Основные причины развития пастереллеза у животных. Возможность использования метода молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот при латентных и хронических инфекциях для широкого спектра патогенных микроорганизмов. Выделение ДНК с помощью сорбентов.
Аннотация к работе
Применение этих методов не только в научных целях, но и в практической лабораторной диагностике стало возможным в немалой степени благодаря созданию в середине 80-х годов процесса искусственного многократного копирования ДНК и дальнейшему стремительному развитию этой технологии, в настоящее время известной как полимеразная цепная реакция (ПЦР) [8, 9]. Основное преимущество этих методов, по сравнению с иммунологическими, состоит в возможности их использования при латентных и хронических инфекциях для широкого спектра патогенных микроорганизмов, а также определять генетическое родство возбудителей [10]. пастереллез молекулярный гибридизация нуклеиновый Выделение ДНК проводили с помощью коммерческих наборов ДНК-сорб Б, PURELINK Genomic DNA Mini Kit, также для этих целей использовали автоматическую станцию выделения НК - Thermo Scientific King Fisher и метод горячего лизиса. Затем сливали надосадочную жидкость и снова добавляли 1 см3 буфера TES, разбивали на вортексе и добавляли 300 мкл лизирующего раствора (изаминидин циотинад) и размешивали на вортексе и оставили на 5 минут в термостат при температуре 65ОС. Затем добавили сорбент - 25 мкл., предварительно встряхнули, после добавления также смешивали на вортексе и оставляли при 370С на 2 минуты.
Список литературы
1. Watt J.M., Swiatlo E., Wade M.M., Champlin F.R. Regulation of capsule biosynthesis in serotype A strains of Pasteurella multocida// Microbiol Lett. -2003.- Vol. 8. - Р. 9-14.
2. Ewers C., Lubke-Becker A., Bethe A., Kiebling S., Filter M., Wieler H. Virulence genotype of Pasteurella multocida strains isolated from different hosts with various disease status//Vet Microbiol. -2006. - Vol.7. - Р. 3-4.
3. Шегидевич Э.А., Федотов В.Б., Крючков В.Я. Серотиповой состав Пастерелла мультоцида // Труды ВИЭВ. - М., 1983. - Т. - С.15-19.
4. Масимов К.А. Значение пастерелл (Р.multocida) при остром респираторном синдроме парагриппа-3 у телят в откормочных хозяйствах промышленного типа: автореф....канд. вет. наук. - М., 1982. - 29 с.
5. Gautam R., Kumar A.A., Singh V.P., Singh V.P., Dutta T.K., Shivachandra S.B. Specific identification of Pasteurella multocida serogroup-A isolates by PCR assay// Res Vet Sci. - Vol.3. -Р.179-85.
6. Масимов Н.А. Пастереллез животных: Лекция // Моск. Гос. Акад. вет. медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина. - М., 1995. - 12с.
7. Джупина С.И., Колосов А.А. Особенности эпизоотологии, клинического проявления и диагностики пастереллеза в Новосибирской области // Профилактики и лечение болезней крупного рогатого скота. - 1992. - № - С.15-22.
8. Некоторые теоретические основы полимеразной цепной реакции // ДНК -Технологии. М., 1998.- 23 с.
9. Miflin J.K., Blackall J. Development of a 23S RRNA-based PCR assay for the identification of Pasteurella multocida//Lett Appl Microbiol. - 2001 - Vol. 33(3). - Р. - 216-219.
10. Liu , Lawrence M.L., Austin F.W. Специфическая идентификация ПЦР Pasteurella multocida основанный на предполагаемых транскрипционных генах регуляторах // J Microbiol Методы. - 2004. - Vol. 58 (2). - Р.263-277.
11. Nagai , Someno S., Yagihashi T. Differentiation of toxigenic from nontoxigenic isolates of Pasteurella multocida by PCR. // J Clin Microbiol. - 1994. - Vol.32(4). - Р. 100-115.
12. Fisher M.A., Weiser C., Hunter D.L., Ward A.C. Use of a polymerase chain reaction method to detect the leukotoxin gene LKTA in biogroup and biovariant isolates of Pasteurella haemolytica and P trehalosi// Am J Vet Res. - 1999. - Vol. 60 (11).- Р.140-146.