Оценка in vitro и in vivo гемопоэз-модулирующей и противовоспалительной функций TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы. Результаты клинического исследование влияния белка VARV-CrmB на эффективность блокирования активности цитокина TNF-альфа.
Аннотация к работе
Под действием TNF-? повышается функциональная активность нейтрофилов, в том числе мигрировавших в сустав с образованием активных форм кислорода и высвобождением лизосомальных ферментов, которые оказывают повреждающее действие на хрящевую и костную ткань. Известные в настоящее время ингибиторы TNF-? продемонстрировали относительно высокую эффективность в процессе контролируемых исследований терапии РА [Gartlehner G. et al., 2006, Kirou K.A. et al., 2006], но в реальной клинической практике около 30-40 % пациентов рефрактерны к терапии этими препаратами, менее чем у половины удается достигнуть полной или частичной ремиссии, а около 1/3 вынуждены прекращать лечение изза развития вторичной неэффективности или побочных эффектов через 2-3 года терапии. Исследовать влияние вирусного белка (VARV-CRMB) на TNF-зависимые изменения колониеобразующей активности костномозговых гемопоэтических предшественников мыши и человека. Исследовать влияние VARV-CRMB на TNF-зависимые изменения окислительно-метаболической активности и продукции IL-1? и IL-6 мононуклеарными клетками (МНК) человека. Использовались: моноклональные антитела к TNF-? компании "R&D System", среда М 3434 (Stem Cell Technology, Canada), среда Metho Cult GF Н 4434 (Stem Cell Technology, Canada), среда RPMI-1640, бычий коллаген II типа ("Sigma").Было обнаружено, что VARV-CRMB в отсутствие RMTNF-? не оказывает эффекта на костномозговой гемопоэз мыши (количество эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных колоний под воздействием VARV-CRMB достоверно не изменялось), что можно интерпретировать как отсутствие токсического эффекта изучаемого белка на гемопоэтические предшественники (рис. Вместе с тем при воздействии RMTNF-? в концентрации 2 нг/мл наблюдалось достоверное увеличение числа КОЕ-ГМ по сравнению с контролем (культуральная среда), а при воздействии RMTNF-? в концентрации 10 нг/мл не наблюдалось достоверного увеличения числа КОЕ-ГМ. В дальнейших экспериментах исследовалось влияние рекомбинантного белка-антагониста TNF (VARV-CRMB) в различных концентрациях на RMTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ (рис. Были проведены эксперименты по исследованию влияния рекомбинантного белка-антагониста TNF-? (VARV-CRMB) в различных концентрациях на RHTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ человека (рис. Введение поли-ABTNF и VARV-CRMB, судя по показателям шкальной оценки, приводило к снижению степени активности артрита у мышей на ранних сроках наблюдения.VARV-CRMB обладает способностью восстанавливать RMTNF-обусловленное снижение количества эритроидных колоний в метилцеллюлозной культуре клеток костного мозга мыши и человека. VARV-CRMB обладает свойством отменять эффекты TNF-? на продукцию IL-1? и IL-6 в культуре мононуклеарных клеток человека, снижая концентрацию цитокинов до уровня спонтанной продукции.
Вывод
Исследование влияния VARV-CRMB на колониеобразующую активность ККМ мышей.
Для того чтобы оценить TNF-блокирующие свойства белка VARV-CRMB был проведен ряд экспериментов на модели костномозгового гемопоэза мыши при воздействии RTNF-?.
Было обнаружено, что VARV-CRMB в отсутствие RMTNF-? не оказывает эффекта на костномозговой гемопоэз мыши (количество эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных колоний под воздействием VARV-CRMB достоверно не изменялось), что можно интерпретировать как отсутствие токсического эффекта изучаемого белка на гемопоэтические предшественники (рис. 1).
