Оцінка впливу кріоконсервованих фетальних нервових клітин на морфологічну структуру сітчастої оболонки після лазерного опіку ока. Зміни клініко-функціональних показників органа зору після застосування кріоконсервативних фетальних нервових клітин.
Аннотация к работе
Вивчено вплив холоду на біологічні обєкти, розроблена спеціальна кріогенна техніка, яка забезпечує оптимальну програму заморожування, запропоновано захисні засоби, що забезпечують цілість клітин і тканин у життєздатному стані (Грищенко В.И., 2000, 2003; Гольцев А.Н., Бабенко Н.М., 2003; Грищенко В.И. В останні десятиліття інтенсивно розвивається новий напрямок медицини - клітинна терапія, суть якої полягає в використанні кріоконсервованих клітин і тканин ембріофетоплацентарного комплексу з метою активації компенсаторних ресурсів ушкоджених клітин і тканин реципієнта, стимуляції механізмів регенерації, заміщення утрачених клітинних і тканинних структур при подальшому відновленні функцій органа, тканини (Akpek E.K. et al., 1999; Бабенко Н.Н. и соавт., 1999; Высеканцев И.П., Гурина Т.М., 2001; Демин Ю.А. и соавт., 2001; Ватутин Н.Т., Гринь В.К., 2003). Визначити закономірності дії кріоконсервованих фетальних нервових клітин в експерименті і вивчити їх вплив на функціональні показники органа зору в клініці. Вивчити розподіл кріоконсервованих фетальних нервових клітин (КФНК) в організмі експериментальних тварин після застосування і визначити тимчасові параметри їх функціонування при експериментальній моделі ушкодження сітківки. Методи дослідження: У роботі використовували методи морфологічного аналізу, імуноферментний (імуносорбентний) метод для аналізу нейротрофічних факторів (фактора росту нервів (FGN) і трансформуючого фактору росту ?-1 (TGF ?-1)), молекулярний метод (полімеразно ланцюгова реакція (ПЛР) для дослідження розподілу КФНК в організмі по Y-хромосомі - генетична мітка), метод суправітального фарбування за допомогою флюоресцентного зонда DDC (3,3-"dioctadecyloxacarbocyanine bromide).Дослідження проводилися відповідно до «Загальних етичних принципів експериментів на тваринах» (29.09.01.), що узгоджуються з положеннями «Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших наукових цілей» (Страсбург, 1985). Контрольна група - кролі з мимовільним загоєнням лазерного опіку та група кролів, яким лікування проводили за стандартною схемою: внутрішньовенне введення препаратів милдронату і тренталу, а також їх місцеве введення разом з емаксипіном. Перед введенням КФНК проводили суправітальне фарбування клітин розчином барвника DDC і вводили клітини кролям парабульбарно з лазерним опіком в дозі 0,5 мл, з кількістю 20-30?106 ядерних клітин. Хворі були розподілені на дві групи: контрольна група - 18 пацієнтів (29 очей), у яких лікування проводилось традиційним методом, основна група - 19 пацієнтів (31 око), лікування проводилось з застосуванням КФНК на фоні стандартної терапії. В експериментальному оці при парабульбарному введенні КФНК через шість годин, клітини що містять Y-хромосому, визначаються в склері, радужці, зоровому нерві, у судинній і сітчастій оболонці ока, тоді як у тканинах контрольного ока в цей термін спостереження клітини не визначаються.У дисертації досліджені механізми дії кріоконсервованих фетальних нервових клітин, а також теоретично обґрунтована можливість їх використання для лікування центральній хоріоретинальній дистрофії, що є актуальною задачею сучасної офтальмології, а також має важне медичне і соціальне значення. За допомогою генетичної мітки (У-хромосома) встановлена тропність до патологічного осередку кріоконсервованих фетальних нервових клітин, в якому вони реалізують терапевтичний ефект у ранній термін спостереження. Високий рівень флюоресценції в патологічно зміненій сітчастій оболонці визначається протягом 21 доби, що також може свідчити про цільову спрямованість міграції кріоконсервованих фетальних нервових клітин до патологічного осередку. Введені кріоконсервовані фетальні нервові клітини впливають на процеси репаративної регенерації в клітинах сітківки через активацію вироблення нейротрофічних факторів: трансформуючий фактор росту (TGF ?-1) і фактор росту нервів (GNF), які сприяють значному прискоренню термінів загоєння лазерного опіку сітківки в експерименті. Після введення кріоконсервованих фетальних нервових клітин підвищуються функціональні показники органа зору, що підтверджує ефективний вплив фетальних препаратів на основні патогенетичні ланки дистрофічної патології.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ
Вывод
Актуальною проблемою сучасної кріомедицини є вивчення механізмів дії кріоконсервованих фетальних клітин. Пошук багатофакторних терапевтичних засобів, які впливають на репаративні процеси в нервових клітинах сітківки, є важливою актуальною проблемою в офтальмології. Саме такою дією володіють кріоконсервовані препарати фетального походження, зокрема нервові клітини.
У дисертації досліджені механізми дії кріоконсервованих фетальних нервових клітин, а також теоретично обґрунтована можливість їх використання для лікування центральній хоріоретинальній дистрофії, що є актуальною задачею сучасної офтальмології, а також має важне медичне і соціальне значення.
1. За допомогою генетичної мітки (У-хромосома) встановлена тропність до патологічного осередку кріоконсервованих фетальних нервових клітин, в якому вони реалізують терапевтичний ефект у ранній термін спостереження.
2. При фарбуванні кріоконсервованих фетальних нервових клітин зондом 3,3-DDC встановлено високий рівень флюоресценції при люминісцентній мікроскопії. Високий рівень флюоресценції в патологічно зміненій сітчастій оболонці визначається протягом 21 доби, що також може свідчити про цільову спрямованість міграції кріоконсервованих фетальних нервових клітин до патологічного осередку.
