Проведение гематологического обследования рыб - Методичка

В рыбоводстве при гематологическом исследовании принято определять следующие показатели крови: - количество гемоглобина, - величину гематокритного числа, - содержание общего белка в сыворотке крови, - число эритроцитов, - содержание гемоглобина в одном эритроците, - средний объем эритроцитов, - скорость оседания эритроцитов, - число лейкоцитов, - лейкоцитарную формулу, - количество метгемоглобина. Материал для исследования, ход работы Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5-10 минут после отлова. Во избежание разрушения эритроцитов (гемолиза) кровь берут в подготовленные пробирки (или часовое стекло), сливая осторожно по стенке. один конец стекла размером в 1-1,5 см шлифуют на наждаке для надписи простым карандашом, - стекла кипятят в 1 %-ном растворе двууглекислой соды - 10 мин, - охлаждают и промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой - 5 мин., - стекла помещают в слегка подкисленный соляной кислотой раствор дистиллированной воды на 2-3 мин; затем дважды промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе или в сушильном шкафу и хранят в смеси спирта с эфиром 1:1. В капиллярную пипетку от гемометра Сали набирают кровь до метки 20 мкл и выдувают ее в раствор соляной кислоты.

Содержание оксигемоглобина в исходной пробе крови соответствует содержанию гемоглобина в ней.

Поскольку в параллельной пробе крови (пробирка № 2) весь гемоглобин полностью переводится в метгемоглобин добавлением насыщенного раствора феррицианида калия, величина светопоглощеиил раствора метгемоглобина практически постоянная и зависит от исходного уровня гемоглобина, то есть оксигемоглобина.

Определение светопоглощенил растворов крови в обеих пробирках проводят на фотоэлекгроколориметре (ФЭКЕ) при красном светофильтре.

У ФЭКОВ различных марок длина волны, соответствующая максимуму пропускания при красном светофильтре, бывает различной. Так, у ФЭКА - 56 при работе с красным светофильтром № 8 длина волны составляет 597 нм, у спектрофотометров ФЭК-56 ПМ и ФЭК КФК-2 длины волн при работе с красным светофильтром лежат в интервале 600 -670 нм, Определение светопоглощения растворов крови проводят с использованием ФЭКОВ различных марок при красном светофильтре в вышеприведенном интервале длины волн, используя для сравнения 0,25 %-ный раствор аммиака в кюветах с рабочей длиной 10 мм.

Различия, связанные с измерением экстинций растворов крови при различающихся длинах волн при работе на ФЭКАХ различных марок, корригируют путем введения в расчетную формулу коэффициента - величины приведенной экстинции раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕНВО2), как показано в разделе - расчет результатов анализа. При расчете этой приведенной величины используют измеренные опытным путем величины светопоглощения раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕНВО2)

- пробирка № 1; метгемоглобина (emthb) - пробирка № 2.

Предварительно опытным путем на молоди карповых рыб установлена средняя величина светопоглощения раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕНВО2) и средняя величина светопоглощения раствора крови с полученным уровнем метгемогдобина (ЕМTHВ).

Таким образом, найдено, что среднее значение плотности раствора крови с исходным уровнем оксигемоглобина (ЕНВО2) составляет 0,15, а метгемоглобина (emthb) - 0,77.

Поскольку гемоглобин в пробе крови рыб полностью переводится в метгемоглобин добавлением насыщенного раствора феррицианида калия, изменение светопоглощения, равное 0,62 (0,77-0,15) соответствует 100 % содержания метгемоглобина.

Все эти данные были необходимы для выведения коэффициентов при расчете содержания метгемоглобина в крови рыб по данной методике.

