Методы трансгенеза в животноводстве. Использование половых клеток семенников. Факторы повышения экспрессии трансгенов в организме животных. Особенности пересадки ядер клеток, культивируемых in vitro. Перспективы генно-инженерных работ в животноводстве.
Аннотация к работе
В настоящее время используются несколько подходов в получении трансгенных животных. Наиболее широко распространен метод микроинъекций чужеродной ДНК (чДНК) в пронуклеусы зигот. МЕТОДЫ ТРАНСГЕНЕЗА В ЖИВОТНОВОДСТВЕ Трансгенные животные - это индивидуумы, в геном которых искусственно введена дополнительная генетическая информация (трансген). Под трансгенезом понимают процесс переноса и интеграции чужеродной генетической информации в геном животных. 1.1 Метод микроинъекции Впервые о получении трансгенных сельскохозяйственных животных сообщили две лаборатории в США и Германии [Hammer et al, 1985; Brem et al., 1985]. В обоих случаях для переноса генных конструкций в эмбриональные линии был использован метод микроинъекции. Для смещения этих гранул к краям эмбриона и облегчения тем самым локализации пронуклеусов выполняют центрифугирование эмбрионов свиней и КРС при 15000 об/мин в течение 3 мин. Сопоставляя результаты двух приведенных выше исследований, можно предположить, что буфер MSOF окажется более эффективным по сравнению со стандартным раствором ТЕ для получения трансгенного крупного рогатого cкота и других видов сельскохозяйственных животных. Основные подходы, исполбзующиеся в настоящее время: 1.2 Использование ретровирусных векторов Результативным способом переноса ДНК в эмбриональные линии животных является применение ретровирусных векторов. Ретровирусы - семейство эукариотических вирусов, генетический материал которых представлен одноцепочечной РНК. На 3 конце геномной РНК R-сегмента расположен регион U3 длиной 170-1250 нуклеотидов, а на 5 конце r-сегмента регион u5 длиной 80-100 нуклеотидов.При образовании ДНК-копии вирусного РНК-генома на концах молекулы происходят изменения: на 5 конце располагается сегмент U3, а на 5 - U5.Такие характерные для ДНК-формы ретровирусоа участки получили название LTR - длинных концевых повторов.