Методики кількісного аналізу заліза у складі трансферину та лабільного пулу заліза в біологічних зразках методом низькотемпературної ЕСР–спектроскопії. Особливості метаболізму негемового заліза в групах здорових дорослих та здорових новонароджених.
Аннотация к работе
Київський національний університет імені Тараса ШевченкаДисертацію присвячено вдосконаленню оригінальних методик кількісного аналізу заліза у складі трансферину та лабільного пулу заліза в біологічних зразках методом низькотемпературної ЕСР - спектроскопії, а також вивченню особливостей метаболізму негемового заліза в групах здорових дорослих та здорових новонароджених, та при порушеннях статусу заліза в організмі (пацієнтів, хворих на гліальні пухлини мозку, пацієнтів з гемохроматозом, визваним надмірним надходженням заліза в організм в умовах виробництва) з використанням вдосконалених методик. Впервые определены показатели обмена негемового железа, а именно, концентрация железа в составе ферритина, концентрация железа в составе трансферрина, концентрация белка трансферрина, степень насыщения белка трансферрина железом в цельной крови и плазме крови, а также концентрация железа, способного хелатироватся десферриоксамином В в плазме крови для групп сравнения (здоровые взрослые и новоржденные). Показано, что определение железа трансферрина и насыщения трансферрина в цельной крови при высокой степени насыщения трансферрина железом, является более информативным для оценки перегрузки организма железом, в связи с потерей высоконасыщенного трансферрина при получении плазмы крови и сыворотки крови из цельной крови. Отметим, что показатель степень насыщения трансферрина железом считают наиболее информативным критерием для фенотипического скрининга пациентов с перегрузкой железом (степень насыщения плазмы крови железом более 45%). Поэтому, для адекватной диагностики именно при высоких степенях насыщения трансферрина железом, важной является возможность определения концентрации железа трансферрина и степени насыщения трансферрина железом в цельной крови.Для того, щоб задовольнити свої потреби, живим організмам потрібні сполуки, які спроможні хелатувати залізо і, таким чином, переводити залізо в доступну для використання розчинну форму. Для транспортування та депонування заліза, в організмі тварин синтезуються білки, здатні депонувати та транспортувати залізо - феритин/гемосидерин та білок, що транспортує залізо - трансферин. Сидерофори, навантажені залізом, або входять в клітину в результаті звязування з мембранними рецепторами трансферину та феритину, або віддають своє залізо асоційованим з мембраною білкам-переносникам заліза (DMT1 та ін.). Надлишок заліза в організмі в цілому може призводити до розвитку хвороби перевантаження залізом - гемохроматозу. Наявність характерних та специфічних спектрів ЕСР заліза у складі трансферину та заліза у складі хелатуючого агенту десфериоксаміну В дають можливість визначати концентрацію заліза у складі трансферину та концентрацію заліза у складі лабільного пулу, здатного до хелатування.В цьому розділі наведені результати роботи по вдосконаленню методик кількісного визначення негемового заліза, включаючи концентрацію заліза у складі трансферину, концентрацію білку трансферину, ступінь насичення трансферину залізом, концентрацію заліза, здатного до хелатування (лабільний пул заліза) в біологічних мікрозразках методом спектроскопії ЕСР. В цьому розділі наведені матеріали та реактиви, що були використані в роботі, способи приготування калібрувальних зразків комплексів залізо (ІІІ) - трансферин та залізо (ІІІ) - десферіоксамін В, які були використані для побудови калібрувальних залежностей, а також способи підготовки біологічних зразків для визначення вмісту білку трансферину, ступеню насичення трансферину залізом, та концентрації заліза, здатного до хелатування в біологічних зразках. Далі наведені власне методики, які використовувалися для кількісного визначення заліза у складі феритину, трансферину, концентрації білку трансферину та ступеню насичення трансферину залізом, а також концетрації заліза, здатного до хелатування з використанням методу низькотемпературної спектроскопії ЕСР. Принциповою і досі невикористаною є можливість визначати методом кількісної спектроскопії ЕСР такі параметри як концентрація заліза у складі трансферину, концентрація білку трансферину і ступінь насичення трансферину залізом у мікрозразках цільної крові, яка була втілена в цій роботі. В групі здорових дорослих (n = 17), яка складалася з 8 чоловіків та 9 жінок віком 39,5±14,3 років були досліджені параметри обміну негемового заліза, а саме концентрація гемоглобіну та рівень гематокриту, концентрація заліза трансферину в крові, плазмі та клітинах крові, концентрація білку трансферину , визначена в цільній крові, ступінь насичення трансферину , визначений в цільній крові, концентрація заліза у складі феритину в крові та плазмі крові, концентрація заліза, здатного до хелатування з десферіоксаміном В , визначений в цільній крові, з використанням розроблених методик.