По методике проводят определение светопоглощения растворов исследуемой крови рыб с исходным уровнем оксигемоглобина (пробирка № 1) и полученным уровнем метгемоглобина (пробирка № 2) и рассчитывают содержание метгемоглобина в крови по нижеприведенной формуле, используя установленный коэффициент и расчетное приведенное значение светопоглощения раствора оксигемоглобина с учетом коррекции измерения этой величины при красном светофильтре с различающимися длинами волн, Х=(e2-e1) x 1,61 x 100, где: Х - содержание метгемоглобина в исследуемой пробе крови, %; е2 - приведенное значение светопоглощения"раствора оксигемоглобина (ЕHВО2), расчет его приводится ниже е1 - среднее значение величины светопоглощения раствора оксигемоглобина, равное 0,15; 1,61 - расчетный коэффициенг, найденный из средних величин светопоглощения растворов оксигемоглобина и метгемоглобина, расчет его также приводится далее. Значение Е; - приведенное значение светопоглощения раствора оксигемоглобина

(ehbo2) находят из пропорции с использованием измеренных величин светопоглощения раствора оксигемоглобина (пробирка №1) и метгемоглобина (пробирка № 2) в опыте. e2 e4 e3xe4 - = - откуда Е2=---- , где: e3 e5 e5

Е2 - искомая величина - приведенное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина - (ЕНВО2); Е3 - среднее (для рыб) значение оптической плотности раствора метгемоглобина, равное 0,77; Е4 - измеренное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина (пробирка № 1); e5 - измеренное значение оптической плотности раствора метгемоглобина (пробирка № 2).Полученное значение Е2 подставляют в формулу для расчета содержания метгемоглобина в крови рыб.

Если приведенное значение оптической плотности раствора оксигемоглобина (Е2) будет равно или меньше средней величины оптической плотности раствора оксигемоглобина (е1 = 0,15) (что объясняется индивидуальными колебаниями содержания гемоглобина в крови рыб), то содержание метгемоглобина будет равно или меньше 1,61 %.

Гематологические показатели рыб (физиологическая норма)

Вид работы 1. Карп

Возраст 2. Сеголеток (пруды, экстенсивная технология) Сеголеток (пруды, экстенсивная технология) Сеголеток (садки) Сеголеток (бассейн)

Гемоглобин, Г/л 3 85,1± 2,3 78,1±4,5 89,0 ± 2,4 75,4 ± 4,3

Гематокрит, л/лх10"2 4 39,9 ± 1,1 36,2 ± 0,2 35,4 ± 0,3 34,1 ± 1,0

Эритроциты, млн/мкл 5 1,5 ± 0,004 1,35 ± 0,4 1^09 ±0,4 1,3± 0,2

Ср, объем Эритроцитов, мкм3 6 268,7 ± 10,6 342,5± 2,8 24,7 ±2,7 349,6 ± 7,3

Содержание гемоглобина r эритроцитах . пг 7 56,7 ± 2,7 46,3 ± 1,9 81,6 ± 2,3 58,0± 4,0

