Особенности иммунологического ответа при лейкозе Раушера у мышей. Изучение гемопоэза зараженных мышей. Анализ роли макрофагов в защите организма против ретровируса. Оценка переносимости и воздействия пробиотика субалина и препарата серебра сильверола.
Аннотация к работе
Особенности иммунологического ответа при лейкозе Раушера у мышей изучены недостаточно. Morse, указывают на медленное прогрессивное ухудшение эритропоэза у мышей BALB/c, зараженных RLV, развивающуюся гипохромную анемию, неэффективный эритропоэз и инфильтрацию печени, селезенки, периферической крови эритроидными клетками-предшественниками. В своих работах, посвященных изучению гемопоэза мышей, инфицированных вирусом лейкоза Раушера, de N. J. Both с соавт. наблюдали через 5 дней после заражения возникновение лейкемических островков в красной пульпе, которые быстро распространялись по всей селезенке, и, спустя 3 недели после инфекции, приблизительно 60 % селезенки состояли из больших незрелых эритробластоподобных клеток [6]. Вирус лейкемии Раушера вызывает иммунодепрессию в организме восприимчивых мышей с ослаблением стимуляции Т-лимфоцитов [9-11] с помощью механизмов, сходных с механизмами вирусов кори, вируса иммунодефицита человека и цитомегаловируса [12].В группе «АГ » увеличение селезенки у животных произошло на 4-й неделе после заражения. Такие же изменения были зарегистрированы у мышей в группе «АГ субалин». В группе «Субалин» в течение 2,5 мес погибло 58,3 % животных. В дальнейшем оставшиеся 5 животных (41,7 %) из группы «Субалин», сохраняли стабильно удовлетворительное состояние на протяжении всего времени наблюдения. Таким образом, мы наблюдали гибель животных, которым вводили сильверол, хроническое развитие лейкоза Раушера у животных, которым вводили вирус, и некоторую задержку гибели у мышей, которым вместе с вирусом Раушера вводили стволовые клетки.У инфицированных мышей наблюдалось развитие лейкоза, сопровождающееся появлением базофильных клеток, в группе «АГ», снижение моноцитов в 4 раза и появление юных клеток. Установлено, что сильверол при введении его внутрибрюшинно мышам в дозе 0,5 мл обладает токсическим эффектом, вызывая 100 %-ю гибель животных в течение 48 ч.
Вывод
Рис. 1. Кривая летальности мышей групп «Сильверол», «АГ сильверол»
Рис. 2. Кривая летальности мышей групп «Субалин», «АГ субалин»
Была экспериментально воспроизведена хроническая форма лейкоза Раушера мышей. Путем пальпаторного метода исследования определяли размеры селезенки (2 раза в неделю). В группе «АГ » увеличение селезенки у животных произошло на 4-й неделе после заражения. Такие же изменения были зарегистрированы у мышей в группе «АГ субалин». Животные, которым вводили сильверол, погибли в течение первых двух суток с явлениями перитонита. Животные, зараженные вирусом, гибли постепенно в течение 11 мес, начиная с 25-го дня после заражения. К этому сроку наблюдения (11 мес), летальность этой группы составила 100 %. В группе «АГ СК» первое животное погибло через 3 мес после заражения, другие в последующем в течение 9 мес. В группе «СК» выживаемость животных составила 100 %. В группе «Субалин» в течение 2,5 мес погибло 58,3 % животных. Примерно такая же летальность наблюдалась в группе «АГ субалин» за этот же период времени. В дальнейшем оставшиеся 5 животных (41,7 %) из группы «Субалин», сохраняли стабильно удовлетворительное состояние на протяжении всего времени наблюдения.
Таким образом, мы наблюдали гибель животных, которым вводили сильверол, хроническое развитие лейкоза Раушера у животных, которым вводили вирус, и некоторую задержку гибели у мышей, которым вместе с вирусом Раушера вводили стволовые клетки.