Рис. 1. Влияние CRMB на колониеобразующую активность ККМ мышей BALB/c
Из данных представленных на рисунке 2 видно, что внесение RMTNF-? в различных концентрациях в культуру ККМ мыши приводило к достоверному снижению количества эритроидных предшественников (БОЕ-Э КОЕ-Э). Вместе с тем при воздействии RMTNF-? в концентрации 2 нг/мл наблюдалось достоверное увеличение числа КОЕ-ГМ по сравнению с контролем (культуральная среда), а при воздействии RMTNF-? в концентрации 10 нг/мл не наблюдалось достоверного увеличения числа КОЕ-ГМ. Для исследования влияния VARV-CRMB на RMTNF-индуцированные изменения констномозгового гемопоэза была выбрана концентрация RMTNF-? 2 нг/мл.
В дальнейших экспериментах исследовалось влияние рекомбинантного белка-антагониста TNF (VARV-CRMB) в различных концентрациях на RMTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ (рис. 3).
Следствием воздействия RMTNF-? (2 нг/мл) в данной серии экспериментов было достоверное снижение количества эритроидных колоний (БОЕ-Э КОЕ-Э) и достоверное повышение количества КОЕ-ГМ по сравнению с контролем. Воздействие VARV-CRMB приводило к дозозависимому усилению эритроидного колониеобразования и восстановлению количества КОЕ-ГМ до контрольного уровня.
Рис. 2. Влияние RMTNF на колониеобразующую активность ККМ мышей
* - Достоверное снижение относительно контроля (р<0.05)
** Достоверное повышение относительно контроля (р<0.05).
Рис. 3. Влияние VARV-CRMB на RMTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ мышей
# Достоверное снижение относительно контроля (р < 0.05)
## Достоверное повышение относительно контроля (р < 0.05)
* Достоверное повышение относительно 2 нг/мл RMTNF-? (р < 0.05).
Исследование влияния VARV-CRMB на колониеобразующую активность ККМ человека.
Были проведены эксперименты по исследованию влияния рекомбинантного белка-антагониста TNF-? (VARV-CRMB) в различных концентрациях на RHTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ человека (рис. 4). Предварительно было установлено, что RHTNF-? (2 нг/мл) достоверно снижал количество эритроидных и гранулоцитарно-макрофагальных колоний в культуре ККМ человека. Добавление в культуру клеток VARV-CRMB в дозе 2 нг/мл не оказывало влияние на RHTNF-индуцированное снижение количества гемопоэтических предшественников. А в дозах 6 и 12 нг/мл VARV-CRMB дозозависимым образом повышал исследуемые показатели, отменяя эффект RHTNF-?.
Рис. 4. Влияние VARV-CRMB на RHTNF-индуцированные изменения колониеобразующей активности ККМ человека
* - относительно контроля (р < 0.05); ** - относительно 2 нг TNF-? (р < 0.05).
Оценка влияния VARV-CRMB на функциональную активность мононуклеарных клеток.
Биологическая активность TNF-? опосредуется связыванием со специфическими рецепторами, экспрессированными на различных клетках, Поэтому, было проведено исследование по оценке способности VARV-CRMB отменять эффекты TNF-? на функциональную активность мононуклеарных клеток человека.
Было показано, что предварительная соинкубация TNF-? и белка VARV-CRMB в различных концентрациях (100 нг/мл и 10 нг/мл) полностью отменяет эффекты TNF-? на продукцию IL-1? и IL-6 в культуре МНК, а концентрации IL снижалась до уровня спонтанной продукции (табл. 1). При изучении влияния TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы (VARV-CRMB) на TNF-индуцированную генерацию активных метаболитов кислорода установлено, что тестируемый белок отменяет TNF-стимулированный хемилюминесцентный ответ клеток (табл. 2).
Таблица 1. Содержание цитокинов IL-1? и IL-6 в кондиционной среде культуры МНК условно здоровых доноров через 24 ч после добавления в среду различных стимуляторов (M± m), n=6
Примечание: a - достоверно по сравнению с гр. "Спонтанная" (р < 0.05) b - достоверно по сравнению с группой "TNF 2 нг/мл" (р < 0.05) c - достоверно по сравнению с группой "VARV-CRMB 100 нг/мл" (р < 0.05).
