Дослідження впливу кріоконсервованих фетальних препаратів, одержаних з печінки, мозкової тканини, плоду і хоріона людини на функціональні властивості ізольованих гепатоцитів. Якісний і кількісний вміст білків і гормонів у кріоконсервованих препаратах.
Аннотация к работе
Однією із задач сучасної кріобіології поряд із вивченням особливостей кріопошкоджень і кріозахисту обєктів різного рівня біологічної організації, є розробка ефективних біотехнологій, що включають одержання, кріоконсервування і тривале зберігання ембріональних та плодових (фетальних) тканин, клітин і отриманих з них препаратів, що мають перспективи використання в медицині, біології, фармакології, сільському господарстві й інших галузях (Грищенко В.І., 1991, Сухих Г.Т., 1994, Субота Н.П., 1998, Гольцев А.М., 2000, Geyer S.J., 1985, Fine А., 1994, і ін). Нетривалий час зберігання біопрепаратів, у тому числі і фетальних, після виділення з тканин, обмежує їхнє широке використання в медицині, біології і фармакології і вимагає розробки надійних біотехнологій одержання й консервування із збереженням біологічних властивостей. У задачі роботи входило: Досліджувати в порівняльному аспекті вміст деяких біологічно активних сполук - білків, гормонів, - у кріоконсервованих екстрактах з фетальних тканин різного гістогенезу (плід, печінка, мозкова тканина, хоріон) плоду людини 10 тижнів гестації після циклічного заморожування-відігрівання. Вивчити in vivo вплив кріоконсервованих фетальних препаратів (гомогенати, екстракти, клітини, цитозольні фракції, фракції з вмістом низько-і високомолекулярних білків), отриманих з печінки в різний термін гестації плоду (10 і 24 тижня), на біохімічні показники гепатоцитів пацюків при отруєнні CCL4 за даними активності процесів перекисного окислення ліпідів, накопичення токсичних продуктів обміну пігментів, показників цитолізу, холестазу й активності антиокисної системи, а також екстракту печінки - у залежності від термінів кріоконсервування (0-2,5 років) і введення в організм. Біохімічні показники в печінці і плазмі крови пацюків при отруєнні CCL4 і дії кріоконсервованих (-196 0С) препаратів (гомогенати, екстракти, гепатоцити, цитозольні і пептидні фракції), отриманих із плодів людини 10 чи 24-х тижнів гестації.Проаналізовано літературні дані щодо залежності біологічної активності тканин різного гістогенезу й отриманих з них препаратів (гомогенати, екстракти, клітини, цитозольні чи пептидні фракції) від наявності різних біоактивних сполук (цитокіни, тканинні гормони, олігонуклеотиди, диференційні антигени, проміжні продукти циклу трикарбонових кислот і т.д.). Спектральні характеристики білкових фракцій в екстрактах оцінювали, досліджуючи власну флуоресценцію, а також - у присутності флуоресцентного зонда - 4-(n-діметил-аміностирил)-1-метилпірідінію (ДСМ) з наступним компютерним аналізом спектрів флуоресценції на ЕОМ (Горбєнко Г.П., 1998). Інтенсивність процесів ПОЛ у печінці після отруєння пацюків CCL4 і введення кріоконсервованих фетальних препаратів і гепатоцитів (вміст життєздатних клітин - 2?106 в 1,0 мл) контролювали за накопиченням ТБК-активних продуктів (малоновий діальдегід - МДА) (Стальная І.Д., 1977), а стан антиокисної системи - по вимірі активності ферментів супероксиддисмутази (СОД) і каталази (Дісордисеску П., 1963). Кріобіологічна постановка експерименту включала: використання швидкого одноетапного заморожування фетальних тканин у середовищі з 0,9 % NACL, з наступним застосуванням декількох циклів заморожування-відігрівання, відповідно до розробленої біотехнології одержання фетальних екстрактів [1], гіпотермічне ( 2?4 0С) зберігання (до 72 годин) гепатоцитів у присутності кріоконсервованих екстрактів фетальних тканин і фракцій речовин різних молекулярних мас, отриманих з них. Показано, що при апробованих умовах гіпотермічного зберігання гепатоцитів здатність виключати трипановий синій, включати мічену амінокислоту і накопичувати потенціалзалежний зонд ДСМ були найбільш високими у середовищі, що містить біодобавки у вигляді КП і ТФП.Проведено комплексне порівняльне експериментальне дослідження дії кріоконсервованих фетальних препаратів, отриманих із тканин плоду людини 10 і 24 тижнів гестації з використанням нових кріобіологичних технологій на функціональні параметри гепатоцитів пацюків in vivo при отруєнні пацюків CCL4 і in vitro при гіпотермічному зберіганні. Кріоконсервовані екстракти, отримані з фетальних тканин різного гістогенезу плоду людини 10 тижнів гестації з використанням розробленої технології, мають різний вміст досліджених біологічно активних сполук - білків, гормонів. При гіпотермічному зберіганні гепатоцитів у сахарозо-сольовому середовищі кріоконсервовані біологічні препарати, отримані з фетальної печінки плоду людини 10 тижнів гестації, пролонгують їхню життєздатність: інтенсивність біосинтезу білка, ступень виключення трипанового синього і біоенергетичні показники у динаміці до 72 годин більш ефективно, ніж препарати з органів іншого гістогенезу. Введення кріоконсервованих препаратів печінки тваринам з отруєнням CCL4 дозволило знизити інтенсивність перекисного окислення ліпідів, (зменшення МДА-продукції), показники цитолізу (зменшення активності ферментів АЛАТ і АСАТ), холестазу (зниження активності ЛФ), накопичення токсичних продуктів обміну (зниження рів