Порівняльне дослідження дії іонізуючої радіації та пероксиду водню на структурний стан хроматину тимоцитів. Профарбовування клітин флуоресцентними барвниками. Аналіз параметрів термоденатурації хроматину та електрофоретичного визначення вмісту пістонів.
Аннотация к работе
Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наукРобота виконана на кафедрі біохімії біологічного факультету Київського національного університету імені Тараса Шевченка Науковий керівник: доктор біологічних наук, професор Матишевська Ольга Павлівна, Київський національний університет імені Тараса Шевченка, професор кафедри біохімії Палладіна НАН України, провідний науковий співробітник відділу науково-інформаційних та патентно-ліцензійних досліджень кандидат біологічних наук, старший науковий співробітник Сиволоб Андрій Володимирович, Київський національний університет імені Тараса Шевченка, доцент кафедри загальної та молекулярної генетики Захист дисертації відбудеться ”12” грудня 2005 р. о 1000 годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.001.24 Київського національного університету імені Тараса Шевченка за адресою: м. З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці університету Київського національного університету імені Тараса Шевченка за адресою: м.Зручним обєктом для дослідження структурних ушкоджень хроматину є тимоцити - неповністю диференційовані клітини, які характеризуються вищою, порівняно з іншими клітинами, нестабільністю генома та нижчою активністю систем репарації однониткових розривів ДНК. Морфологічний контроль стану тимоцитів in vitro дозволяє виявити клітини з фрагментованим хроматином та апоптичні тільця, тоді як за умов in vivo вони швидко поглинаються фагоцитуючими клітинами. У клітинах різних типів (В-та Т-лімфоцитах, клітинах мієлоїдного ряду) виявлено взаємозвязок між конденсацією та фрагментацією ДНК у ядрі та порушенням структурно-функціонального стану мітохондрій за дії різних фізіологічних та фармакологічних індукторів апоптозу (глюкокортикоїди, етопозид, церамід та ін) (Бра и др., 2005; Zamzami et al, 1995; Bernardi et al, 1999; Orrenius, 2004). дослідити вміст гістонів у хроматині, виділеному з тимоцитів, після дії радіації та Н2О2; Вперше проведено порівняльне дослідження структурного стану хроматину в ізольованих тимоцитах за дії іонізуючою радіації у дозі 4,5 Гр та 0,1 ММ пероксиду водню, встановлено відмінності у динаміці та характері його порушень.Методом прижиттєвого фарбування клітин специфічними до ДНК флуоресцентними барвниками Хехст 33342 та пропідію йодид встановлено, що упродовж 3-годинної інкубації тимоцитів після рентгенівського опромінення у дозі 4,5 Гр або додавання 0,1 ММ Н2О2 вміст клітин з морфологічними ознаками апоптозу підвищується (до 36,1% та 31,2% від загального вмісту клітин відповідно). У цей термін вміст низькомолекулярних фрагментів ДНК, екстрагованих з хроматину опромінених та оброблених Н2О2 тимоцитів, зростає у 4,2 та 3,1 рази порівняно з контролем відповідно. В опромінених тимоцитах спостерігається рання конденсація хроматину, яка супроводжується його фрагментацією та появою апоптичних тілець, тоді як серед підданих дії Н2О2 клітин переважають клітини зі зміщеним у ядрі конденсованим хроматином. За інкубації ядер опромінених тимоцитів відбувається зниження вмісту корового гістону Н2В та обох субфракцій гістону Н1, а за інкубації ядер підданих дії Н2О2 тимоцитів - зниження вмісту гістону лише у субфракції Н1b.