Таблица 2. Эффективность нейтрализации стимулирующего действия RTNF различными TNF-антагонистами (M±m)
TNF и препараты TNF-антагон. Суммарный ХЛ ответ (имп/103 МНК/30 мин) p
Таким образом, при изучении влияния TNF-связывающего белка VARV-CRMB была продемонстрирована достаточно высокая эффективность его блокирующей способности TNF-индуцированной генерации АМК и продукции IL-1? и IL-6 МНК здоровых доноров.
Исследование противовоспалительных эффектов VARV-CRMB в модели коллаген-индуцированного артрита.
Модель КИА была выбрана для оценки in vivo противовоспалительных эффектов белка VARV-CRMB. Результаты шкальной оценки клинического проявления КИА у мышей разных представлены в табл. 3. В динамике развития КИА (II группа) наблюдали закономерное усиление клинических проявлений артрита, которое, судя по результатам шкальной оценки, повышается вплоть до 21 суток наблюдения. Введение поли-ABTNF и VARV-CRMB, судя по показателям шкальной оценки, приводило к снижению степени активности артрита у мышей на ранних сроках наблюдения. Так, только через 2 суток после введения поли-ABTNF сумма баллов по шкале была статистически ниже, чем у мышей II группы (КИА). В то же время, у мышей IV группы (КИА VARV-CRMB) сумма баллов была достоверно меньшей на 2 и 7 сут. Затем, к 14 и 21 суткам показатели шкальной оценки степени активности артрита во всех сравниваемых группах практически не отличались (табл. 3). tnf белок противовоспалительная гемопоэз
Таблица 3. Показатели шкальной оценки клинических проявлений коллаген-индуцированного артрита у мышей в динамике его развития и при введении поли-ABTNF и VARV-CRMB (M±m)
Гр. животных Сроки наблюдения, сут.
2 7 14 21
I. Контроль 0 0 0 0
II КИА 3,8±0,17 5,3±0,6 7,2±1,4 9,6±1,5
III КИА ABTNF 2,7±0,7** 4,4±0,9 6,9±0,8 9,7±1,2
IV КИА CRMB 2,2±0,3** 3,7±0,5** 6,2±0,6 9,3±1,7
Примечание: * - достоверные различия по сравнению с I группой (контроль);
** - по сравнению с данными животных II группы; Х - по сравнению с данными животных III группы (p<0,05).
Развитие воспалительного процесса при КИА реализуется за счет эффекторных клеток крови (нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов), имеющих костномозговое происхождение. Для оценки активности воспаления была проведена оценка численности и функционального состояния лейкоцитов крови.
На ранних сроках (2 сутки) развития КИА общее количество лейкоцитов крови снижалось, затем возрастало (7 сутки), что отражает классический характер течения воспалительного процесса (табл. 4). Снижение общего количества лейкоцитов крови на ранних сроках наблюдения (2 сутки), вероятно, связано с усилением миграции этих клеток в ткани, а рост их численности к 7 суткам наблюдения, возможно, является результатом активации костномозгового кроветворения. При введении поли-ABTNF численность лейкоцитов крови менялась волнообразно. Так, на 2 сутки после введения поли-ABTNF численность лейкоцитов возрастала, к 7 суткам снижалась, а к 14 суткам, напротив, возрастала. На 2 сутки после введения VARV-CRMB численность лейкоцитов крови снижалась, затем происходила нормализация, а к 14 суткам имела тенденцию к росту.
Таблица 4. Изменение количества лейкоцитов крови в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-ABTNF и VARV-CRMB (M±m)
Гр. животных Сроки наблюдения, сут.