3. Застосування кріоконсервованих фетальних нервових клітин експериментальним тваринам є високоефективним методом структурного відновлення патоморфологічно зміненої будови сітчастої оболонки.
4. Введені кріоконсервовані фетальні нервові клітини впливають на процеси репаративної регенерації в клітинах сітківки через активацію вироблення нейротрофічних факторів: трансформуючий фактор росту (TGF ?-1) і фактор росту нервів (GNF), які сприяють значному прискоренню термінів загоєння лазерного опіку сітківки в експерименті.
5. Найбільш ефективним є парабульбарне введення препарату кріоконсервованих фетальних нервових клітин на тлі проведеної консервативної терапії. Доведено, що терапію необхідно починати в більш ранній термін виникнення патологічного процесу, про що свідчить зміна показника нейротрофічних факторів (TGF ?-1 і GNF) у плазмі крові кролів при парабульбарному і внутрішньовенному введенні.
6. Після введення кріоконсервованих фетальних нервових клітин підвищуються функціональні показники органа зору, що підтверджує ефективний вплив фетальних препаратів на основні патогенетичні ланки дистрофічної патології. Кореляційний аналіз довів, що підвищення функціональних показників органа зору повязано з проведеним лікуванням і часом реабілітації пацієнтів. Установлено, що до 6-ти місяців спостереження гострота зору в основній групі підвищилася на 16% відносно контрольної групи; площа відносних скотом в основній групі хворих на 32% менш площі скотом в контрольній; показник електроокулографії в основній групі вище на 8%, ніж в контрольній; границі периферичного поля зору розширилися на 8% у порівнянні з контрольною групою.
ПЕРЕЛІК РОБІТ, ОПУБЛІКОВАНИХ, ЗА ТЕМОЮ ДИССЕРТАЦІЇ
1. Демин Ю.А., Петренко А.Ю., Литвинова Л.В. Эффективность применения криоконсервированных эмбриональных нейрональных клеток в комплексном лечении склеротических макулодистрофий // Пробл. криобиологии. 2004. №2. С. 89-94.
2. Демин Ю.А., Литвинова Л.В., Рязанцев В.В. Распределение донорских криоконсервированных эмбриональных нервных клеток при модельной патологии органа зрения по результатам генетической метки клеток // Актуальні питання медичної науки та практики. 2006. № 69, Кн. 2. С. 290-294.
3. Демин Ю.А., Литвинова Л.В. Влияние трансплантации криоконсервированных нервных клеток на секрецию трансформирующего фактора роста бета-1 после экспериментальной травмы сетчатки // Проблемы, достижения и перспективы развития медико-биологичексих наук и практического здравоохранения. 2006. Т. 142, Ч. 6. С. 25-27.
4. Дьомін Ю.А., Літвінова Л.В. Терапевтична ефективність застосування кріоконсервованих ембріональних нервових клітин у лікуванні хворих із центральною хоріоретинальною дистрофією // Клінічна фармація. 2007. Т. 11, № 2. С. 29-30.
5. Демин Ю.А., Литвинова Л.В. Распределение эмбриональных нервных клеток после введения in vivo при экспериментальной травме глаза // Пробл. криобиологии. 2007. № 2. С. 186-190.
6. Демин Ю.А., Литвинова Л.В. Морфологическая характеристик сетчатки в восстановительный период после лазерного ожога и введения криоконсервированных фетальных нервных клеток // Вісник проблем біології і медицини. 2008. № 1. С. 11-15.
7. Патент № 23129 Україна, МПК А 61F 9/00, А61К35/12. Спосіб комплексного лікування дистрофій сітківки ока // Дьомін Ю.А., ЛІТВІНОВАЛ.В. Заявлено.11.12.2006; Опубл. 10.05.2007. Бюл. № 6.
8. Застосування імунобіологічного препарату «Кріоцелл» для лікування дистрофічних захворювань ока. Метод. рекомендації МОЗ України. Сост.: Грищенко В.І., Риков О.С., Сергієнко А.М., Дьомін Ю.А., Літвінова Л.В., Петренко О.Ю., Рязанцев В.В. Харків, 2006. 16 с.
9. Demin Yu., Litvinova L. and Goncharuk E.I. Fetal cells for treatment of age-related macular degeneration: Proc. Of Abstracts. CRYOBIOMOL-2003. Portugal. 2003. P. 101.
10. Демин Ю.А., Литвинова Л.В. Эффективность применения препарата «Гемонейронал» в комплексном лечении сосудистой патологии органа зрения: Тези доповідей «Регенеративная медицина и трансплантация тканей в офтальмологии». Москва. 2005. С. 98-99.
11. Демин Ю.А., Литвинова Л.В., Петренко А.Ю., Семенченко О.А. Среда для гипотермического хранения клеток и тканей человека. Научно-практическая конференция, посвященная 130-летию со дня рождения академика В.П.Филатова. Одесса. 2005. С. 19-20.
12. Демин Ю.А., Литвинова Л.В. Клиническое обоснование использования криоконсервированных нервных клеток в лечении сосудистых и дистрофических заболеваний органа зрения. «Современные аспекты сосудистых и дистрофических заболеваний органа зрения»: Первая научно-практическая конференция молодых ученых - офтальмологов Украины. Харьков, 2006. С. 76-78.
13. Demin Yu., Litvinova L. Neurotrophic factors as possible effective agent in therapy of experimental retina burn with using cryopreserved embryonic nerve cells: Cryo-2006. Hamburg. 2006. Р. 159.