Дослідження впливу газотранспортного фторвмісчуючого кровезамісника "Перфторан" на біохімічні процеси в сперміях людини (факультативні аероби), на кріозахист і кріопошкодження при наявності його в середовищі гіпотермічного зберігання і кріоконсервації.
Аннотация к работе
Склад і властивості таких розчинів в основному визначають ефективність процесу заморожування-відігрівання і, як наслідок, відновлення морфофункціональних властивостей клітин після відігрівання. Використання перфторана як компонента кріозахисних середовищ для сперміїв людини відкриває нові можливості у вивченні механізмів кріопошкодження та кріозахисту цих клітин, змінюючи співвідношення аеробних та анаеробних процесів. Метою роботи було зясувати ефективність і деякі сторони механізму дії газотранспортного кровезамісника “Перфторан” на спермії людини при гіпотермічному зберіганні і кріоконсервації. Вивчити характер впливу перфторана на рухливість і динаміку накопичення молочної кислоти в сперміях після гіпотермічного зберігання. Результати нових підходів до вивчення функціональної активності сперміїв шляхом аналізу змін біохімічних параметрів еякуляту у відповідь на присутність у кріозахисному середовищі донора кисню можуть бути використані в допоміжних репродуктивних технологіях на етапі підготовки сперміїв до штучної інсемінації та реінсемінації ооцитів, транспортування зразків сперми для використання в наукових чи практичних цілях протягом кількох діб в умовах гіпотермії.Згідно з статтею 9 Закону України “Про лікарські засоби” пункт 6 постановлення Кабінету Міністрів України від 13.09.00 № 1422 “Про затвердження порядку державної реєстрації (перереєстрації) лікарського засобу і розмірів збору за державну реєстрацію (перереєстрацію) лікарського засобу” перфторан було зареєстровано в Україні та внесено до Державного реєстру лікарських засобів у формі емульсії для інфузій по 100 мл, 200 мл, та 400 мл. Вплив цього препарату на клітини визначали по фіксуванню максимальної рухливості сперміїв при варіюванні вмісту ПФ у суспензії. Однак, в присутності перфторана спермії відновили свою рухливість до рівня який відповідає значенням на початок експерименту, що дозволило зафіксувати повну зупинку сперміїв тільки після 120 годин інкубації. При вмісті ПФ в кріоконсерванті відігріті клітини зберігали рухливість протягом 12 годин, у той час як у контрольній суспензії повна зупинка рухливості спостерігалася після 6 годин інкубації. За отриманими результатами можна зробити висновок, що при внесенні перфторана в середовище гіпотермічного зберігання сперміїв концентрація молочної кислоти зменшувалася після 48 годин інкубації та наростала після 72 годин в контролі і опиті.У дисертаційній роботі викладено теоретичне й експериментальне узагальнення наукової задачі, спрямованої на вивчення впливу газотранспортного кровезамісника “Перфторан” на процеси кріоушкодження та кріозахисту сперміїв людини при гіпотермічному зберіганні та кріоконсервації. Перспектива застосування газотранспортної емульсії “Перфторан” в експериментальних дослідженнях визначила необхідність удосконалення середовищ кріоконсервації та гіпотермічного зберігання сперміїв людини.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вывод
У дисертаційній роботі викладено теоретичне й експериментальне узагальнення наукової задачі, спрямованої на вивчення впливу газотранспортного кровезамісника “Перфторан” на процеси кріоушкодження та кріозахисту сперміїв людини при гіпотермічному зберіганні та кріоконсервації. Перспектива застосування газотранспортної емульсії “Перфторан” в експериментальних дослідженнях визначила необхідність удосконалення середовищ кріоконсервації та гіпотермічного зберігання сперміїв людини.
Використання перфторана як компонента середовища для гіпотермічного зберігання в концентрації 40 об. %, збільшує життєздатність сперміїв людини до 120 годин, що дозволяє підвищити ефективність клінічного застосування клітин, які зберігаються в умовах низьких позитивних температур.
Вивчення динаміки накопичення молочної кислоти в сперміях людини при інкубації з перфтораном, показало, що клітини за певних умов можуть переходити на аеробний шлях обміну.