2 7 14 21
II КИА 10,6±0,2* 18,9±2,2* 14,1±2,3 11,3±5,0
III КИА ABTNF 17,1±2,1*/** 8,9±1,9*/** 17,2±3,4 10,4±2,1
IV КИА CRMB 9,4±0,6*/X 12,3±2,3 X 19±5 10,9±3,4
I. Контроль 14,2±2,4
Примечание: * - достоверные различия по сравнению с I группой (контроль); ** - по сравнению с данными животных II группы; Х - по сравнению с данными мышей III группы (p<0,05).
Анализ результатов оценки клеточных элементов крови показал, что при развитии КИА происходит увеличение как относительной, так и абсолютной численности нейтрофилов крови, которые играют ключевую роль в реализации воспалительного процесса [Маянский 2007]. Результаты исследования показали, что введение поли-ABTNF и VARV-CRMB приводит к снижению численности нейтрофилов крови (данные не приведены).
Пополнение популяции нейтрофильных гранулоцитов в процессе развития КИА происходит, очевидно, за счет увеличения численности гранулоцитарно-макрофагальных предшественников в условиях активной продукции TNF-?. В дальнейших экспериментах исследовалось влияние введения поли-ABTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CRMB на состояние костномозгового кроветворения мышей в динамике развития КИА. Показано, что введение животным антител и VARV-CRMB приводит к достоверному снижению числа КОЕ-ГМ на 7 сутки наблюдения, а в последующие сроки исследования не наблюдается корректирующих эффектов от введения препаратов. На 3 неделе обнаруживается достоверная стимуляция исследуемого показателя под воздействием VARV-CRMB (Рис. 5). Повышение количества КОЕ-ГМ наблюдалось в группе КИА на всех сроках исследования.
Рис. 5. Влияние VARV-CRMB и анти-TNF антител на количество КОЕ-ГМ в процессе развития КИА: # - достоверно относительно контроля; * - достоверно относительно КИА
Было проведено исследование КАС и содержания суммарных СГАГ в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей.
КАС в динамике развития КИА закономерно возрастает, что свидетельствует о повышении суммарной активности коллагеназы и протеаз [Шараев, 1987]. При этом результаты исследования показали, что КАС в динамике развития КИА достигает максимума к 14 суткам наблюдения. Введение поли-ABTNF и VARV-CRMB приводило к снижению КАС. Однако исследование показало, что введение VARV-CRMB был более эффективным, чем поли-ABTNF (табл. 5).
Активация КАС в динамике развития КИА сопровождается разрушением хрящевой ткани, о чем свидетельствуют данные исследования СГАГ [Шараев, 1987]. Результаты исследования показали, что уровень СГАГ в динамике развития КИА закономерно возрастает. При этом введение поли-ABTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы VARV-CRMB приводило к снижению уровня СГАГ, что говорит о нейтрализации эффекта действия TNF-? (табл. 6).
Таблица 5. Показатели коллагенолитической активности сыворотки крови в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-ABTNF и VARV-CRMB (M±m)
Группы животных Сроки наблюдения, сут
2 7 14 21
I. Контроль 5,3±0,6 5,7±0,3 5,1±0,7 5,5±0,4
II КИА 11,6±1,4* 18,1±2,2* 19,2±1,9* 17,4±2,4*
III КИА ABTNF 8,2±0,7*/** 16,1±1,4* 17,2±1,5* 17,6±1,8*
IV КИА CRMB 6,4±0,6*/** 9,7±1,6*/**/Х 16,3±2,5* 15,7±2,1*
Примечание: * - достоверные различия по сравнению с I группой (контроль); ** - по сравнению с данными животных II группы; Х - по сравнению с данными мышей III группы (p<0,05).
Таблица 6. Изменение содержания суммарных сывороточных гликозаминогликанов в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-ABTNF и VARV-CRMB (M±m)
Группы животных Сроки наблюдения, сут
2 7 14 21
I. Контроль 21,3±1,2 20,7±1,6 19,7±1,5 20,1±1,4
II КИА 32,3±2,2* 44,5±2,7* 41,2±2,4* 56,3±3,6*
III КИА ABTNF 26,2±1,5*/** 36,3±1,9*/** 40,7±2,8* 51,4±3,3*
IV КИА CRMB 25,7±1,7** 31,2±1,1*/**/Х 35,7±2,3* 49,3±2,7*
Примечание: * - достоверные различия по сравнению с I группой (контроль); ** - по сравнению с данными животных II группы; Х - по сравнению с данными мышей III группы (p<0,05).
