Изучение рецепторной активности гетероциклических азотсодержащих соединений. Разработка гемореологических препаратов - эффективных ингибиторов агрегации тромбоцитов. Создание антагонистов пуриновых рецепторов с новым механизмом антиагрегантного действия.
Аннотация к работе
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Поиск антагонистов пуриновых рецепторов среди конденсированных производных индола и изучение их фармакологических свойствРабота выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ, ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр» Официальные оппоненты: Заслуженный деятель науки РФ, Резников Константин Михайлович, доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук Бугаева Любовь Ивановна Защита диссертации состоится «7» ноября 2012 г. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (400131, г.Учитывая данный факт, представляется интересным поиск веществ, избирательно блокирующих пуриновые рецепторы тромбоцитов, в частности, Р2Y1-рецепторы, среди новых соединений ряда индола: N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов. Показано, что вещество Sbt-119 проявляет антитромботические свойства на моделях тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного поверхностной аппликацией хлоридом железа (III), и электрическим током, на модели генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза на мышах. Объектами исследования на наличие P2Y1-антагонистической активности являлись вещества ряда индола - N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амиды (12 соединений) и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолы (3 соединения), синтезированные в научно-исследовательском институте физической и органической химии (НИИФОХ) Южного Федерального университета. В работе были использованы следующие реактивы и материалы: натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) («ICN», США), натрия хлорид (х.ч., «Мосреактив», Россия), изотонический раствор натрия хлорида (ЗАО «Рестерс», Россия), трис-(оксиметил)-аминометана гидрохлорид (х.ч., «Мосреактив», Россия) и кальция хлорид (ч.д.а, «Мосреактив», Россия), цитрат натрия (ч.д.а., Реахим, Россия), кислота соляная (х.ч., Россия), динатриевая соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) (Sigma, США и Reanal, Венгрия), адреналин гидрохлорид («Ренам», Россия), коллаген («Ренам», Россия), наборы для определения показателей коагулограммы «Тромбо-тест» («Технология-стандарт», Россия), «Техпластин-тест» («Технология-стандарт», Россия), «ТЕХФИБРИНОГЕН-тест» («Технология-стандарт», Россия), «АПТВ (АЧТВ)-тест» («Технология-стандарт», Россия), хлорид железа (ч., «Мореактив», Россия), хлоралгидрат (Россия), формалин (Acros organics, США), цитрат натрия (Реахим, Россия). При выполнении исследований in vivo наиболее активное соединение Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин и клопидогрель вводились животным перорально за два часа до эксперимента в эквимолярных дозах, соответствующих средней терапевтической дозе тиклопидина - 6,0; 11,63 и 7,32 мг/кг соответственно.В результате проведенного скрининга 15 соединений среди замещенных амидов и аминоспиртов ряда индола: N-[(1-R1-амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов было обнаружено 6 (40,0 %) веществ антагонистов P2Y1 рецепторов, из которых 1 соединение превосходило вещество сравнения, P2Y1-антагонист, Basilen blue по степени выраженности данного вида активности. P2Y1-блокирующая активность у замещенных амидов ряда индола определяется строением заместителей, а так же их сочетанием у атома углерода в положении 7. Наиболее высокую активность демонстрируют вещества, имеющие в положении С7 морфолинопропиловый с 4-метифенильным заместителем. Соединение Sbt-119 по влиянию на P2Y1-рецепторы тромбоцитов, превосходит в 3,0 раза по показателю IC20 вещество сравнения Basilen blue. По ингибированию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов соединение Sbt-119 превосходит препарат сравнения тиклопидин в 2,0 раза.
Вывод
1. В результате проведенного скрининга 15 соединений среди замещенных амидов и аминоспиртов ряда индола: N-[(1-R1 -амино) карбонил-2-(1-R2-1H-индол-3-ил) винил]-R3-амидов и 1-R1-амино-3-(3-R2-1Н-индол-1-ил)-2-пропанолов было обнаружено 6 (40,0 %) веществ антагонистов P2Y1 рецепторов, из которых 1 соединение превосходило вещество сравнения, P2Y1-антагонист, Basilen blue по степени выраженности данного вида активности.
2. P2Y1-блокирующая активность у замещенных амидов ряда индола определяется строением заместителей, а так же их сочетанием у атома углерода в положении 7. Наиболее высокую активность демонстрируют вещества, имеющие в положении С7 морфолинопропиловый с 4-метифенильным заместителем. У аминоспиртов ряда индола активность веществ определяется радикалами в положении N9. Наличие метил-(n-бутил)-аминового заместителя или полная его замена на гетероциклический азотосодержащий заместитель (N-азепин) приводит к увеличению данного вида биологического действия.
3. Соединение Sbt-119 по влиянию на P2Y1-рецепторы тромбоцитов, превосходит в 3,0 раза по показателю IC20 вещество сравнения Basilen blue. Соединение Sbt-119 проявляет выраженную антиагрегантную активность. По ингибированию АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов соединение Sbt-119 превосходит препарат сравнения тиклопидин в 2,0 раза. Вещество Sbt-119 и препараты сравнения тиклопидин, клопидогрель в одинаковой степени подавляют адреналин- и коллаген-индуцированной агрегацию тромбоцитов.
4. Вещество Sbt-119 снижает вязкость крови в условиях in vivo, а так же при моделировании экспериментальной патологии in vitro, сопровождающейся развитием синдрома «повышенной вязкости крови и не влияет на показатели вязкости эритроцитов.
5. На модели артериального тромбоза, индуцированного аппликацией хлоридом железа (III) сонной артерии крыс, активность соединения Sbt-119 превосходит препарат сравнения тиклопидин в 1,3 раза. На модели артериального тромбоза сонной артерии крыс, индуцированного электрическим током, соединение Sbt-119 по выраженности антитромботических свойств в 2,5 раза эффективнее тиклопидина.
