Роль и значение агониста каннабиноидных рецепторов, блокаторов активности ключевых ферментов биодеградации эндоканнабиноидов в адаптации нейрон-глиальных сетей к повреждающим факторам ишемии. Процесс культивирования диссоциированных клеток гиппокампа.
Аннотация к работе
Участие эндоканнабиноидной системы в адаптации нейрон-глиальных сетей к факторам ишемии in vitro
Е.В. МитрошинаАппликацию синтетического аналога эндоканнабиноида N-арахидоноилдофамина (NADA) (10 МКМ), необратимого ингибитора моноацилглицерол липазы JZL184 (1 МКМ) и ингибитора обоих ключевых ферментов биодеградации эндоканнабиноида JZL195 (1 МКМ) в культуральную среду выполняли при моделировании факторов ишемии и непосредственно после него. Установлено, что введение в культуральную среду агониста каннабиноидных рецепторов 1-го и 2-го типа NADA и блокатора ферментов MAGL и FAAH JZL195 оказывает нейропротекторное действие, проявляющееся в достоверном снижении количества мертвых клеток по сравнению с группами культур, подвергшихся действию факторов ишемии (гипоксии и глюкозной депривации). Кроме того, активация эндоканнабиноидной системы позволяет частично нивелировать индуцированные гипоксией и глюкозной депривацией in vitro изменения спонтанной кальциевой активности в культурах клеток гиппокампа, что выражается в поддержании числа клеток, проявляющих активность, а также в частичной нормализации длительности и частоты кальциевых осцилляций. ПРИМЕНЕНИЕN-арахидоноилдофамина (10 МКМ) и блокатора ферментов JZL195 оказывает нейропротекторный эффект при моделировании факторов ишемии, выражающийся в поддержании жизнеспособности и спонтанной кальциевой активности клеток первичных культур гиппокампа. Для выявления уровня неспецифического окрашивания и особенностей работы РНК-детекторных зондов использовались следующие контроли: отрицательный контроль (Scramble) (Merck, Германия) - РНК-зонд, «захватывающая нить» которого комплементарна нуклеотидным последовательностям, не встречающимся в клетках, для определения фонового уровня флюоресценции, вызванного неспецифическим высвобождением флюоресцентных нитей; положительный контроль (Uptake) (Merck, Германия) - РНК-зонд, который всегда флюоресцирует внутри клетки и позволяет оценить уровень захвата РНК-зондов клеткой; контроль на гены «домашнего хозяйства» (Housekeeping) (Merck, Германия) - является положительным контролем обнаружения МРНК и всегда активен в клетках (обнаруживает МРНК 18S субъединицы рибосомы).