Гістологічні, гістохімічні, морфометричні, радіологічні дослідження тимуса, лімфатичних вузлів селезінки собак різних вікових груп. Аналіз змін гістоструктури імунокомпетентних органів та сироватки крові тварин після застосування імуностимуляторів.
Аннотация к работе
Більше того, при збільшенні часу опромінення поступово виснажуються компенсаторно-репаративні можливості організму та наростають зміни деструктивного характеру, відбувається порушення гомеостазу, прискорення темпів старіння імунної системи, і як наслідок - розвиток вторинного імунодефіцитного стану (Воєйкова І.М., 1997), зниження загальної резистентності організму (Чумаченко В., 2004). Метою дисертаційної роботи було зясувати вплив імуностимуляторів на морфологічний стан органів імунної системи собак із зони радіоактивного забруднення. Для досягнення мети були поставлені наступні задачі: провести гістологічні дослідження тимуса, лімфатичних вузлів, селезінки собак із зони радіоактивного забруднення після введення імуностимуляторів; провести гістохімічні дослідження тимуса, лімфатичних вузлів, селезінки собак із зони радіоактивного забруднення після введення імуностимуляторів; визначити ступінь забрудненості радіонуклідами території де народились і постійно утримувались тварини та вміст радіонуклідів (питому активність) у досліджуваних органах (тимус, лімфатичні вузли, селезінка) собак;Величину експозиційної дози отримували, використовуючи радіометри СРП-88Н, “Припять” (Коваленко Л.И., 1984; Ковальський О.В. та ін., 1993). Питому активність органів імуногенезу визначали за допомогою гамма-спектрометра АК-1 з детекторними кристалами NAI 63х63 мм. Для досліду було сформовано дві групи клінічно здорових собак, які народились та утримувались в зоні гарантованого добровільного відселення (м. Для морфологічного і гістохімічного дослідження відбирали у 2-х місячних собак тимус, лімфатичні вузли (нижньощелепні, поверхневі шийні), селезінку; у 2-х річних собак - лімфатичні вузли (нижньощелепні, поверхневі шийні), селезінку з визначенням їх маси (г) в аналогічні терміни з гематологічними дослідженнями. Кров для дослідження відбирали у тварин зранку до годівлі з плечової вени та стабілізували гепарином.Житомирі, де утримувались у стаціонарних цегляних вольєрах собаки, складала 10-18 МКР/год, на вигульних майданчиках така доза становила 11-15 МКР/год. Зростання таких показників спостерігали у дорослих собак у пять раз. При дослідженні гамма-глобулінів, імуноглобулінів спостерігали достовірне зменшення цих показників у собак з м. У цуценят 2-х місячного віку спостерігали підвищення рівня гемоглобіну на 8 г/л (імунофан) та 10 г/л (гамавіт) (табл. У цуценят, які були вирощені в зоні гарантованого добровільного відселення, спостерігали збільшення кількості гемоглобіну на 4,2 г/л (гамавіт) та на 11,2 г/л (імунофан) (табл.В окремих місцях часточки тимуса під дією радіонуклідів втрачали полігональність, деякі із них набували видовженої форми, міжчасточкові перегородки були дещо потовщені, їх середній діаметр зменшувався майже в 1,3 рази і становив 127,14±75,71 мкм. Овруча спостерігали достовірне (р<0,05) зменшення площі кіркової речовини в 1,23 рази та збільшення сполучнотканинної строми в 1,47 разів. Результатами морфометричних досліджень встановлено, що відносна площа сполучної тканини у дорослих тварин щодо цуценят збільшується в 1,2 рази, лімфоїдної тканини, навпаки, зменшується на 2,73%. Товщина капсули лімфатичних вузлів у цуценят з зони гарантованого добровільного відселення достовірно (р<0,001) збільшується в 1,5 рази і становить 34,65±2,41 мкм. Відносна площа сполучної тканини лімфатичних вузлів у статевозрілих собак з зони гарантованого добровільного відселення достовірно (р<0,05) збільшилась в 1,2 рази і склала 20,92±1,25%.