6. Вещество Sbt-119 увеличивают выживаемость животных на модели генерализованного АДФ-индуцированного тромбоза, при этом его антитромботическая активность превышает таковую у тиклопидина и клопидогреля 1,3 и 1,2 раза соответственно. При этом, результаты гистологического исследования микропрепаратов срезов легочной ткани показали, что соединение Sbt-119 резко снижает количество пристеночных тромбов с сохранением следовых признаков нарушения внутриорганной гемодинамики по сравнению с тиклопидином.
7. Исследование общетоксикологических свойств соединения Sbt-119 показало, что, начиная с восемнадцатикратного увеличения терапевтической дозы, угнетаются мышечная координация и реактивность, снижаются рефлексы, ректальная температура и болевая чувствительность, урежается частота дыхания.
Список литературы
1. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Спасов. А.А., Суздалев. К.Ф. Антитромботическая и антиагрегантная активности нового P2Y1-антагониста - соединения Sbt-119 ex и in vivo / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, А.А. Спасов, К.Ф. Суздалев. // Вестник ВОЛГГМУ. - 2011. - № 4. - С. 19 - 21.
2. Анисимова В.А., Толпыгин И.Е., Спасов А.А., Яковлев Д.С., Митина Т.М. и др. Синтез и фармакологическая активность 10-алкиламиноэтил-2,3,4,10-тетрагидропиримидино[1,2,- а]бензоимидазолов / В.А. Анисимова, И.Е. Толпыгин, А.А. Спасов, Д.С. Яковлев, Т.М. Митина и др. // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т. 46. - № 6. - С. 54 - 59.
3. Анисимова В.А., Спасов А.А., Косолапов В.А., Толпыгин И.Е., Яковлев Д.С., Митина Т.М. и др. Синтез и фармакологи активность хлоридов 3 - (N,N - дизамещенных) ацетамидов - 1- N - 2- аминобензимидазолия / В.А. Анисимова, И.Е. Толпыгин, А.А. Спасов, В.А. Косолапов, Д.С. Яковлев, Т.М. Митина и др. // Химико-фармацевтический журнал. - 2012. - Т. 46. - № 8. - С. 52 - 58.
4. Спасов А.А., Яковлев Д.С., Букатина Т.М. P2Y1-рецепторы и их влияние на процессы агрегации тромбоцитов / Спасов А.А., Яковлев Д.С., Букатина Т.М. //Регионарное кровообращение и микроцеркуляция. - 2012. - Т. 43. - № 3.
5. Митина Т.М., Стуковина А.Ю. Антиагрегантная активность соединения 119 на модели артериального тромбоза, индуцированного хлоридом железа (III) / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина // Материалы II Всероссийского научно-практического семинара для молодых ученых « Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии». Приложение Вестник ВОЛГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВОЛГМУ. - 2010. - С. 102-103.
6. Митина Т.М., Стуковина А.Ю. Влияние новых антиагрегантных соединений производных индола на длительность кровотечения / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 68-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием посвященной 75-летию ВОЛГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВОЛГМУ. - 2010. - С. 182 - 183.
7. Митина Т.М., Стуковина А.Ю., Кучерявенко А.Ф., Суздалев К.Ф. Изучение влияния нового производного индола на функциональную активность тромбоцитов / Т.М. Митина, А.Ю. Стуковина, Кучерявенко А.Ф., К.Ф. Суздалев // III Евразийский конгресс по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика-2010»: Сборник материалов конгресса. - М. 2010. - Т. № 3. - С. 379 - 381.
8. Митина Т.М., Яковлев Д.С. Изучение P2Y1- антагонистических свойств новых производных индола / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев // II международная научно-практическая конференция «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». Сборник статей под редакцией Кудинова А.П., Крылова Б.В. - Санкт-Петербург: Из-во Политехнического университета. - 2011. - Т. 3. - С. 26 - 30.
9. Митина Т.М., Яковлев Д.С. Влияние соединения 119 на агрегационную активность тромбоцитов ex vivo / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 69-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВОЛГМУ. - 2011.
10. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Суздалев К.Ф. Антитромботическая активность соединения 119 - антагониста P2Y1 рецепторов / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, К.Ф. Суздалев // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Сборник материалов конгресса. - М. - 2011. - С. 461 - 462.
11. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Анисимова В.А., Толпыгин В.А. Изучение P2Y1 - антагонистической активности новых хлорид-3-(N,N-дизамещенных) ацетамидов -1-R-2- аминобензимидазолия / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, В.А. Анисимова, В.А. Толпыгин // Материалы II Всероссийского научно-практического семинара для молодых ученых « Методологические аспекты экспериментальной и клинической фармакологии». Приложение Вестник ВОЛГМУ. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВОЛГМУ. - 2011. - С. 14 - 15.
12. Букатина Т. М., Яковлев Д. С., Спасов. А. А., Суздалев. К. Ф. Антитромботическая и тромболитическая активность соединения Sbt-119 на модели in vitro (Gorog Trombosis Test) / Т. М. Букатина, Д. С. Яковлев, А. А. Спасов, К. Ф. Суздалев. // Волгоградский научно-медицинский журнал. -2012. - № 2. - С 12 -14.
13. Митина Т.М., Яковлев Д.С., Суздалев. К.Ф. Антитромботическая активность соединения Sbt -119 на модели артериального тромбоза / Т.М. Митина, Д.С. Яковлев, К.Ф. Суздалев. // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины: Материалы 70-й открытой научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием. Под ред. акад. РАМН В.И. Петрова. - Волгоград: Изд-во ВОЛГМУ. - 2012. - С. 325- 326.