среды TYM с сывороткой крупного рогатого скота и клеточной линией MDCK позволяет достичь максимальной концентрации T. vaginalis, что способствует повышению эффективности культуральной диагностики трихомониаза.
4. Наличие фагоцитарной активности доказывает жизнеспособность нетипичных округлых и амебоидных цитоморфологических форм T. vaginalis. При лабораторной диагностике трихомониаза должны учитываться все цитоморфологические формы клинических изолятов T. vaginalis.
5. Разработанная методика криоконсервации штаммов T. vaginalis позволяет создать банк референтных штаммов простейших, сохраняющих свои биологические свойства в течение 2-х лет, что необходимо для повышения качества лабораторной диагностики трихомониаза.
6. Иммуноферментная тест-система по обнаружению противотрихомонадных IGG-антител на основе цельноклеточного антигена T. vaginalis имеет общую чувствительность 30,3% и может использоваться только в качестве вспомогательного метода исследования. При острой форме трихомониаза ИФА имеет высокую чувствительность у женщин (91,7%), по сравнению с мужчинами, у которых этот показатель составляет 3,4%.
7. Трихомонадный антиген с молекулярной массой 50 КДА обладает наибольшей иммуногенностью и может быть рекомендован для стандартизации серологической диагностики трихомониаза путем введения его искусственного аналога в состав иммуносорбента.
Практические рекомендации
1. Результаты исследования предназначены для использования специалистами в области клинической лабораторной диагностики, микробиологии и дерматовенерологии в медицинских учреждениях.
2. Грушевидные, округлые и амебоидные морфотипы жизнеспособны и являются стадиями инфекционного процесса. При микроскопической диагностике трихомониаза необходимо учитывать все морфологические формы T. vaginalis
3. Для культуральной диагностики трихомониаза предпочтительно использовать питательную среду TYM, обогащенную сывороткой крупного рогатого скота, в связи с длительным поддержанием на ней округлых морфотипов.
4. Для повышения диагностической эффективности культуральной диагностики трихомониаза по выявлению нетипичных цитоморфологических форм T. vaginalis необходимо применять комбинацию клеточной линии MDCK и среды TYM с сывороткой крупного рогатого скота.
5. Криоконсервацию T. vaginalis целесообразно проводить при следующих условиях: очистка штаммов смесью антибиотиков (бензилпенициллина, стрептомицина, канамицина, линкомицина, гентамицина и амфотерицин В); многократное пассирование на монослое; помещение в криозащитную среду (30% сыворотки КРС, 5-7% ДМSО и 5% ростовой среды для культур клеток), стадийное замораживание от 200С до > -700С > -1960С и размораживание при 40.
Список литературы
Статьи в периодических научных изданиях, рекомендованных ВАК: 1. Раводин Р.А. Проблемы диагностики урогенитального трихомониаза / Р.А. Раводин, И.Н. Теличко, Н.В. Раздольская // Журн. акушерства и женских болезней. - 2004. - Т. LIII. - С. 129-130.
2. Теличко И.Н. Современные диагностические аспекты мочеполового трихомониаза / И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2006. - № 2. - С. 60-63.
3. Теличко И.Н. Особенности диагностики мочеполового трихомониаза / И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская // Клин. дерматология и венерология. - 2006. - № 3. - С. 17-20.
4. Теличко И.Н. Современный взгляд на микроскопический метод диагностики мочеполового трихомониаза / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко // Клинич. дерматология и венерология. - 2007. - № 2. - С. 28-32.
Статьи в журналах и тезисы конференций: 5. Теличко И.Н. Проблемы лабораторной диагностики трихомоноза / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская // Мат. VI Российского съезда врачей-инфекционистов. - СПБ, 2003. - С. 375.
6. Иванов А.М. Актуальные проблемы диагностики урогенитального трихомониаза / А.М. Иванов, И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская, Ю.Г. Горбунов // Журнал дерматовенерологии и косметологии. - 2004.- № 1. - С. 17-21.
7. Теличко И.Н. Изменение содержания половых гормонов сыворотки крови у лиц с хроническим специфическим уретрогенным простатитом / И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская, А.М. Иванов, Ю.Г. Горбунов // Журн. дерматовенерологии и косметологии. - 2004. - № 2. - С. 32-34.
8. Раводин Р.А. Современные аспекты диагностики урогенитального трихомониаза / Р.А. Раводин, И.Н. Теличко, Н.В. Раздольская // Актуальные вопросы дерматовенерологии: Сб. тр. научно-практ. конф., посв. 80-летию иркутского областного кожно-венерологического диспансера. - Иркутск, 2004. - С. 132-133.
