Покращення способу кріоконсервації сперми бугаїв у відкритих гранулах шляхом розроблення нового лактозо-цитратно-гліцерино-жовткового розріджувача. Досягнення поліпшення якісних показників заморожено-відтаяної сперми та запліднюючої здатності сперміїв.
Аннотация к работе
Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата сільськогосподарських наукНа цій основі запропоновано удосконалений спосіб заморожування сперми бугаїв у необлицьованих гранулах, який дає можливість підвищити на 10-30% якісні показники заморожено-розмороженої сперми та запліднюючу здатність сперміїв, простий у використанні, не потребує додаткових реактивів та обладнання. Ключові слова: кріоконсервація, спермії, нативна, заморожено-відтаяна сперма, осмоляльність, розріджувачі, рухливість, виживаність, запліднююча здатність. Разработан новый, лактозо-цитратно-глицерино-желточный разбавитель (ЛЦГЖ), который имеет такую же общую осмоляльную концентрацию растворенных веществ, как УЛГЖ (1372 мосм/л), такое ж содержание глицерина и желтка, но отличается от последнего наличием цитрата натрия и определенным процентным соотношением между лактозой и цитратом натрия - 90/10. Для использования новых разбавителей подобраны оптимальные режимы обработки спермы: разбавления (корректирующим ЛЖ дополучения 60-90 млн. спермиев в дозе при температуре 32-35?С, основным ЛЦГЖ дополучения 30 млн. спермиев в дозе при температуре 2-5?С), эквилибрации (5-6 часов при 2-5?С), замораживания в открытых гранулах объемом 0,2 мл (при-130?С) и оттаивания (при 38-40?С в водяном термостате). Установлено, что обработка нашим способом дала возможность повысить качественные показатели заморожено-розмороженной спермы, а именно, подвижность спермиев повысилась на 0,34-0,49 балла (11,6-13,3 %), выживаемость - на 1,54-1,66 часа (32,5-34,1%), абсолютный показатель выживаемости (АПВ) - на 4,34-4,75 условной единицы (34,1-39,6 %).Із багатьох спеціальних літературних джерел відомо, що при використанні цього розріджувача значна частина заморожено-розмороженої сперми має невисоку якість (Н.И. Дисертаційна робота виконувалась у відділі відтворення тварин Інституту розведення і генетики тварин Української академії аграрних наук за завданням “Розробити на основі осмотично-дифузійної теорії розріджувачі і способи кріоконсервації сперми бугаїв”, що входило до теми “Вдосконалити і впровадити системи застосування молекулярно-генетичних, біохімічних, фізіологічних і біотехнологічних методів в селекції сільськогосподарських тварин за 1996-2000 роки” (№ держреєстрації 0196U016325). Обєкт дослідження - сперма бугаїв-плідників, розбавлена і заморожено-розморожена, розріджувачі і їх компоненти, прийоми обробки сперми (спосіб розрідження, тривалість еквілібрації, температура заморожування і розморожування). Встановлено, що при використанні розробленого способу кріоконсервації рухливість заморожено-розмороженої сперми вища в порівнянні з контролем на 11,6-13,3%, виживаність - на 32,5-34,1%, а запліднююча здатність - на 16,3-20,3%. Для того, щоб отримати в дозі (0,2 мл) заморожено-розмороженої сперми 15 млн. рухливих сперміїв, треба розрідити сперму до отримання 30 млн. рухливих сперміїв; для того, щоб розбавити сперму основним розріджувачем в 2-3 рази (до отримання в дозі 30 млн. рухливих сперміїв), коректуючим розріджувачем її треба розбавити до отримання 60-90 млн. рухливих сперміїв.Розроблений новий, ефективний спосіб кріоконсервації сперми бугаїв у необлицьованих гранулах, який базується на застосуванні двох розріджувачів: основного ЛЦГЖ з процентним співвідношенням лактоза / цитрат натрію 90 / 10 і загальною осмоляльною концентрацією розчинених речовин 1372 мосм/л та коректуючого ЛЖ, ізотонічного стосовно сперми (323 мосм/л ). Маса розчинюваних компонентів розріджувачів на 100 мл води не є постійною, рецепти треба корегувати після одержання нових партій препаратів або при тривалому їх зберіганні. Визначені оптимальні технологічні режими розрідження сперми (коректуючим ЛЖ до отримання 60-90 млн. рухливих сперміїв в дозі при температурі 32-35?С, основним ЛЦГЖ до отримання 30 млн. рухливих сперміїв в дозі при температурі 2-5?С), еквілібрації (5-6 годин при 2-5?С), заморожування у відкритих гранулах обємом 0,2 мл (при-130?С) та відтаювання (при 38-40?С у водяному термостаті).