Лейкоциты, тыс./мкл 8 24,5 ± 4,3 37,5 ± 5,2 41,0 ± 4,5 39,4± 4,3

Тромбоциты, тыс./мкл 9 НД" 28,02 ± 3,0 НД НД

Бласты, % 10 0,6 ± 0,4 0" 0,3 ± 0,1 1,1 ±0,2

Про миелоциты, % 11 0,1 ± 0,1 0 0,1 ± 0,01 0,6 ± 0,2

Миелоциты нейтрофильные,% 12 0,5 ± 0,2 3,2 ± 1,1 0,5± 0,1 0,3 ± 0,1

Метами елоцитьт нсйтр., % 13 0,4 ± 0,2 3,1 ± 1,0 0,7 ± 0,2 0,7 ± 0,2

11алочкоядерные нейтрофилы, % 14 0,4 ± 0,2 5,2± 1,4 1,0±0,3 0,8 ± 0,2

Сегментоядерные Нейтрофилы, % 15 0,3 ± 0,1 4,0± 0,7 1,0 ± 0,5 1,0± О.З

Общее число нейтрофилов, % 16 1,6 ± 0,2 15,5 ± 1,6 3,2 ± 1,0 2,8 ± 0,7

Эозинофилы и псевдоэодинофилы” % 17 3,7± 1,2 4,0 ± 0,09 0 0

Базофилы и псев-добазофшш, % 18 3,6 ± 0,8 3,5± 1,4 0 1,0±0.5

11енистые клетки, % 19 0,7 ± 0,3 4,0 ± 0,7 1,9± 0,4 1,6±0,4

Моноциты, % 20 4,2 ± 0,5 8,8 ± 1,5 3,0 ± 0,5 2,7 ± 0,7

Лимфоциты, % 21 85,6 ± 1,6 64,2 ± 4,9 91,5± 0,9 90,2 ± 1,4

Содержание общего белка в сыворотке крови,г % 22 2,5-3,0 2,5-3,0 НД нд

1 Пестрый толстолобик Белый толстолобик

2 Сеголеток (установка с замкнутым водообменом) Сеголетки (лето) Сеголетки (зима) Годовики Двухлетки Сеголетки (лето)

3 59,5 ± 3,4 74,9± 2,2 96,9 ± 2,8 65,8 ± 3,8 85,8± 2,4 80,9± 1,4

4 30,6± 1,6 37,8 ± 0,7 40,7 ± 2,9 28,6 ± 1,3 40,2 ± 1,7 51,4± 1,3

5 1,0± 0,04 1,9±0,05 1,8± 0,07 1,5± 0,2 1,7 ± 0,08 1,9 ± 0,04

6 303,3 ± 0,9 204,4 ± 12,9 247,08 ± 28,5 195,6 ± 8,4 243,1 ± 14,3 266,4 ± 6,2

7 59,6± 1,6 40,67 ± 3,4 55,2± 3,9 44,98 ± 1,5 51,38± 3,2 41,6± 0,9

8 52,7± 0,2 26,2 ± 4,6 10,6 ± 1,8 34,6 ± 2,7 39,8 ± 3,7 56,8 ± 4,0

9 НД 29,95 ± 3,6 11,5 ± 1,95 21,l± 2,5 34,3 ± 1,4 63,6± 8,1

10 1,2 ± 0,3 0 0,1 0 0 1,2± 0,3

11 0,9± 0,3 0,6 ± 0,1 0,7 ± 0,2 0,1 0 1,1± 0,2

12 0,64 ± 0,1 0,4 ± 0,1 2,5 ± 0,2 1,3±0,3 0 0,9 ± 0,2

13 0,31 ±0,1 1,3± 0,3 22,9 ± 2,7 18,4 ± 2,6 2,9 ± 0,4 0,7 ± 0,2

14 0,72 ± 0,2 0,2± 0,1 7,7 ± 1,0 8,8 ± 1,1 0,5 ± 0,1 0,8± 0,3

15 0,39± 0,1 0 2,7 ± 0,6 2,1 ±0,5 0 0

16 2,0 ± 0,3 2,5± 0,3 35,8 ± 2,7 30,6 ± 2,6 3,5 ± 0,4 2,4 ± 0,3

17 0 9,7 ± 1,1 1,5 ± 0,3 0,1 ±0,3 6,9 ± 0,6 4,2 ± 0,6

18 1,6± 0,4 0,4± 0,1 0 0 0 0,1

19 1,2±0,3 0 0 0,1 0,5 ± 0,1 0,2

20 2,5 ± 0,4 0,2± 0,1 1,3±0,2 0,4 ± 0,1 0 0,9 ± 0,2

21 90,6± 0,9 Я7,1± 1,4 60,6 ± 3,3 68,5± 4,1 88,9± 0,7 90,1±0,8

22 Нд НД 1,7-3,0 НД 4,41 0,2 НД

1 Белый толстолобик Большеротый буфалло

2 Сеголетки (зима) Годовики Двухлетки Сеголетки (лето) Сеголетки (зима) Годовики Двухлетки

3 105,9 ± 2,3 82,1 ±8,0 93,3± 3,1 77,0 ± 2,2 81,5 ±3,1 90,4 ± 3,3 86,5 ± 2,0

4 56.2 ± 1,46 47,2 ± 1,8 45,13± 0,7 32,36± 2,0 40,4 ± 1,7 36,2 ± 1,6 41,6 ± 0,95

5 2,6 ± 0,07 2,37 ± 0,1 2,09± 0,1 1,15±0,05 1,09 ± 0,03 1,2±0,08 1,23 ± 0,07

6 216,1 ± 5,4 199,2 ± 8,1 219,0± 12,1 280,6 ± 13,1 75,79 ± 19, 304,9 ± 16,1 338,6 ± 18,8