Таким образом, результаты исследования показали, что развитие КИА сопровождается разрушением соединительной ткани и, по всей видимости, суставов животных. При этом известно, что поражение суставов при аутоиммунных заболеваниях зависит от эффекта действия TNF-?, включая индукцию/стимуляцию окислительных процессов эффекторными клетками воспаления, в связи с чем, нами были проведены исследования по оценке окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови мышей.
Результаты исследования показали, что ОМ функция лейкоцитов крови в динамике развития КИА значительно усиливается и сохраняется на высоком уровне до конца срока наблюдения (рис. 10). Введение поли-ABTNF и VARV-CRMB мышам с КИА приводило к достоверному снижению ОМФ лейкоцитов крови. При этом, VARV-CRMB оказывал более выраженный эффект на ОМ функцию лейкоцитов крови мышей с КИА (рис. 6).
Рис. 6. Изменение окислительно-метаболической функции лейкоцитов крови в динамике развития коллаген-индуцированного артрита у мышей и при введении поли-ABTNF и VARV-CRMB
* - достоверные различия по сравнению с данными контрольной группы; Х - по сравнению с II группой (КИА) и ¦ - по сравнению с III группой (КИА поли-ABTNF).
Хронические воспалительные процессы (в т.ч. аутоиммунные, к которым относится ревматоидный артрит) часто сопровождаются формированием анемии. В процессе развития коллаген-индуцированного артрита не наблюдалось достоверного снижение количества эритроидных колоний на 1 неделе исследования; в последующие сроки этот показатель не отличался от контроля. На модели коллаген-индуцированного артрита показано, что введение животным поли-ABTNF и VARV-CRMB приводит к достоверному повышению количества (БОЕ-Э КОЕ-Э) на 1 неделе (рис. 7).
Рис. 7. Влияние VARV-CRMB и поли-ABTNF на количество БОЕ-Э КОЕ-Э в процессе развития КИА: # - достоверно относительно контроля; * - достоверно относительно КИА
В наших исследованиях не обнаружено анемии у экспериментальных животных в процессе развития КИА. Тем не менее на ранних сроках (1 неделя) поли-ABTNF и VARV-CRMB оказывают достоверный стимулирующий эффект на эритроидное колониеобразование.
Можно предположить, что введение поли-ABTNF и VARV-CRMB приводит к снижению степени активности артрита у мышей на ранних сроках наблюдения. При введении как поли-ABTNF, так и VARV-CRMB на ранних сроках исследования отмечается снижение КАС и содержание ГАГ в сыворотке крови мышей.
Изучение эффектов RMTNF и VARV-CRMB при эпикутанном способе воздействия.
Метод чрезкожной доставки лекарственных средств в составе мазей, гелей и других форм широко применяется в клинической практике. Поэтому было решено исследовать TNF-нейтрализующей способности белка VARV-Crmb при эпикутанном аппликативном методе воздействия. Животные были разделены на 4 группы: I-я (контрольная) группа (15 мышей) - эпикутанная обработка фосфатным солевым раствором (PBS); II-я группа - эпикутанная аппликация RMTNF в дозе 500 нг/мышь (15 мышей); III-я группа - обработка рекомбинантным VARV-CRMB в дозе 500 нг/мышь (15 мышей); IV группа - 500 нг RMTNF 500 нг VARV-CRMB спустя 30 мин (15 мышей). Животных выводили из эксперимента через 2, 24 и 72 ч после эпикутанных аппликаций.