Результаты гематологического исследования экспериментальных животных методом световой микроскопии представлены в табл. 1.
Таблица 1 Средние показатели лейкоцитарной формулы в мазках крови мышей BALB/c (расчет в% от 100 клеток)
Через 7 мес после заражения наблюдали появление базофильных клеток у животных всех экспериментальных групп (кроме группы «СК»). В контрольной группе здоровых животных наблюдали достоверное увеличение палочкоядерных нейтрофилов и уменьшение моноцитов более чем в 3 раза. В группе «АГ» также регистрировали достоверное снижение в 4 раза моноцитов и появление юных клеток.
Наибольшие достоверные изменения произошли в группе «СК». Здесь имело место уменьшение количества эозинофилов в 4,4 раза, лимфоцитов - в 1,8, а также увеличение палочкоядерныхи сегментоядерных нейтрофилов в 1,5 и 2,5 раза соответственно. В группе «АГ СК», кроме появления базофильных клеток, достоверных изменений не наблюдалось. Тестирование базофилов в крови инфицированных животных может подтверждать развитие миелоидного лейкоза. Относительная монопения и нейтрофилез с появлением юных клеток в группе «АГ» также свидетельствуют о развитии лейкемии.
Разница достоверна в сопоставлении с данными одной и той же группы в разные периоды времени (2 и 7 мес эксперимента).
Количественные изменения при гематологическом исследовании показали развитие анемии в группе «АГ»: эритроцитов 3,7± 1,3 х106 в 1 мкл крови (в группе интактных животных 8,5±3,3 х106) и увеличение абсолютного числа лейкоцитов в группе «АГ СК»: 16,9±9,0 х103 в 1 мкл крови (в группе интактных мышей 7,7±2,9 х103).
Влияние антигена и стволовых клеток на спонтанную и стимулированную пролиферацию спленоцитов отражено в табл. 2.
Таблица 2 Уровень спонтанной и стимулированной митогенами пролиферации спленоцитов у мышей экспериментальных и контрольной групп, имп/мин
Группа 6 мес 7 мес 9 мес
Спон CONA PWM Спон CONA PWM Спон CONA PWM
АГ 1131 1998 1242 3883 1016 50 2601 21287 20266,5
Здоровые 8136 30667 2097 1578,5 53681,5 11557
АГ СК 2034 1209 836 5091 3347 39,4
СК 10702 756 24,3
Из представленных данных видно, что у инфицированных вирусом Раушера мышей снижается митоген-стимулированная пролиферация (30667/1998 имп/мин на 6 мес и 53681/21287 имп/ мин на 9 мес), что является одним из характерных признаков развития иммуносупрессии.
Введение стволовых клеток на 6-м месяце опыта не стимулирует уровень пролиферативной активности (CONA соответственно: здоровые / АГ/ АГ СК = 30667 /1998 /1209 имп/мин). Однако на 7-м месце наблюдения спонтанная пролиферация в группе «АГ СК» возрастала в 1,3 раза (АГ/ АГ СК= 3883/5091 имп/мин), при увеличении CONA пролиферации в группе «АГ СК» в 3,3 раза (АГ/АГ СК=1016/3347 имп/мин).
Представленные результаты свидетельствуют об активизации инфекционного вирусного процесса, предопределяющего в последующем развитие лейкоза, однако требуют повторных, дополнительных исследований по изучению воздействия стволовых клеток на пролиферацию спленоцитов у мышей.У инфицированных мышей наблюдалось развитие лейкоза, сопровождающееся появлением базофильных клеток, в группе «АГ», снижение моноцитов в 4 раза и появление юных клеток. В группе «СК» уменьшилось количество эозинофилов в 4,4, лимфоцитов в 1,8 4. Установлено, что сильверол при введении его внутрибрюшинно мышам в дозе 0,5 мл обладает токсическим эффектом, вызывая 100 %-ю гибель животных в течение 48 ч. Причина этого эффекта не установлена
Количественные гематологические изменения показали развитие анемии в группе «АГ» и лейкоцитоз в группе «АГ СК».