7 40,8± 1,1 34,8± 1,6 44,63 ± 1,3 66,95 ± 1,8 75,6 ± 3,1 80,9± 3,9 70,3 ± 3,5

8 14,8 ± 1,8 52,9 ± 6,9 48,1 ±2,9 6,8 ± 1,4 6,3± 0,9 25,9 ± 1,9 19,97 ± 1,8

9 24,27± 4.3 54,09 ± 6,0 55,9± 3,5 3,9 ± 0,8 7.3 ± 1,7 5,95 ± 1,2 17,64± 1,7

10 0 0 0,1 1,5 ± 0,6 0,1 0 0

11 0,2 0,2 0,2 ± 0,1 3,0± 1,4 0,7 ± 0,2 0,2 ± 0,1 0,5± 0,2

12 1,5 ± 0,2 0,9± 0,1 0,6 ± 0,1 1,1± 0,4 1,3 ± 0,3 0,2 ± 0,1 0,5 ± 0,2

13 5,9 ± 1,0 12,2 ± 1,4 3,2± 0,4 1,6± 1,1 1.4±0,3 0,9 ± 0,2 1,6± 0,3

14 2,6 ± 0.7 3,4 ± 0,6 0,9 ± 0,4 1,1 ±0,8 0,7 ± 0,4 2,1 ±0,4 2,8± 0,4

15 0,5 ± 0,1 0,2± 0,01 0,2 ± 0,01 0,1 ± 0,1 2,0 ± 0.4 1,6 ± 0,4 0,7 ± 0,1

16 10,5 ± 1,0 16,7± 1,4 4,9 ± 0,4 3,9 ± 1,1 5,4± 0,4 4,8 ± 0,4 5,6 ± 0,4

17 0,3± 0,1 0,1 3,1 ±0,5 6,6 ± 1,7 1,8± 0,4 1,3± 0,2 2,1± 0,3

18 0 0 0,1 0 0,1 0 0

19 О 0,1 0,2 ± 0,1 6,3 ± 1,6 1,2± 0,3 2,0 ± 0,3 3,6 ± 0.7

20 0,3± 0,1 0,1 0,3 ± 0,1 3,1 ±0,6 3,3 ± 0,2 0,5 ± 0,1 0,2

21 88,7 ± 2,0 82,9± 2,1 91,0± 0,8 75,5 ± 3,5 87,6 ± 1,5 91,2± 1,1 87,9 ± 1,1

22 1,7-3,0 НД 4,4 ± 0,2 НД НД НД НД

1 Бестер Белуга Стерлядь Радужная форель

2 Сеголетки Сеголетки Сеголетки Мальки Сеголетки Годовики Двухлетки

3 54,9± 2,1 40,9 ± 1,5 48,3 ± 2,3 67,0 ± 3,6 72,0 ± 1,0 97,9 ± 0,6 87,0 ± 0,8

4 НД НД НД 32 ± 4,0 35,0 ± 1,0 49,0 ± 2,0 33,0 ± 3,0

5 0,754 ± 0,05 0.524± 0,03 0,595 ± 0,12 1.08 ± 0,4 1,15 ± 0,08 1,21±0,1 1,23 ± 0,04