Встановлено, що газотранспортна фторвмісчуюча емульсія “Перфторан” має антиоксидантний ефект, перешкоджаючи накопиченню первинних та вторинних продуктів перекісного окислювання ліпідів в спермі людини. Додання перфторана до складу кріозахисного середовища приводить до більш тривалого збереження функціональної активності відігрітих клітин, що свідчить про репарацію нелітальних кріопошкоджень в сперміях людини після кріоконсервації.
Розроблена методика інкубації сперміїв людини в середовищі з перфтораном може бути використана в допоміжних репродуктивних технологіях для довгострокового зберігання зразків в умовах гіпотермії та збільшення життєздатності сперміїв після кріоконсервації.
Список литературы
1. Грищенко В.И., Черкашина И.В., Кучков И.Н., Гапон А.А., Микулинский Ю.Е., Юрченко Г.Г. Влияние перфторана на подвижность и переживаемость спермиев человека при гипотермии// Пробл. Криобиол. - 2001 - № 4. - С. 8 - 11.
2. Черкашина И.В. Динамика накопления лактата в спермиях человека при введении перфторана в среду гипотермического хранения// Пробл. Криобиол. - 2003. - № 3. - С. 75 - 79.
3. Чадаев В.Е., Кучков И.Н., Черкашина И.В., Кузьмина И.Ю. Перспективы использования перфторированных углеводородов для гипотермического хранения спермиев человека// Сучасні аспекти репродуктології, перінатальної медицини та кріобіології. - Харків. - 2003. - С. 236 - 241.
4. Грищенко В.И., Чадаев В.Е., Черкашина И.В., Кузьмина И.Ю., Кучков И.Н. Возможность использования перфторана для гипотермического хранения спермиев человека// Врачебная практика - 2004. № 5, с.84 - 87.
5. Чадаев В.Е., Кучков И.Н., Черкашина И.В., Гольцев К.А., Добрунова И.В. Морфологические и функциональные характеристики спермиев человека после криоконсервирования в условиях сверхбыстрого охлаждения// Пробл. Криобиол. - 2005. - Т. 15. № 4. - С. 665 - 670.
6. Патент № 380303А Украина, МПК 7, АО1N1/02 Спосіб гіпотермічного збереження фрагментів тканини печінки/ Грищенко В.И., Мікулінський Ю.Ю., Гончарук О.І, Грубман С.О., Черкашина І.В. Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України. Заявл. 21.06.00 № 2000063592. Публ. 15.05.01. Бюл. № 4.
7. Патент № 68172А Украина, МПК А61D19/02, АО1N1/02 Спосіб отримання сперми собак/ Грищенко В.І., Копейка Є.Ф., Єгоров М.І., Кучков І.М., Черкашина І.В. Інститут Проблем Кріобіології і Кріомедицини НАН України. 15.07.2004. Бюл. № 7
8. Ovsyannikova T.N., Dyagileva H.A., Cherkashina I.V. Effect of hypertermia on lipoperoxidation potential of testes and liver of rats// Biophysical proceeding of Kharkov National University. - 1999. - Sep. - P. 36.
9. Алексеевская Э.И., Крамар М.И., Чуб Н.Н., Юрченко Г.Г., Тодоров П., Чадаев В.Е., Черепанова Т.А., Кучков И.Н., Черкашина И.В. Стимулирующее действие цитохрома С и холинхлорида на активность сукцинатдегидрогеназы в спермиях человека, хранившихся в условиях гипотермии// Пробл. Криобиол. - 2001 - № 3. - С. 14.
10. Грищенко В.И., Черкашина И.В., Кучков И.Н., Гапон А.А., Микулинский Ю.Е., Юрченко Г.Г., Алексеевская Э.И. Влияние перфторана на некоторые функциональные свойства спермиев человека при гипотермии// Пробл. Криобиол. - 2001 - № 3. - С. 27.
11. Кучков И.Н., Чадаев В.Е., Кузьмина И.Ю., Черкашина И.В. Функция криобанков спермы человека при современном развитии вспомогательных репродуктивных технологий// Матеріали науково-практичної конф. “Від фундаментальних досліджень - до прогресу в медицині”. - Харків. - 2005. - С. 183 - 184.