5. Выявлено, что переносимость субалина при однократном внутрибрюшинном введении мышам в количестве 1,5 дозы удовлетворительная, а введение стволовых клеток одномоментно с антигеном снижает летальность мышей.
Митоген-стимулированная пролиферация спленоцитов у инфицированных мышей снизилась (иммуносупрессия), и введение стволовых клеток не стимулировало уровень пролиферативной активности.
Список литературы
1. Симонян Г. А., Хисамутдинов Ф. Ф. Ветеринарная гематология.- М.: Колос, 1995.- 223 с.
2. John M. Forger, III and Jan Cerny. Thymic Hormone Modulation of Leukemogenic Virus Replication/ John M. Forger, III and Jan Cerny //Cancer Research.- 1976.- № 36.- Р. 2048-2052.
3. Leonardi GP. Sustained hypertransfusion and induction of a transplantable myeloid leukemia in RLV-A- infected BALB/c mice/Leonardi GP, Lobue J, Manthos M, Orlic D, Mitra J// Ann N Y Acad Sci.- 1989.554.- P. 88-115.
4. Varet B. Genetic control of antinuclear antibodies in mice infected with Rauscher leukemia virus/Varet B, Cannat A, Gisselbrecht S//Cancer Res.- 1977? Apr; 37 (4).- P. 1115-8.
5. Morse B Erythrokinetics and ferrokinetics of a viral-induced murine erythroblastosis/Morse B, Giuliani D, Fredrickson T, LOBUE J.// Blood.- 1978.- Apr, 51 (4).- P. 623-32.
6. N.J. de Both/ The effect of Rauscher murine leukemia virus infection on the hemopoietic system of BALB/c mice. Cell proliferation and cell loss/ de Both NJ, Vermey M, van Griensven LJ. // Exp Hematol.- 1978, Jun;6 (6).- P. 515-27.
7. Gamba-Vitalo C. Thrombocytopenia in a retrovirally-induced murine erythroleukemia / Gamba-Vitalo C., Lobue J, Fredrickson TN, Ien Sm, Pedersen J, Gordon AS, Pincus MR // Ann Clin Lab Sci. 1992 Nov- Dec;22 (6):385-97.
8. Sydow G. The influence of macrophages on the leukemogenic activity of Rauscher murine leukemia virus/ Sydow G, Sydow H.// Arch Geschwulstforsch.- 1990.- 60 (4).- 279-82.
9. Gabrilovich D. Effects of murine leukemia viruses on the function of dendritic cells / Gabrilovich D., Roberts M. S., Harvey J. J. et al. // Eur. J. Immunol.- 1993.- 23.- P. 2932-2938.
10. Gabrilovich D. I. Mechanism of Dendritic Cell Dysfunction in Retroviral Infection of Mice/ Gabrilovich D. I., Patterson S., Timofeev A. V., Harvey J. J., and Knight S. C.// Clinical Immunology and Immunopatology.- 1996.- Vol. 80, No 2.- P. 139-146.
11. Gabrilovich D. I. Murine retrovirus induces defects in the function of dendritic cells at early stages of infection/ Gabrilovich D. I., Patterson S., Harvey J. J., Woods G. M., Elsley W. and Knight C.//Cell. Immunol.- 1994.- № 158.- Р. 167-181.
12. Naniche D. Generalized immunosuppression: how viruses undermine the immune response/ Naniche D. and Oldstone M.// CMLS, Cell. Mol. Life Sci.-2000.- 57.- P. 1399-1407.
13. Бергольц В.М., Кисляк Н. С., Еремеев В. С. Иммунология и иммунотерапия лейкоза.- М.: Медицина, 1978.- 404 с.