6 НД НД НД 296,3±4,0 304,3 ± 1,0 404,9 ± 2,0 268,3 ± 3,0

7 72,8 4± 5,2 56,5± 3,0 81,8±2,3 62,0±3,6 62,6 ± 1,0 80,9 ± 0,6 70,7 ± 0,8

8 4s.6 ± 5,7 40,8 ± 5,3 45,9 ±11.8 17,0 ± 3,5 58,7±6,4 58,9± 5,3 39,0± 1,4

9 НД НД НД" НД НД НД НД

10 НД НД нд нд НД НД НД

11 НД НД НД НД НД НД НД

12 2,1 ±0,3 4,2 ± 0,4 1,9 ± 0.5 0 0,7 ± 0,2 0,2 ± 0,02 0,3±0,1

13 1,8 ± 0,3 4,5 ± 0,4 2,1±0,3 0,5 ± 0,1 0 0,3±0,1 0,3 ± 0,1

14 9,5 ± 0,8 15,3±1,4 2,6± 0,5 1,0±0,2 1,0±0,1 2,0 ± 0,15 1,9±0,2

15 9,8 ± 1,0 14,7± 1,7 2,2 ± 0,9 1,1±0,3 3,1±0,3 2,5 ±0,1 2,8 ± 0,2

16 23,2 ± 2.1 38,7± 3,4 7,8 ± 1,7 2,6 0,1 4,8 ± 0,3 5,0± 0,5 5,3±0,2

17 11,2± 1,1 26,6 ± 2,4 2,6 ± 0,7 *** - -

18 0 0 0 - - - -

19 0 0 0 - - -

20 1,4±0,3 0,7 ± 0,2 1,9± 0,5 6,4 ± 0,6 5,0± 0,3 4,9 ± 0,8 2,1 ±0.1

21 64,2± 5,1 34,0± 4,1 87,7± 2,3 91,0 3,2 90,2 ± 2,3 90,1 ± 1,8 92,6± 0,9

22 1,4±0,07 1,3± 0,05 1.8±0,1 5,4 6,2 3,8 5,1

1 Каспийский лосось Кета Сима Кижуч

2 Ранняя молодежь Сеголетки Годовики Двухлетки Смолт Смолт Смолт

3 37,0 ± 1,5 70,0 ± 2,0 80 0± 3,0 60,0 ± 4,0 НД 97,0± 3,0 109,2± 0,3

4 НД НД 39,5 ± 3.5 65,3± 3,6 НД НД НД

5 0,5± o.o8 0,56 ± 0,06 0.65± 0,05 0,59 ± 0,03 1,2±0,07 1,2±0,08 1,13±0,04

6 НД НД НД НД НД НД НД

7 74,0 ± 1,5 25,0± 14 23,01± 13 01,7 ± 10, НД 81,0±4,2 96,6 ± 0,6

8 25,0 ± 4,5 27,0± 4,8 33,0± 6,0 34,0±6,0 2,7± 0,4 3,5± 0,7 9,6± 1,6

9 НД НД НД НД 6,0 ±0,1 6,0 ± 0,4 10.2± 1,4

10 1,0± 0,6 2,9 ± 0,3 0 3,6 ± 0,8 0(1,0-1,8)* 1,4±0,7 0

11 1,0±0,4 0,1 ± 0,01 0 1,0±0,3 НД ЧД НД

12 1,0±0,2 0 0,2 ± 0,3 0,08 ± 0,03 НД НД НД

13 0,5 ± 0.3 0,4 ± 0,2 0,3 ± 0,1 0 НД "Д НД

14 0,4 ±0,1 1,4 ± 0,4 1,0 ± 0,2 0,3 0,1 НД НД НД

15 2,2±0,3 0,7 ± 0,2 1,0 ± 0,5 4,3±0,4 ПД НД НД

16 4,1 ± 1,3 2,5 ± 0,2 2,5 ± 0,3 4,7 ± 0,3 10,1±0,3 23,7 ± 2,5 4,3± 0.6

17 - - - - 0 21,1±2,8 0

18 - - - - - Единично -

19 - - - - - - -

20 2,0 ± 0,3 1,6±0,2 0,4 ±0,01 1,7±0,l 0(2,1-3,0) 0,5±0,3 0(0,4-0,5)

21 91,9±2,1 92,9 ± 1,6 97,1±2,0 89,0 ± 1,7 86,9± 0,5 53,0± 2,5 96,0 ± 3,0

22 нд 11,01±0,5 НД 5,2 ± 0,4 НД НД нд

*Нет данных

**Клеточные формы у данного вида рыб существуют (могут быть при определенных обстоятельствах)

***Клеточных форм у данного вида в норме не обнаружено