9. Теличко И.Н. ПЦР в диагностике урогенитального трихомониаза / И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская, А.М. Иванов // Сб. тр. науч. конф. с международным участием «Современные средства иммунодиагностики, иммуно- и экстренной профилактики актуальных инфекций». - СПБ, 2004. - С. 198-199.
10. Раводин Р.А. Совершенствование микроскопической диагностики урогенитального трихомониаза / Р.А. Раводин, И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская // Мат. Рос. науч.-практ. конф. «Узловые вопросы борьбы с инфекцией». - СПБ, 2004. - С. 198-199.
11. Раводин Р.А. Клинико-лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза у мужчин / Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская, А.М. Иванов // Мат. Рос. научно-практ. конф. дерматовенерологов «Санкт-Петербургские дерматологические чтения». - СПБ, 2005. - С. 93.
12. Раводин Р.А. Клинико-лабораторная диагностика мочеполового трихомониаза у женщин / Р.А. Раводин, Н.В. Раздольская, А.М. Иванов // Мат. Рос. научно-практ. конф. дерматовенерологов «Санкт-Петербургские дерматологические чтения». - СПБ, 2005. - С. 93.
13. Гаврилова О.В. Ультраструктурные особенности различных морфотипов влагалищных трихомонад / О.В. Гаврилова, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, И.Н. Теличко, Р.А. Раводин, Е.В. Ходосевич, А.Б. Криворучко // Мат. Рос. науч.-практ. конф., посвящ. 110-летию кафедры инфекционных болезней ВМЕДА им. С.М. Кирова «Инфекционные болезни: проблемы здравоохранения и военной медицины». - СПБ, 2006. - С. 71-72.
14. Теличко И.Н. Цитоморфологические особенности T. vaginalis / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко, О.В. Гаврилова, Е.В. Ходосевич // Мат. IV науч.-практ. конф. памяти проф. А.Л. Машкилейсона. - М., 2006. - С. 143-144.
15. Теличко И.Н. Микробиологическая характеристика хронического трихомониаза в современных условиях / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, Е.В. Ходосевич, А.Б. Криворучко, Д.В. Заславский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2007. - № 1. - С. 453.
16. Теличко И.Н. Иммунокоррегирующая терапия у больных хроническим трихомониазом / И.Н. Теличко, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко, А.С. Симбирцев, А.М. Иванов // Мат. науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы диагностики и терапии трудноизлечимых заболеваний кожи». - СПБ, 2007. - С. 79-81.
17. Теличко И.Н. Способ определения чувствительности T. vaginalis к метронидазолу / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко, Д.В. Заславский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2007. - № 1. - С. 454.
18. Теличко И.Н. Влияние комплексной терапии на показатели иммунного статуса у больных хроническим трихомониазом / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, Д.В. Заславский, А.С. Симбирцев // Аллергология и иммунология. - 2007. - Т. 8, № 1. - С. 96-97.
21. Теличко И.Н. Клинические особенности хронического трихомониаза / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Е.В. Ходосевич, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко, Д.В. Заславский // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2007. - С. 452.
22. Теличко И.Н. Клинико-микробиологические особенности трихомониаза в современных условиях / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко // Мат. науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы диагностики и терапии трудноизлечимых заболеваний кожи». - СПБ, 2007. - С. 81-82.
23. Теличко И.Н. Изучение клинической эффективности иммуномодулятора бестим при хроническом трихомониазе / И.Н. Теличко, Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко, А.М. Иванов, А.С. Симбирцев // Тез. докл. XIV Рос. конгресса «Человек и лекарство». - М., 2007. - С. 590-591.
24. Иванов А.М. Сравнительная характеристика питательных сред для культивирования T. vaginalis / А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, И.Н. Теличко, В.Н. Вербов, А.Б. Криворучко // Мат. IX съезда ВНПОЭМП «Итоги и перспективы обеспечения эпидемического благополучия населения РФ». - М., 2007. - С. 36-37.
25. Раздольская Н.В. Изучение ультраструктурной организации вирулентных форм Trichomonas vaginalis / Н.В. Раздольская, О.В. Гаврилова, И.Н. Теличко, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко // Рос. биомед. журн. Medline.ru. - 2007. - Т. 8, № 7. - С. 283-291.