У дисертаційній роботі на основі гістологічних, гістохімічних, імунологічних, біохімічних, радіологічних, анатомічних, та морфометричних досліджень показано вплив малих доз іонізуючого випромінювання в зоні радіоактивного забруднення - зоні гарантованого добровільного відселення на гематологічні показники, морфологію та гістохімію тимуса, лімфатичних вузлів і селезінки собак, внаслідок якого можливий розвиток вторинного імунодефіцитного стану. Зміни в органах імунного захисту під дією радіонуклідів проявляються зменшенням абсолютної маси тимуса, лімфатичних вузлів та селезінки. У тимусі цуценят із зони радіоактивного забруднення відбувається збільшення відносної площі сполучної тканини, зменшення відносної площі паренхіми, в тому числі кіркової речовини, що вказує на можливе прискорення інволютивних процесів. У лімфатичних вузлах собак, вирощених в зоні гарантованого добровільного відселення, спостерігається зменшення лімфоїдної тканини, зокрема, кіркової речовини та збільшення відносної площі сполучної тканини. У собак із зони гарантованого добровільного відселення спостерігається зменшення інтенсивності гістохімічних реакцій на виявлення РНК, білків, що свідчить про зниження синтезуючої активності клітин тимуса, лімфатичних вузлів, селезінки.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вывод
Радіологічна характеристика територій, де народились і утримувались тварини. Середня потужність експозиційної дози гамма-випромінювання у м. Житомирі, де утримувались у стаціонарних цегляних вольєрах собаки, складала 10-18 МКР/год, на вигульних майданчиках така доза становила 11-15 МКР/год. Аналогічний показник у м. Овручі був майже втричі більший.
Встановлено, що у цуценят з м. Овруча питома активність імунних органів за цезієм-137 збільшилась у девять разів і становила 26,72±6,89 Бк/кг. Зростання таких показників спостерігали у дорослих собак у пять раз.
Морфофункціональна характеристика органів і тканин
Показники периферичної крові
Показники периферичної крові у собак. Гематологічні показники. У статевозрілих собак з м. Овруча виявили лейкоцитопенію, незначну еритроцитопенію, моноцитоз (табл. 1). Зміни периферичної крові 2-х місячних цуценят супроводжувались лейкоцитопенією та незначною лімфоцитопенією (табл. 1).
Біохімічні показники та показники резистентності. При дослідженні гамма-глобулінів, імуноглобулінів спостерігали достовірне зменшення цих показників у собак з м. Овруча (табл. 2).
Показники периферичної крові у собак після застосування імуностимуляторів. Гематологічні показники. У цуценят 2-х місячного віку спостерігали підвищення рівня гемоглобіну на 8 г/л (імунофан) та 10 г/л (гамавіт) (табл. 3). У цуценят, які були вирощені в зоні гарантованого добровільного відселення, спостерігали збільшення кількості гемоглобіну на 4,2 г/л (гамавіт) та на 11,2 г/л (імунофан) (табл. 3). Кількість еритроцитів зросла при цьому на 3,75% (гамавіт) та на 7,71% (імунофан). Кількість лейкоцитів збільшилась на 25,57% після введення гамавіту та на 22% після використання імунофану (див. табл. 3). При застосуванні препаратів вдалося подолати не лише лейкоцитопенію, а і незначний лімфоцитоз, особливо це видно на прикладі препарату гамавіт (див. табл. 3).
У статевозрілих собак після застосування імуностимуляторів спостерігали аналогічну тенденцію. Так, рівень гемоглобіну збільшився в середньому на 13 г/л (табл. 4). Хоча кількість лейкоцитів і збільшилась на 14,37% (гамавіт) та на 13,5% (імунофан), проте вона майже на 7% знаходилась нижче межі норми (табл. 4). Кількість моноцитів знизилась на 17,75% (гамавіт) та на 14,52% (імунофан), хоча і не досягнула межі норми (табл. 4).
