Активность основных карбокмипептидаз в тканях пренатально алкоголизированных крыс - Диссертация

……………………………………………………………….….……5 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………….…...8 1.1. Влияние хронической алкоголизации на организм ……………………...8 1.2. Ферменты обмена регуляторных пептидов …………………………...…21 1.3.1. ФМСФ-ингибируемая карбоксипептидаза………….……..……………28 1.4. Метод определения активности ферментов……………………….…..38 2.2.3. Исследование активности основных карбоксипептидаз в тканях крыс разного возраста, испытавших пренатальное воздействие этанола...……….41 3.1.1. Исследование активности карбоксипептидазы Н в тканях пренатально алкоголизированных крыс разного возраста………..……………………….41 3.1.2. Исследование поведения пренатально алкоголизированных животных в тесте «открытое поле»………………………………………………..…………57 3.2.2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ……………74 ВЫВОДЫ…………………………………….…………………………………..88 ЛИТЕРАТУРА….………………………………………………………………..91 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АДГ - алкогольдегидрогеназа АКТГ - адренокортикотропный гормон АПМЯК - аминопропилмеркаптоянтарная кислота АПФ - ангиотензинпревращающий фермент ВИП - вазоактивный интестинальный пептид ВНД - высшая нервная деятельность ГАМК - гамма-аминомасляная кислота ГОМК - гамма-оксимасляная кислота ГГС - гипоталамо-гипофизарная система ГГГС - гипоталамо-гипофизарно-гонадная система ГГНС - гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система ГПЯК - гуанидинопропилянтарная кислота ГЭМЯК - гуанидиноэтилмеркаптоянтарная кислота КП - карбоксипептидаза КПN - карбоксипептидаза N КПВ - карбоксипептидаза В КПН - карбоксипептидаза Н КРФ - кортикотропин-рилизинг фактор НАД - никотинамидаденин динуклеотид НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат ПОМК - проопиомеланокортин Р0, Р14, Р28, Р45, Р120 - возраст животных (0, 14, 28, 45 и 120 суток после рождения, соответсвенно) ФМСФ - фенилметилсульфонилфторид ФМСФ-КП - фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая карбоксипептидаза ЦНС - центральная нервная система ЭДТА - этилдиаминтетраацетат натрия ВВЕДЕНИЕ Для современной биологии и медицины имеет особую значимость исследование общих и частных закономерностей развития алкоголизма. Эта перестройка сопровождается значительными изменениями в функционировании пептидергических систем, например опиоидных, что, несомненно, связано с изменением активности ферментов, участвующих в обмене биологически активных пептидов [1, 25, 52, 55, 76, 212, 278]. Известна роль многих регуляторных пептидов, особенно опиоидных пептидов, в патогенезе алкоголизма [7, 13, 18, 62, 69, 120, 128, 272]. К ним относятся карбоксипептидаза В (КФ 3. 4. 17.1 ), карбоксипептидаза Н (КФ 3. 4. 17. 10), карбоксипептидаза М (КФ 3. 4. 17. Также нет данных об изменениях активности этих ферментов у пренатально алкоголизированных особей при последующем воздействии этанола в постнатальном периоде. Целью нашей работы было изучение роли основных карбоксипептидаз в развитии предрасположенности к формированию алкогольной зависимости у потомков алкоголиков. При этом исследована ферментативная активность как у взрослых животных, так в период их полового созревания. Пренатальная алкоголизация вызывает изменение активности исследованных ферментов в мозге и периферических тканях животных обоего пола в процессе развития. Так, известно, что хронический этанол усиливает секрецию АКТГ и пролактина и снижает секрецию соматотропного гормона [3, 297], увеличивает экспрессию мРНК КРФ в гипоталамусе [297], увеличивает концентрацию КРФ и АКТГ в ГГС [98]. Панченко Л. Ф. с соавт. Так холецистокинин, бомбезин [235, 233], тиролиберин [234], кортикотропин-рилизинг фактор [120], ангиотензин ІІ, брадикинин, Leu-энкефалин, энкефалиноподобный тетрапептид, дельта-сон-индуцирующий пептид [65], Met-энкефалин [54] снижают потребление алкоголя; вазоактивный интестинальный полипептид, нейропептид Y, галанин, β-эндорфин увеличивают потребление этанола [235]; вещество Р частично нормализует нарушенные этанолом центральные механизмы реакции избегания [60;]. По данным Беляева Н. А. с соавт. Влиянием половых гормонов также можно объяснить и другие факты половых отличий при абстинентном синдроме [216, 217]. Божко Г. Х. и Волошин П. В. [238] считают, что нарушение структуры и функции генетического аппарата клеток преимущественно обусловлено действием ацетальдегида. В конечной стадии образования активных пептидов из неактивных предшественников и в начальных стадиях их деградации участвуют основные карбоксипептидазы - ферменты, отщепляющие остатки основных аминокислот (аргинина и лизина) с С-конца пептидов. Агрегация, конформационные изменения и мембранная ассоциация КПН зависят от рН среды и концентрации ионов Ca2 [121, 318]. Корреляционный и дисперсионный анализы проводили с помощью программы Statgraphics (версия 3.0) (“STSC, Inc.” США) в режимах Simple Correlation, One-Way ANOVA и Multifactor ANOVA.