Условия накопления различных белков теплового шока hsp72, hsc73 и hsp96 при культивировании in vitro клеток глиобластомы человека А172 и фибросаркомы человека НТ1080. Обоснование, роль и значение участия в секреции липидных рафтов hsp72 и hsc73.
Аннотация к работе
Секреция белков теплового шока опухолевыми клетками человека in vitroБелки теплового шока (БТШ, hsp) длительное время считали исключительно внутриклеточными белками, однако, в последние годы накопились экспериментальные данные, свидетельствующие о выходе БТШ из клеток [1, 2] и участии экстраклеточных БТШ в процессах формирования врожденного и приобретенного иммунитета, в том числе и противоопухолевого [3, 4]. Выход БТШ связывают не только с повреждением (гибелью) клеток, но и показана секреция БТШ жизнеспособными клетками. Неклассическая (ЭПР / Гольджи-независимая) секреция белков может осуществляться различными механизмами: с помощью везикулярных транспортных систем клетки (экзосомы, лизосомы), с участием трансмембранных белков-переносчиков, «блеббингом» плазматической мембраны и др. При проведении ингибиторного анализа к сформировавшемуся монослою клеток, непосредственно в ростовую среду, добавляли ингибиторы белкового синтеза и секреции на 30-120 мин, после чего клетки отмывали быссывороточной средой и инкубировали в этой же среде в течение 1 ч. Чтобы ответить на вопрос, являлось ли накопление БТШ в культуральной среде результатом секреции белков клетками или же выход БТШ обусловлен клеточной гибелью, мы использовали различные экспериментальные подходы, позволяющие оценить уровень жизнеспособности клеток.