Визначення штаму вірусу ринопневмонії коней, найбільш придатного для використання в діагностичному наборі в якості специфічного антигену. Напрямки проведення серологічного моніторингу ринопневмонії коней у конегосподарствах різних регіонів України.
Аннотация к работе
Національний університет біоресурсів і природокористування УкраїниРобота виконана в Інституті ветеринарної медицини Національної академії аграрних наук України Науковий керівник - доктор ветеринарних наук, старший науковий співробітник СИНИЦИН Віталій Анатолійович, Інститут ветеринарної медицини Національної академії аграрних наук України, завідувач лабораторії загальної вірусології Офіційні опоненти: доктор ветеринарних наук, доцент Мазур Тетяна Василівна, Національний університет біоресурсів і природокористування України, професор кафедри епізоотології та організації ветеринарної справи кандидат ветеринарних наук Ситюк Микола Петрович, Інститут ветеринарної медицини Національної академії аграрних наук України, старший науковий співробітник лабораторії епізоотології Захист дисертації відбудеться “_19_” _травня__ 2010 р. о _1300_ годині на засіданні спеціалізованої вченої ради Д 26.004.03 у Національному університеті біоресурсів і природокористування України за адресою: 03041, м.Ринопневмонія коней (вірусний аборт кобил або герпесвірусна інфекція) - вірусна хвороба, яка характеризується катаральним запаленням слизової оболонки верхніх дихальних шляхів і кон?юнктиви у коней, а також абортами кобил у другій половині жеребності (Галатюк О.Є., 2005). В Україні не розроблено жодної тест-системи (діагностичного набору) для виявлення антигенів і специфічних антитіл до вірусу РПК, які б могли застосовуватися у мережі діагностичних ветеринарних лабораторій України. Дисертаційна робота є складовою частиною комплексних досліджень згідно з завданнями державних тематик науково-дослідних робіт Інституту ветеринарної медицини УААН: “Розробити та впровадити методи та засоби діагностики і профілактики респіраторних захворювань коней” (номер державної реєстрації - 0101U000816) на 2001-2005 роки та “Вивчити закономірності перебігу респіраторних хвороб коней та розробити науково-теоретичні підходи для їх діагностики на основі сучасних біотехнологічних методів” (номер державної реєстрації - 0106U000498) на 2006-2010 роки. Розробити набір діагностиків для виявлення антитіл до вірусу ринопневмонії коней у реакції нейтралізації: - визначити захисне середовище для вірусу ринопневмонії коней; Вірусологічні (культивування вірусу РПК, штамів Юл, EQ Herpes 040 EDV 9601, EHV (W), у клітинних культурах ВНК 21, Vero та СНЕВ), мікробіологічні (визначення стерильності компонентів набору діагностиків), серологічні (проведення РН, РДП та ІФА при дослідженні сироваток крові тварин), імунологічні (отримання гіперімунної сироватки на кролях, щурах), молекулярно-біологічні (проведення ПЛР), електронна мікроскопія та статистичні (використання програми MS Excel для обробки цифрових даних). ринопневмонія кінь вірус штамТест мікронейтралізації вірусу проводили у полістиролових плашках з пласким дном зі штамами Юл, EHV (W), EQ Herpes 040 EDV 9601 вірусу РПК. Вірус РПК штамів Юл, EHV (W), EQ Herpes 040 EDV 9601 культивували у моношарі клітин в однакових умовах до появи специфічних дегенеративних змін у клітинах. Для адаптації штамів вірусу РПК до різних культур клітин було проведено 5 пасажів кожного із штамів на кожній лінії культур клітин. Після адаптації штамів Юл, EHV(W), EQ Herpes 040 EDV 9601 вірусу РПК до культур клітин СНЕВ, Vero та ВНК-21найбільш чутливою до вірусу РПК виявилась культура клітин Vero, у якій ЦПД вірусу РПК проявлялася вже через 60 годин після зараження. Але, враховуючи те, що вірус РПК штаму EHV (W) мав вищі титри інфекційної активності у культурі клітин Vero, для виготовлення набору діагностиків доцільно використати саме штам EHV (W).Вперше в Україні розроблено та затверджено вітчизняний набір для діагностики даної інфекційної хвороби у реакції нейтралізації. Впровадження набору для індикації антитіл до вірусу ринопневмонії коней в реакції нейтралізації у сироватках крові дає можливість постановки діагнозу на дане захворювання та проведення широких скринінгових досліджень в конярських господарствах України. Визначено чутливість перещеплюваних культур клітин ВНК 21, Vero та СНЕВ до штамів вірусу ринопневмонії коней EQ Herpes 040 EDV 9601, EHV (W) та Юл. Для отримання якісних антигенів підібрано чутливу клітинну культуру (Vero), визначено штам вірусу РПК для використання в наборі діагностиків (EHV (W)) та умови культивування, які забезпечують активність вірусу у титрі не нижче 7,0 lg ТЦД50/см3, причому відмічається поступове зростання інфекційного титру вірусу в процесі проведення пасажів. При дослідженнях у реакції нейтралізації мікрометодом встановлено антигенну спорідненість штамів EQ Herpes 040 EDV 9601, EHV (W) та Юл вірусу РПК, репродукованих у культурі клітин Vero.