Біохімічні показники та показники резистентності. У цуценят кількість імуноглобулінів при застосуванні гамавіту зросла на 2,51% та на 11,03% при введенні імунофану. Підвищилась відповідно ФА на 5,5% та на 1,96%. ФІ при застосуванні гамавіту зріс на 3,96% (табл. 5). У цуценят з зони гарантованого добровільного відселення кількість гамма-глобулінів при застосуванні імунофану підвищилась на 24,14% і досягла при цьому межі норми (табл. 5).
Таблиця 3. Гематологічні показники цуценят після введення імуностимуляторів (M±m, n=10)
Показники Групи тварин після введення гамавіту (м. Житомир/м. Овруч) після введення імунофану (м. Житомир/м. Овруч)
Після застосування препаратів цуценятам м. Овруча кількість імуноглобулінів набула нормативного показника, збільшившись на 40,74% (гамавіт) та майже вдвічі при введенні імунофану (див. табл. 5).
Таблиця 4. Гематологічні показники статевозрілих собак після введення імуностимуляторів (M±m, n=10)
Показники Групи тварин після введення гамавіту (м. Житомир/м. Овруч) після введення імунофану (м. Житомир/м. Овруч)
Таблиця 5. Біохімічні показники та показники факторів резистентності крові цуценят після введення імуностимуляторів (M±m, n=10)
Показники Групи тварин після введення гамавіту (м. Житомир/м. Овруч) після введення імунофану (м. Житомир/м. Овруч) загальний білок, г/л 68,7±2,00/64,4±1,71 73,5±2,84/63,8±2,66 у т. ч.: альбуміни, % 48,8±1,62/49,4±2,17 50,0±3,43/49,4±2,76 глобуліни, %: 51,2±1,62/50,6±2,17 50,0±3,43/50,6±2,76 альфа- 13,7±1,89/15,8±2,30 13,4±1,43/14,4±2,37 бета- 24,7±3,40/25,3±2,95 24,5±3,03/25,4±3,69 гамма- 12,8±1,23/9,5±0,85 12,1±1,66/10,8±1,14 імуноглобуліни, мг/мл 9,39±0,73/6,08±0,93 10,17±0,98/9,16±0,60
У статевозрілих собак м. Житомира збільшилась кількість загального білка на 4,62% під дією гамавіту та на 12,22% при дії імунофана, гамма-глобулінова фракція зросла на 3,65% та на 5,11%. Застосування гамавіту призвело до збільшення кількості імуноглобулінів у сироватці крові на 9,04% та на 17,38% при застосуванні імунофану. Зростання ФА відбулося на 13,32% та на 11,63% відповідно.
Позитивну тенденцію впливу імуностимуляторів на біохімічні та імунологічні показники сироватки крові спостерігали у статевозрілих собак із зони гарантованого добровільного відселення. Рівень імуноглобулінів досяг межі норми при збільшенні на 34,44% після введення гамавіту та вдвічі після введення імунофану. Кількість гамма-глобулінів збільшилась на 9,68% при застосуванні гамавіту та на 30,11% при застосуванні імунофану. ФА під дією імуностимуляторів зросла на 10,43% (гамавіт) та на 13,99% (імунофан). ФІ також збільшився відповідно на 12,9% та 24,19%.У дисертаційній роботі на основі гістологічних, гістохімічних, імунологічних, біохімічних, радіологічних, анатомічних, та морфометричних досліджень показано вплив малих доз іонізуючого випромінювання в зоні радіоактивного забруднення - зоні гарантованого добровільного відселення на гематологічні показники, морфологію та гістохімію тимуса, лімфатичних вузлів і селезінки собак, внаслідок якого можливий розвиток вторинного імунодефіцитного стану. Зясовано вплив імуностимуляторів (гамавіту та імунофану) на гістоархітектоніку та особливості білково-нуклеїнового, вуглеводного, ліпідного обмінів тимуса, лімфатичних вузлів і селезінки собак.
Зміни в органах імунного захисту під дією радіонуклідів проявляються зменшенням абсолютної маси тимуса, лімфатичних вузлів та селезінки. Більше виражені вони у цуценят.
