Електрофоретичне розділення нуклеїнових кислот в агарозних гелях. Основні параметри, від яких залежить швидкість міграції нуклеїнових кислот в агарозному гелі. Прилади та буферні розчини для проведення горизонтального електрофорезу, забарвлення ДНК.
Аннотация к работе
Електрофоретичне розділення в агарозному гелі - стандартний метод, який використовується для розділення, ідентифікації та очистки ДНК та РНК. Під час електрофоретичного розділення в гелі можна безпосередньо моніторити положення зразків ДНК чи РНК - оскільки полоси нуклеїнових кислот в гелі можна візуалізувати за допомогою флюоресціюючого та інтеркалюючого барвника етидію бромистого. При електрофоретичному розділенні швидкість міграції нуклеїнових кислот в агарозному гелі залежить від 5 головних параметрів: розмірів молекул нуклеїнових кислот; концентрації агарози; конформації нуклеїнових кислот; показника напруги електричного поля; вмісту азотистих основ і температури. Швидкість руху лінійних молекул нуклеїнових кислот в агарозному гелі обернено пропорційна десятковому логарифму їх молекулярних мас. Перш за все, показники відносної рухомості трьох форм ДНК залежать від концентрації агарози в гелі, а також, від таких факторів, як сила струму, іонна сила буферного розчину та кількість суперспіральних витків у молекулах ДНК (зокрема, для форми І).
Список литературы
1. Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование.//Москва ,,Мир”. - 1984. - ст. 157-167.
2. Інтернет-ресурс www.molbiol.ru.
3. Каталог фірми ,,Fermentas” (life sciences; molecular biology) за 2010-2011 рр.