Разработка метода культивирования лимбальных эпителиальных стволовых клеток для их пересадки на скаффолд из фибринового клея и последующей трансплантации. Иммуноцитохимическое фенотипирование клеточных культур, лечение лимбальной недостаточности.
Аннотация к работе
Трансплантат лимбальных эпителиальных стволовых клеток на биорезорбируемом носителеЦель исследования - разработать метод культивирования лимбальных эпителиальных стволовых клеток (ЛЭСК) с последующей их пересадкой на скаффолд на основе биорезорбируемого фибринового клея для аутотрансплантации на глаз реципиента с лимбальной недостаточностью. Применялись два метода культивирования ткани лимба: 1) с ее предварительной ферментативной и механической диссоциацией; 2) высаживание на пластик цельного биоптата лимба. Культивирование биоптата лимба без предварительной диссоциации клеток позволяет сохранить клеточный состав, пролиферативный потенциал и значительно увеличить скорость наращивания клеточной массы лимбальных стволовых клеток. Заболевания, ведущим фактором развития которых является недостаточность лимбальных эпителиальных стволовых клеток (ЛЭСК), характеризуются помутнением роговицы различной степени интенсивности, хроническим воспалением поверхности глазного яблока, неоваскуляризацией, образованием конъюнктивального паннуса, рецидивирующими эрозиями, что в итоге ведет к значительному снижению остроты зрения [1]. ЛЭСК по сравнению с другими соматическими стволовыми клетками имеют свои особенности: небольшие размеры самой клетки, высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение, отсутствие экспрессии маркеров дифференцировки.При культивировании диссоциированных клеток лимба и органотипической культуры лимбальной ткани наблюдалась различная динамика роста монослоя стволовых лимбальных клеток. При культивировании клеток лимба первым методом в 1-е сутки первичная культура была представлена клеточной суспензией (рис. Некоторые клетки начинали прикрепляться к пластику на 1-2-е сутки, на 5-е сутки культура диссоциированных клеток лимба состояла из фенотипически разнородных клеток, большинство из которых находилось в суспензии, лишь единичные клетки были прикреплены к дну чашки Петри (рис. На 2-е сутки культивирования ткань лимба прикреплялась к пластику и в нижней части биоптата; клетки, разнородные по фенотипическому составу, активно пролиферировали (рис. Стадия 90-100% конфлюэнтности наблюдалась через 7,5±0,5 сут.