Получение белкового комплекса протеина sp-2 из шрота сои, его физические и химические характеристики. Анализ антитрипсиновой активности, чувствительности различных штаммов раковых опухолей к протеину sp-2 на животных опухоленосителях в экспериментах.
Аннотация к работе
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наукВ настоящее время в мире проводится большое количество исследований по изучению влияния сои и ее компонентов на течение канцерогенеза [Крутяков В.М., 2001, Немцова Е.Р. и др., 2002]. Проводимые исследования показывают, что компоненты сои способны ингибировать пролиферацию опухолевых клеток, индуцировать апоптоз в трансформированных клетках, и действуют они на опухолевые клетки, и токсические эффекты в отношении нормальных тканей организма минимальны [Залеток С.П. и др., 2006, Казачкина Н.И. и др., 2006]. В связи с этим представляется актуальным выделение белковых компонентов из вторичного сырья - шрота сои и исследование их противоопухолевой активности. Эпидемиологические исследования доказывают, что в восточных регионах, где люди традиционно употребляют в пищу сою, реже встречаются опухоли различных локализаций: толстой кишки, легких, матки, молочной железы, предстательной железы и т.д. Работа является частью исследований выполненных в рамках проекта УНТЦ №3501 «Исследование соевого белка в лечении злокачественных новообразований клетки организма», проводимых в Институте биоорганической химии АН РУЗ (2006-2009 гг.).Определение активности фракций по включению 14С-тимидина, показало, что при использовании этих методов выделения белков из шрота сои вещество является активным. Определение активности фракций по включению 14С-тимидина, показало, что наибольшим подавлением пролиферации клеток КМЛ 58,5±1,4% в дозе 100 мкг/мл обладала первая фракция после гельфильтрации на колонке с сефадексом G-75. I группа - животные получали протеин sp-2 per os 10 дней каждый день однократно в дозе 150 мг/кг; II группа - животные получали протеин sp-2 per os 10 дней каждый день однократно в дозе 125 мг/кг; III группа - животные получали протеин sp-2 подкожно в виде инъекций 5 раз каждые 48 часов в дозе 12,5 мг/кг; IV группа - контроль, животным вводили каждый день per os и подкожно растворитель - физиологический раствор NACL. Следует отметить, что действие протеина sp-2 при введении per os в дозе 150 мг/кг (I группа) и при подкожном введении (III группа) практически одинаковы, при введении в дозе 125 мг/кг (II группа) подавление раковой опухоли незначительно снижено. По полученным результатам наблюдается коррелирование значений объема опухоли со значениями ее массы в опытных группах (на штамме АКАТОЛ: I группа r= 0,999, II группа r=0,973, III группа r=0,614; на штамме меланома В-16: I группа r= 0,789, II группа r=0,938, III группа r=0,566).Впервые из шрота сои выделен протеин sp-2 состоящий из комплекса белков с молекулярной массой основного компонента 30 КДА. В цитотоксическом тесте радиометрическим методом на пролиферацию клеток меланомы мышей КМЛ протеин sp-2 в дозе 100 мкг/мл вызывает подавление включение метки 14С - тимидина на 64,0±1,9%. Протеин sp-2 тормозит рост раковой ткани на перевиваемых опухолевых штаммах АКАТОЛ и меланома В-16 более чем на 60%, увеличение продолжительности жизни экспериментальных животных более 30%, протеин sp-2 не ингибирует пролиферацию клеток красного костного мозга. Протеин sp-2 в дозе 100 мкг/млн клеток в условиях in vitro обладает противоопухолевой активностью в отношении клеток рака молочной железы, находящихся на 2 и 3 стадиях заболевания, вызывая гибель более 60% раковых клеток, индуцируя апоптоз более 10% раковых клеток.