У тимусі цуценят із зони радіоактивного забруднення відбувається збільшення відносної площі сполучної тканини, зменшення відносної площі паренхіми, в тому числі кіркової речовини, що вказує на можливе прискорення інволютивних процесів. У лімфатичних вузлах собак, вирощених в зоні гарантованого добровільного відселення, спостерігається зменшення лімфоїдної тканини, зокрема, кіркової речовини та збільшення відносної площі сполучної тканини. У селезінці відбувається зменшення відносної площі білої пульпи та збільшення відносної площі сполучнотканинної основи, що призводить до зниження лімфопоетичної активності органа.
У собак із зони гарантованого добровільного відселення спостерігається зменшення інтенсивності гістохімічних реакцій на виявлення РНК, білків, що свідчить про зниження синтезуючої активності клітин тимуса, лімфатичних вузлів, селезінки. Водночас застосування імунофану призводить до деякого підвищення інтенсивності відповідних гістохімічних реакцій у тимусі і часткового відновлення синтезуючої активності клітин.
Показники периферичної крові у цуценят під дією радіонуклідів зазнали певних змін, що виражались лейкоцитопенією, незначною лімфоцитопенією; у статевозрілих собак - лейкоцитопенією, незначною еритроцитопенією та моноцитозом. Для обох вікових груп притаманне зниження гамма-глобулінів та імуноглобулінів.
При застосуванні гамавіту та імунофану спостерігається тенденція до нормалізації гематологічних, біохімічних показників та показників резистентності периферичної крові собак із зони радіоактивного забруднення, які були більше вираженими у цуценят.
У цуцунет із зони радіоактивного забруднення під впливом імуностимуляторів існує тенденція до збільшення відносної площі кіркової речовини у тимусі та лімфатичних вузлах; у дорослих тварин така тенденція практично відсутня.
У цуценят із зони гарантованого добровільного відселення корелятивні взаємозвязки між масою тіла та абсолютною масою тимуса, лімфатичних вузлів характеризуються як слабкі прямі; між абсолютною масою селезінки - середні зворотні. У статевозрілих собак між масою тіла та абсолютною масою селезінки виявляються сильні позитивні корелятивні взаємозвязки, між масою тіла та абсолютною масою лімфатичних вузлів - слабкі позитивні. Відмінність у значеннях коефіцієнтів кореляції зумовлена взаємодією організма з оточуючим середовищем.
ПРАКТИЧНІ ПРОПОЗИЦІЇ
В екологічно несприятливих районах, зокрема в зонах радіоактивного забруднення, у тварин відбувається розвиток вторинного імунодефіцитного стану. Для мінімізації імунодепресивної дії антропогенних факторів, відновлення фізіологічного імунного потенціалу, збереження їх здоровя та життєздатності застосовуються імуностимулятори, наприклад, гамавіт та імунофан. Слід враховувати, що в цих умовах рекомендовані профілактичні дози є недостатніми.
Матеріали дисертаційної роботи пропонуємо використовувати в навчальній та науковій роботі з питань впливу імуностимулюючих препаратів та іонізуючого випромінювання на імунні органи на біологічних, медичних факультетах та факультетах ветеринарної медицини вищих навчальних закладів.
Список литературы
1. Гістоархітектоніка органів і тканин собак, що утримувались на радіактивно забрудненій території / Горальський Л.П., Фасоля В.П., Дунаєвська О.Ф., Хоменко З.В., Горальська І.Ю. // Зб. наук. пр.: Вісник Державного агроекологічного універ-тету. - Житомир, 2004. - № 2. - С. 75 - 79. (Дисертант провела відбір лімфатичних вузлів, селезінки та провела їх гістологічний та морфометричний аналіз, узагальнила деякі результати досліджень).
2. Дунаєвська О.Ф. Морфологічна характеристика лімфатичних вузлів собак при дії хронічного іонізуючого опромінення малої інтенсивності // Зб. наук. пр.: Вісник Української Академії аграрних наук. Ін-т біології тварин. Біологія тварин. - Львів, 2005. - Т. 7. - № 1 - 2. - С. 205 - 208.
3. Дунаєвська О.Ф. Гістологічна характеристика та морфометричні показники лімфатичних вузлів цуценят з ІІІ-ої зони радіоактивного забруднення // Зб. наук. пр.: Вісник Львівської держ. академії вет. медицини ім. С.З. Гжицького. - Львів, 2005. - Т. 7. - № 3 (26). - Ч. 1. - С. 14 - 16.
