Вивчення функціонального стану лейкоцитів за допомогою кількісної люмінесценції із застосуванням акридинового оранжевого в комплексі імунологічних методів при різних патологіях - Автореферат
Люмінесцентний метод визначення активності лейкоцитів крові в організмі людини із застосуванням акридинового оранжевого. Роль імунної та нейроендокринної систем в розвитку адаптаційного синдрому при операційному лікуванні хворих при різних патологіях.
Аннотация к работе
Дана робота проводилася в рамках держбюджетної теми №04/91 "Розробка критеріїв оцінки функціональної активності лімфоцитів в організмі людини і тварин і їх імунокорекція" (№ держреєстрації 01910054345). Надалі ці дослідження були продовжені при виконанні держбюджетної теми № 4/97 "Вивчення впливу конституціональних особливостей антигенструктурного поліморфізму на гомеостатичну функцію імунної системи на ранніх етапах онтогенезу в умовах забрудненого навколишнього середовища" (№ держреєстрації 0197U012790), та 4/00 "Розробка і впровадження патогенетичного підходу до аналізу стану імунної системи в організмі людини і тварин на різних етапах" (№ держреєстрації 0100U001725). Порівняти інформативність показників люмінесценції лімфоцитів крові, пофарбованих АО: інтенсивність люмінесценції при довжині хвилі 530 нм (І530), 640 нм (І640), а-параметр (І640/І530) та індекси люмінесценції (ІЛ 640 = І640 клітини / І640 фону; ІЛ 530 = І530 клітини / І530 фону). За допомогою люмінесцентного аналізу з застосуванням АО дослідити роль імунної та нейроендокринної систем в розвитку загального адаптаційного синдрому при операційному лікуванні у хірургічних хворих при різних патологіях, а також оцінити стан імунної системи в онкологічних хворих. Запропоновано застосування люмінесцентного методу з АО за різних клінічних умов для визначення імунного статусу людини: заміна аутоплазми на ембріональну телячу сироватку (ЕТС), що дозволяє контролювати світіння фону; введення індексів люмінесценції (ІЛ), що дозволяє порівнювати результати люмінесцентних досліджень, отриманих при різних рівнях напруги на ФЕМ і на різних мікроскопах; готування мазків-відбитків, що дозволяє сумарно оцінювати білок-синтетичну активність лімфоцитів.Імунологічні показники в даній групі обстежених реєстрували на етапах загальної анестезії і хірургічного лікування: 1-й етап - контроль (вихідний стан), 2-й - 30-40 хвилин після премедикації; 3-й - через 30-40 хвилин після інтубації трахеї і індукції; 4-й - через 30-40 хвилин після початку операції; 5-й етап - після закінчення операції; 6-й етап - на наступний день після операції; 7-й етап - через тиждень після операції. Відповідно до мети роботи, патогенетичну значимість люмінесцентного методу з застосуванням акридинового оранжевого досліджували з використанням комплексу патогенетичних методів, що оцінюють стан імунної системи людини за рівнем новоутворення і міграції лімфоцитів у внутрішньому середовищі організму і характеризують основні етапи гісто-і імуногенезу лімфоцитів: активацію, проліферацію, диференціювання і міграцію лімфоцитів в організмі на момент обстеження: 1) цитогенетичного - по аналізу кількості лімфоцитів, які складають клас (КЛ) без асоціацій акроцентричних хромосом (КЛ О ААХ) і з двома акроцентриками в асоціаціях (КЛ 2 ААХ), у сумі (КЛ О 2 ААХ); 2) цитоморфометричного - по аналізу кількості лімфоцитів, які складають КЛ із діаметром клітин до 6,0 мкм (КЛ Ј 6,0 мкм); 3) авідного розеткового - по аналізу кількості лімфоцитів, що приєднали більш 8 еритроцитів барана (КЛ і 8 ЕБ). Для відпрацьовування оптимальних параметрів приготування, фіксації та аналізу препаратів лейкоцитів периферійної крові люмінесцентним методом із застосуванням АО була проведена серія дослідів на однотипних мазках у результаті чого був відпрацьован наступний режим: фіксація мазків крові сумішшю абсолютний етиловий спирт:ацетон - 20 хвилин із наступною проводкою через батарею етилових спиртів концентрації, що знижується (960-15 хвилин; 600-10 хвилин; 300-5 хвилин; дист. вода-ополіскування); інкубування 5 хвилин у цитрато-фосфатному буфері (ЦФБ) із рн = 6; фарбування препарату розчином АО на ЦФБ (рн = 6) із концентрацією 1:20 000 - 10 хвилин із наступним ополіскуванням у 2-ух порціях свіжого ЦФБ; препарат охороняється від висихання вологим покривним склом із наступною окантовкою 30 % полістеролом на ксилолі; на мазку аналізується люмінесценція 100 лімфоцитів, 50 сегментоядерцевих лейкоцитів і 10 значень світіння фону на різних ділянках препарату. Після одержання мітогеного і (або) антигеного сигналу лімфоцити в центральних і периферійних лімфоїдних органах активуються; у них підсилюється білоксинтетична активність; лімфоцити проходять визначені етапи імуногенезу, створюючи клони ефекторних лімфоцитів і клітин памяті. Наступного дня після операції і через 7 днів після неї I640 лімфоцитів залишається високою і вже більше характеризує мобілізацію імунної системи на відновлювальні процеси.Розроблено та впроваджено в лабораторну імунологічну діагностику метод кількісної люмінесценції з використанням акридинового оранжевого (АО) для оцінки функціональної активності циркулюючих лейкоцитів, який включає: заміну аутоплазми на ембріональну телячу сироватку з низьким рівнем люмінесценції; аналіз інтенсивності люмінесценції лейкоцитів периферійної крові при довжині хвилі 640 нм (І640); порівняння результатів люмінесцентного аналізу з застосуванням АО, отриманих при роботі на різних рівнях напруги на фотоелек