У мышей всех групп, за исключением животных, обработанных VARV-Crmb, наблюдалось усиление миграции лейкоцитов. При обработке мышей VARV-Crmb миграционная активность клеток не менялась. В то же время практически на всех сроках наблюдения VARV-Crmb достоверно снижал количество мигрирующих лейкоцитов у RMTNF-обработанных мышей (табл. 7).
Показано, что уже через 2 ч после эпикутанной обработки RMTNF-? происходит усиление активности ОМ функции лейкоцитов крови мышей, которое достигает максимума через 24 ч, а затем постепенно снижается, достигая контрольных величин к 72 ч наблюдения. При эпикутанной аппликации VARV-CRMB показатель, отражающий ОМ функции лейкоцитов крови мышей, обработанных RMTNF-?, значительно снижался, что свидетельствует о TNF-нейтрализующей способности белка (рис. 8).
В работе исследовалось влияние TNF-нейтрализующего рекомбинантного белка VARV-CRMB и RMTNF-? при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей.
Таблица 7. Общее количество лейкоцитов крови и их миграционная активность у мышей после аппликации белка VARV-Crmb RMTNF-обработанным животным
Группы животных n лейкоцитов крови, х 106/л / n мигрирующих лейкоцитов, х 103
2 ч 24 ч 72 ч
Контроль 4,2±0,7 8,4±3,7 16,0±1,9
7,6±0,8 11,3±0,7 15,3±1,5
TNF-? 8,7±0,7* 17,1±0,6* 18,6±2,8
17,8±1,4* 8,2 ±0,9 11,8±1,6
Crmb 7,0±0,5* 18,1±0,9* 12,5±3,7
8,0 ±1,7X 8,7±1,0 7,1± 0,7*
TNF Crmb 2,9±0,3*/ X 9,6±1,8 X 15,2±1,5
11,7±1,1 X 10,2 ±1,2 9,7 ± 0,9
* - достоверные различия по сравнению с данными у мышей контрольной группы; X - по сравнению с данными у мышей, обработанных RMTNF-?.
Рис. 8. Изменение спонтанного ХЛ ответа лейкоцитов крови после аппликации белка VARV-Crmb RMTNF-обработанным мышам: * - достоверно относительно контроля; ** - достоверно относительно TNF-?
Накожные аппликации RMTNF-? в течение трех суток вызывают статистически достоверное снижение количества эритроидных колоний (БОЕ-Э КОЕ-Э), в основном за счет поздних КОЕ-Э (рис. 9). Совместное эпикутанное нанесение TNF VARV-CRMB восстанавливает как количество эритроидных колоний в целом, так и число КОЕ-Э. После аппликации RMTNF-? повышается количество КОЕ-ГМ, VARV-Crmb достоверно снижает КОЕ-ГМ относительно RMTNF до уровня контрольных значений. Аналогичные изменения наблюдаются через сутки после однократной аппликации (рис. 10).
Рис. 9. Влияние VARV-CRMB и RMTNF-? при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей (трехкратная аппликация): # - достоверно относительно контроля, * - достоверно относительно TNF-?
Рис. 10. Влияние VARV-CRMB и RMTNF-? при эпикутанном способе воздействия на колониеобразующую активность ККМ мышей (однократная аппликация): # - достоверно относительно контроля, * - достоверно относительно TNF-?
Результаты оценки влияния белка VARV-CRMB и RMTNF-? на гемопоэз, полученные при использовании эпикутанного способа воздействия, имеют сходства с результатами, полученными в экспериментах in vitro на культуре ККМ мышей.
Рекомбинантный вирусный белок VARV-CRMB, показал свою эффективность в моделях in vitro и in vivo. Совокупность полученных нами данных позволяет рассматривать рекомбинантный вирусный белок VARV-CRMB как новый потенциальный TNF-антагонист, эффекты которого могут быть реализованы за счет его нейтрализующей способности к TNF-индуцированноу снижению колонеобразующей активности ККМ, активации окислительно-метаболической функции и продукции провоспалительных цитокинов эффекторными клетками.1. VARV-CRMB обладает способностью восстанавливать RMTNF-обусловленное снижение количества эритроидных колоний в метилцеллюлозной культуре клеток костного мозга мыши и человека.