26. Криворучко А.Б., Сердюцкая М.В., Овсянников Ф.А., Раздольская Н.В., Иванов А.М. Методологические подходы к созданию системы контроля качества микробиологических исследований / А.Б. Криворучко, М.В. Сердюцкая, Ф.А. Овсянников, Н.В. Раздольская, А.М. Иванов // Мат. юб. Рос. научной конф. с межд. участием, посв. 175-летию со дня рождения С.П. Боткина. - СПБ, - 2007. - С. 288-289.
27. Раздольская Н.В. Значение микроскопического и культурального методов в диагностике трихомониаза / Н.В. Раздольская, И.Н. Теличко, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко // Мат. юбил. Рос. науч. конф. с международным участием, посвящ. 175-летию со дня рождения С.П. Боткина. - СПБ, 2007. - С. 283
28. Razdolskaya N. Peculiarity of the clinical isolates of Trichomonas vaginalis / N. Razdolskaya, O. Gavrilova, A. Ivanov, I. Telichko, A. Krivoruchko // Protistology An International Journal. - 2007. - Vol. 5, №1. - P. 66-67.
29. Теличко И.Н. Клинико-иммунологические особенности урогенитального трихомоноза / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская, А.С. Симбирцев, А.Б. Криворучко // Рос. биомед. журн. Medline.ru. - 2007. - Т. 8, №7. - С. 637-646.
31. Раздольская Н.В. Особенности ультраструктурной организации вирулентных форм Trichomonas vaginalis / Н.В. Раздольская, О.В. Гаврилова, А.М. Иванов, И.Н. Теличко, А.Б. Криворучко, В.А. Андреев // Труды научно-исследоват. центра ВМЕДА им. С.М. Кирова, выпуск II, «Актуальные вопросы профилактической медицины». - СПБ, 2008. - С. 71-80.
33. Теличко И.Н. Особенности микробиологической и клинической характеристики этиотропного лечения трихомоноза / И.Н. Теличко, А.М. Иванов, Н.В. Раздольская // Сиб. журн. дерматологии и венерологии. - 2008. - № 9. - С.125-126.
34. Раздольская Н.В. Новый подход к повышению информативности серологической диагностики трихомоноза / Н.В. Раздольская, А.Б. Криворучко, И.Н. Теличко, А.М. Иванов // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2008. - № 22. - С. 190.
35. Раздольская Н.В. Патогенность Trichomonas vaginalis в экспериментах in vitro / Н.В. Раздольская, Л.Ф. Литвинчук, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко, О.В. Гаврилова, И.Н. Теличко, В.Н. Вербов // Мат. IV межд. конф., посв. 85-летию СПБ НИИЭМ им. Пастера и 120-летию Парижского ин. Пастера «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями». - СПБ, 2008. - С. 68.
36. Раздольская Н.В. Совершенствование метода культивирования T. vaginalis / Н.В. Раздольская, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко, Л.Ф. Литвинчук // Мат. V съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова. - М, 2008. - С. 283-284.
37. Раздольская Н.В. Исследование способности к фагоцитозу у различных морфотипов возбудителя трихомониаза (Trichomonas vaginalis) / Н.В. Раздольская, О.В. Гаврилова, А.М. Иванов // Мат. межд. научно-метод. семинара «Современные методы микроскопии в исследовании живых систем». - СПБ, 2008. - С.28.
38. Раздольская Н.В. Особенности культуральной диагностики урогенитального трихомониаза / Н.В. Раздольская, А.М. Иванов, А.Б. Криворучко, О.В. Протасов, А.В. Апчел // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2009. - № 25. - С. 377-378.
39. Иванов А.М. Иммунологическая эффективность иммуномодулятора Ликопида в комплексной терапии хронического трихомониаза / А.М. Иванов, В.Ю. Никитин, А.В. Болехан, И.Н. Теличко, А.В. Апчел, Н.В. Раздольская, Д.В. Заславский // Astana Medical Journal. - 2009. - № 2. - С. 149.
40. Раздольская Н.В. Инфицирование клеточных культур паразитическим простейшим Trichomonas vaginalis / Н.В. Раздольская, Л.Ф. Литвинчук, А.М. Иванов, О.В. Гаврилова // Бюллетень московского общества испытателей природы, отдел биологический. - 2009, Т. 114, вып.2, прил. 1. - С. 88-90.
41. Иванов А.М. Иммунологические особенности хронического трихомониаза / А.М. Иванов, И.Н. Теличко, А.С. Симбирцев, Н.В. Раздольская, А.В. Апчел, К.В. Артамонов. - Astana Medical Journal. - 2009. - № 2. - С. 150.
Размещено на .ru
Вы можете ЗАГРУЗИТЬ и ПОВЫСИТЬ уникальность своей работы
