Изучение влияния пирроксана на активность основных карбоксипептидаз в нервной ткани крыс позволило выяснить, что так как при воздействии активность КПН и ФМСФ-КП изменяется однонаправлено, то оба фермента обладают сходной биологической функцией.
Аннотация к работе
Современная медицина располагает значительным рядом "экзогенных" синтетических адренопозитивных и адреноблокирующих препаратов, действие которых связано с влиянием на адренергические процессы. В частности ?-адреноблокаторы, к числу которых относиться пирроксан. ?-адреноблокаторы оказывают прессорное действие, которое связано с действием вещества на рецепторы, но наличие побочных эффектов, таких как, артериальная гипотония, брадикардия, трудно объяснить только влиянием этого препарата на рецепторы.КПН (КПЕ, энкефалинконвертаза) впервые выделена и охарактеризована Fricker и Snyder из хромаффинных гранул надпочечников быка, как фермент, образующий энкефалины из их предшественников [20]. Позднее фермент был выделен и очищен из мозга [9], гипофиза, островков Лангерганса поджелудочной железы. В аминокислотной последовательности КПН обнаружен также Ca2 -связывающий участок, но ионы Ca2 влияют не на активность, а на стабильность, агрегацию и способность к связыванию с мембранами. Данный фермент сильно (примерно в 5-10 раз) активируется ионами Со2 , в меньшей степени (в 2-3 раза) - ионами Ni2 , ингибируется ионами Cd2 и Cu2 , хелатирующими агентами: ЭДТА, о-фенантролином, при применении которых активность фермента восстанавливается добавлением ионов Zn2 . Фермент обнаружен в секреторных везикулах, содержащих энкефалины, атриальный натрийуретический фактор, глюкагон, инсулин, АКТГ, пролактин, вещество P, вазопрессин и окситоцин и другие регуляторные пептиды.Исходя из сходства действия адреналина с эффектами, наблюдающимися при раздражении симпатических нервных волокон, было высказано предположение, что передача нервного возбуждения с симпатических нервных окончаний на эффекторные клетки осуществляется при участии химического передатчика (медиатора), которым является адреналин или адренолиноподобные вещества. В дальнейшем был раскрыт процесс биосинтеза адреналина, начиная от аминокислоты тирозина, через диоксифенилаланин (L-дофа), дофамин, норадреналин до адреналина. Образующийся в организме эндогенный адреналин частично участвует в процессах проведения нервного возбуждения, но главным образом играет роль гормонального вещества, влияющего на метаболические процессы. По современным представлениям, норадреналин, выделяющийся в процессе нервного импульса из пресинаптических нервных окончаний, воздействует на норадреналино-чувствительную аденилатциклазу клеточной мембраны адренорецепторной системы, что приводит к усиленню образования внутриклеточного 3"-5"-циклического аденозинмонофосфата (ЦАМФ), играющего роль "вторичного" передатчика (медиатора), к активации биосинтеза макроэргических соединений и далее к осуществлению адренергических физиологических эффектов. Влияние адреналина на артериальное давление предполагает несколько фаз: в первую фазу происходит активация ?1-адренорецепторов миокарда, что ведет к увеличению сердечного выброса; во второю - задержка подъема давления (вагодепрессорный рефлекторный эффект); третья фаза сопровождается влиянием адреналина на ? (подъем) и ? (спад) рецепторы сосудов и четвертая - следовая гипотензия, быстрый нейрональный захват адреналина, инактивация его избытка ферментом КОМТ.Исследования проводили на самцах белых беспородных крыс массой 350-400г. Животные опытной группы получали в течение двух недель в качестве единственного источника жидкости водный раствор пирроксана, содержащий 5% р-р сахарозы, при этом средняя доза препарата составляла 150мкг/кг/сут.Карбоксипептидазо-В-подобную активность определяли флюориметрическим методом Фрикер и Снайдер с модификациями.50мкл 1% гомогената смешивали со 150мкл 50ММ натрий-ацетатного буфера, РН 5.6, в случае контрольной пробы; в случае опытной пробы 50мкл 1% гомогената смешивали со 140мкл 50ММ натрий-ацетатного буфера, РН 5.6 с добавлением 10мкл ГЭМЯК. Реакцию начинали прибавлением 50мкл субстрата (DNS-фен-лей-арг, приготовленного на 50ММ натрий-ацетатном буфере при РН 5.6).Количество белка в пробах определяли по методу Лоури. Этот метод сочетает в себе биуретовую реакцию (реакцию на пептидные связи) и реакцию Фолина (на тирозин и триптофан). Для проведения цветной реакции отбирали 0,5мл р-ра белка, приливали по 1мл реактива С, приготовленного следующим образом: р-р А (21,6г Na2CO3?10H2O и 4г NAOH растворили в 1л воды) и р-р В (0,5г CUSO4?5H2O и 1г цитрата натрия растворяли в 10мл воды) смешивали в отношении 50:1.Для оценки достоверности различий между контрольной и опытной группой использовали t-критерий Стьюдента. Это параметрический критерий, используемый для проверки гипотез о достоверности разнице средних при анализе количественных данных о популяциях с нормальным распределением и одинаковой вариантой.Результаты исследования активности КПН и ФМСФ-КП в гипофизе, гипоталамусе, стриатуме, больших полушариях, четверохолмии и надпочечниках под влиянием пирроксана представлены на двух диаграммах. В ходе проведения эксперимента было установлено, что получение животными пирроксана приводит к существенному снижению