2. VARV-CRMB обладает свойством отменять эффекты TNF-? на продукцию IL-1? и IL-6 в культуре мононуклеарных клеток человека, снижая концентрацию цитокинов до уровня спонтанной продукции.
3. В культуре мононуклеарных клеток человека VARV-CRMB достоверно снижает TNF-индуцированную генерацию активных метаболитов кислорода.
4. В модели коллаген-индуцированного артрита введение VARV-CRMB приводит к снижению степени активности артрита, коллагенолитической активности сыворотки и содержания гликозаминогликанов на ранних сроках коллаген-индуцированного артрита.
5. На ранних сроках развития коллаген-индуцированного артрита введение VARV-CRMB приводит к снижению численности нейтрофильных гранулоцитов и гемопоэтических предшественников, а также к достоверному снижению окислительно-метаболической активности лейкоцитов.
6. При эпикутанном воздействии VARV-CRMB обладает способностью восстанавливать RMTNF-обусловленное снижение количества эритроидных колоний в метилцеллюлозной культуре клеток костного мозга, нормализует повышенную миграционную и окислительно-метаболическую активность лейкоцитов RMTNF-обработанных мышей.
7. Белок VARV-CRMB in vitro и in vivo демонстрирует TNF-связывающую способность, оказывая противовоспалительный эффект.
2. Цырендоржиев Д.Д., Сенников С. В., Вязовая Е.А., Гилева И.П., Рязанкин И.А., Лебедев Л.Р., Топоркова Л.Б., Курилин В.В., Петухова А.А., Орловская И.А. Влияние рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на миграционную и окислительно-метаболическую функцию лейкоцитов крови мышей при эрикутанной аппликации фактора некроза опухолей // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - 2011. - № 3. - С. 73-79.
3. Цырендоржиев Д.Д., Сенников С. В., Орловская И.А., Курилин В.В., Лопатникова Ю.А., Гилева И.П., Щелкунов С. Н., Рязанкин И.А., Басова А.А., Козлов В.А. Влияние TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на TNF-индуцированную окислительно-метаболическую активность и продукцию IL-1? И IL-6 мононуклеарными клетками здоровых доноров // Иммунология. - 2011. - № 4. - С. 209-213.
4. Петухова А.А., Топоркова Л.Б., Вязовая Е.А., Гилева И.П., Орловская И.А. Влияние рекомбинантного TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей Balb/c при эпикутанной аппликации RMTNF. Всероссийская научная конференция "Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии", г. Новосибирск, Россия, 15-17 сентября 2010. // Цитокины и воспаление. - 2010. - №9. - С. 56.
5. Петухова А.А., Топоркова Л.Б., Гилева И.П., Орловская И.А. Изучение влияния RMTNF и TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей Balb/c. Всероссийской научно-практической конференции "Дни иммунологии в Сибири", г. Красноярск, Россия 2-3 марта 2010. Сборник материалов конференции. - С. 140-142.
6. Басова А.А., Топоркова Л.Б., Гилева И.П., Орловская И.А. Исследование влияния TNF-нейтрализующего белка вируса натуральной оспы на колониеобразующую активность клеток костного мозга человека. 8-я итоговая конференция НИИКИ СО РАМН "Иммуногенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике", г. Новосибирск, Россия, 21-23 июня 2011. Сборник материалов конференции. - С. 10.
7. Басова А.А. Топоркова Л.Б., Гилева И.П., Орловская И.А. Исследование влияния TNF-нейтрализующего белка вируса натуральной оспы на костномозговой гемопоэз мышей линии MRL-lpr/lpr. Конференция молодых ученых "Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия", г. Санкт-Петербург, Россия, 21-22 декабря 2010. Сборник материалов конференции. - С. 16.