4. Дунаєвська О.Ф. Вплив підвищеного радіаційного фону на гістоархітектоніку селезінки цуценят // Зб. наук. пр.: Вісник південної філії “Кримський агротехнологічний університет” НАУ. - Сімферополь, 2005. - Вип. 92. - С. 117 - 121.
5. Дунаевская О.Ф. Изменение морфометрических параметров селезенки щенков и собак при воздействии повышенного уровня радиоактивного загрязнения местности // Сб. науч. тр.: Вестник Таджикского гос. пед. ун-та им. К. Джураева. - Душанбе, 2005. - № 4. - С. 41 - 44.
6. Дунаєвська О.Ф., Хоменко З.В. Характеристика гематологічних показників собак, що утримувались на забрудненій радіонуклідами території // Зб. наук. пр.: Вісник Сумського національного аграрного університету. - Суми, 2005. - № 1 - 2 (13 - 14). - С. 14 - 16. (Дисертант виконала гематологічні дослідження, статистичну обробку результатів, узагальнила результати досліджень).
7. Морфометричні показники органів і тканин у свійських тварин / Горальський Л.П., Гуральська С.В., Дунаєвська О.Ф., Дяченко Т.Ф., Горальська І.Ю., Дубовий А.А. // Зб. наук. пр.: Вісник Дніпропетровського державного аграрного у-ту. - Дніпропетровськ, 2005. - № 2. - С. 102 - 105. (Дисертант провела гістологічні, морфометричні дослідження).
8. Горальський Л.П., Дунаєвська О.Ф. Вплив хронічного малоінтенсивного радіоактивного випромінювання на периферичні органи імуногенезу собак // Зб. наук. пр.: Вісник Державного агроекологічного університету. - Житомир, 2005. - № 2. - С. 111 - 114. (Дисертант провела відбір матеріалу, гістологічний, морфометричний аналіз, статистичну обробку результатів).
9. Морфометричні показники селезінки свійських тварин / Л.П. Горальський, О.Ф. Дунаєвська, С.В. Гуральська, С.С. Заїка, І.Ю. Горальська, Ф.І. Кропивницький, Т.Ф. Дяченко, О.Я. Калтаєва, А.А. Дубовий // Зб. наук. пр.: Таврический медикобиологический вестник. - Симферополь, 2006. - Т. 9. - №3. - Ч. 1. - С. 41-43. (Дисертант провела гістологічні, морфометричні дослідження селезінки собак).
10. Дунаєвська О.Ф. Морфометричні параметри тимусу у собак зони Житомирського Полісся // Зб. наук. пр.: Вісник Державного агроекологічного університету. - Житомир, 2006. - № 1. - С. 253 - 256.
11. Дунаєвська О.Ф., Горальський Л.П. Вторинний імунодефіцит як наслідок аварії на ЧАЕС // Зб. доповідей учасників пятої міжнародної наукової конференції “Досвід подолання наслідків Чорнобильської катастрофи в сільському та лісовому господарстві - 20 років після аварії на ЧАЕС”. - Житомир, 2006. - С. 280 - 282. (Дисертант провела гістологічні, морфометричні дослідження, узагальнила результати досліджень).
12. Дунаевская О.Ф. Морфометрическая характеристика селезенки собак при действии хронического радиоактивного излучения // Материалы Сибирского международного ветеринарного конгресса: “Актуальные вопросы ветеринарной медицины”. - Новосибирский гос. аграрн. ун-т. - Новосибирск, 2005. - С. 304.
13. Дунаєвська О.Ф. Морфометричні та гістохімічні дослідження імунних органів собак з ІІІ зони радіоактивного забруднення // Інформаційний листок. - Житомирський ЦНТІ. - № 44. - 2005. - 3 с.
14. Дунаєвська О.Ф. Вплив імунофану та гамавіту на імунні органи собак // Інформаційний листок. - Житомирський ЦНТІ. - № 48. - 2005. - 3 с.