Получение иммортализованных культур стволовых клеток человека при помощи введения гена каталитического компонента теломеразы. Исследование характера влияния экспрессии гена hTERT на способность клеток, выделенных из различных тканей, к дифференцировке.
Аннотация к работе
гена каталитического компонента теломеразы (hTERT) в клетки с различным дифференцировочным потенциалом Специальность 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Дашинимаев Эрдэм Баирович Москва 2009 Работа выполнена в лаборатории молекулярной кариологии и основ клеточной терапии Учреждения Российской академии наук Института молекулярной биологии им. Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Егоров Егор Евгеньевич Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Кузин Борис Александрович кандидат биологических наук Лупатов Алексей Юрьевич Ведущая организация: Биологический факультет Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова Защита состоится _____2009 г. в____ часов на заседании Диссертационного совета Д 002.238.01 при Учреждении Российской академии наук Институте биологии развития им Н.К. Кольцова РАН по адресу 119334, Москва ул. Вавилова, д. 26 С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Учреждения Российской академии наук Института биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН (119334, Москва, ул. Вавилова, д. 26.) и на сайте института Автореферат разослан «_____» __________________ 2009 г. Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат биологических наук Е.Б. Абрамова ген теломераза экспрессия стволовой ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы В настоящее время одними из наиболее бурно развивающихся направлений в медицине являются клеточнозамещающие технологии - клеточные трансплантации и тканевая инженерия. 3) Определить, сохраняется ли теломеразная активность в иммортализованных клетках и не приобретают ли они признаков, характерных для злокачественно-трансформированных культур. Научная новизна и практическая значимость Ген hTERT в составе лентивирусной конструкции был трансфицирован в три различные первичные культуры мезенхимальных клеток человека: а) мезенхимальные стромальные клетки (МСК) костного мозга, б) клетки стромы губчатой кости, в) МСК жировой ткани. Также трансфицированные клетки сохраняли нормальную способность переходить в состояние покоя в результате сывороточного голодания, способность к контактному торможению и нормальный диплоидный кариотип. Апробация работы Основные материалы диссертации были представлены на Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (Санкт-Петербург, 2006); на 50-й научной конференции МФТИ «Современные проблемы фундаментальных и прикладных наук» (Долгопрудный, 2007); на V-ой Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 2008); и на научных коллоквиумах лаборатории молекулярной кариологии и основ клеточной терапии Учреждения Российской академии наук Института молекулярной биологии им В.А. Энгельгардта (2004-2008). МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Культуры клеток Первичная культура мезенхимальных стромальных клеток костного мозга человека (X1), была получена из мононуклеарной фракции аспирата костного мозга подвздошной кости человека. Клетки культивировали на среде DMEM с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), 0,32 мг/мл глутамина, 40 ед/мл гентамицина. Первичная культура фетальных нейральных стволовых клеток человека (NSC) была любезно предоставлена И.Н. Сабуриной (ИБГ РАН). После 21 дня культивирования с индукционной средой клетки промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), фиксировали 4% формальдегидом 10 мин при комнатной температуре, после чего опять промывали PBS и окрашивали Суданом-IV 10 мин при комнатной температуре. Олигонуклеотиды (СССТАА)4, меченные биотином, были заказаны в фирме «Силекс» (Россия).