Отримання методом соматичної гібридизації міжтрибних гібридів у комбінаціях: Brassica juncea Arabidopsis thaliana, B.napus A.thaliana, Orychophragmus violaceus A.thaliana, O.violaceus (B.juncea A.thaliana). Аналіз їх ядерного та цитоплазматичного геномів.
Аннотация к работе
Але для дослідження цього процесу необхідно створити гібриди, які містили б хромосоми двох чи більше видів, один з яких буде донором транспозона. Переміщення мобільного елемента можна буде простежити за збереженням в геномі реципіента здатного до транспозиції трансгена, оточеного послідовностями мобільного елемента, та за відсутністю інших трансгенів, які будуть залишатися в геномі виду-донора. Дослідити активність системи мобільних генетичних елементів кукурудзи Spm/DSPM в отриманих гібридах. Нами був запропонований підхід до створення модельної системи, за допомогою якої можна буде виявити транспозицію мобільних генетичних елементів з генома одного виду на геном іншого. Віддалена гібридизація є перспективним підходом для створення таких рослин, адже саме у віддалених гібридах досить часто спостерігали спонтанну втрату хромосом одного з батьківських видів (Tabaeizadeh et al., 1985; Turpin et al., 1986; Sundberg E., Glimelius,1991; Babiychuk et al.,1992; Ananiev et al., 1997; Yamagishi et al., 2003).Показано активність гетерологічної системи мобільних генетичних елементів кукурудзи Spm/DSPM у міжтрибних соматичних гібридах B.juncea A.thaliana, B.napus A.thaliana, O.violaceus A.thaliana. Експериментально доведено, що при міжтрибній соматичній гібридизації селективний ген (bar), який транспозується за рахунок Spm-транспозази виду-донора, зберігається у гібридах, які подібні за фенотипом до виду-реципієнта.
Вывод
1. За допомогою методу соматичної гібридизації створена система для вивчення переносу транспозонів між геномами різних видів.
2. Вперше отримано такі міжтрибні соматичні гібриди: Brassica juncea Arabidopsis thaliana, Orychophragmus violaceus A.thaliana та O.violaceus (B.juncea A.thaliana).
3. Виявлено можливість регенерації рослин при поєднанні у соматичному гібриді O.violaceus (B.juncea A.thaliana) чотирьох геномів: O.violaceus, A.thaliana та B.nigra з B.campestris, які складають геном B.juncea.
4. Показано активність гетерологічної системи мобільних генетичних елементів кукурудзи Spm/DSPM у міжтрибних соматичних гібридах B.juncea A.thaliana, B.napus A.thaliana, O.violaceus A.thaliana.
5. Експериментально доведено, що при міжтрибній соматичній гібридизації селективний ген (bar), який транспозується за рахунок Spm-транспозази виду-донора, зберігається у гібридах, які подібні за фенотипом до виду-реципієнта.
6. Ядерний матеріал A.thaliana в усіх отриманих соматичних гібридів зберігався протягом 3 років, що доведено шляхом дослідження ізоферментних спектрів та ПЛР-аналізів присутності послідовностей ДНК ряду ядерних маркерів і селективних генів.
7. Показано, що у проаналізованих соматичних гібридів (B.juncea A.thaliana, B.napus A.thaliana, O.violaceus A.thaliana, O.violaceus (B.juncea A.thaliana)) зберігався пластом лише одного з батьків, тоді як успадкування мітохондріону відбувалося випадковим чином.
Список литературы
1. Овчаренко О.О., Комарницький І.К., Череп М.Н., Глеба Ю.Ю., Кучук М.В. Отримання міжтрибних соматичних гібридів Brassica juncea Arabidopsis thaliana та дослідження поведінки трансгенних ознак // Цитология и генетика. - 2004. - Т. 38, № 3. - С. 3 - 8.
2. Овчаренко О.О., Комарницький І.К., Череп М.Н., Рудас В.А., Кучук М.В. Отримання міжтрибних соматичних гібридів дигеномного (Orychophragmus violaceus Arabidopsis thaliana) та тетрагеномного (Orychophragmus violaceus Brassica juncea Arabidopsis thaliana) походження та їх використання для вивчення поведінки гетерологічної системи транспозонів Spm/DSPM // Біополімери та клітина. - 2005. - Т. 21, № 1. - С. 35 - 41.
3. Овчаренко О.О., Комарницький І.К., Череп М.Н., Кучук М.В. Отримання соматичних гібридів Brassica napus Arabidopsis thaliana та їх використання для дослідження активності гетерологічної системи транспозонів Spm/DSPM // Фактори експериментальної еволюції. Збірник наукових праць. - Т. 2. - С. 166 - 171. / За ред. М.В. Роїка. - К.: КВІЦ, 2004. - 416 с.
4. Ovcharenko O.O., Komarnitski I.K., Kuchuk M.V. Production of intertribal somatic hybrids between Arabidopsis thaliana and cultivated species Brassica juncea. // Abstracts of international symposium “Biotechnology Approaches for Exploitation and Preservation of Plant Resources”, Ukraine, Yalta, 26-31 May 2002. - P. 74.
5. Овчаренко О.А., Комарницкий И.К., Череп Н.Н., Рудас В.А., Кучук Н.В. Получение межтрибных соматических гибридов дигеномного (Orychophragmus violaceus Arabidopsis thaliana) и тетрагеномного (Orychophragmus violaceus Brassica juncea Arabidopsis thaliana) происхождения и их использование для изучения поведения гетерологической системы транспозонов Spm/DSPM. // Молекулярная генетика, геномика и биотехнология. Международная научная конференция, Минск, 24-26 ноября 2004 г.: Материалы конференции. - С. 171 - 172. / Ред. кол. Н.А. Картель и др. - Минск, 2004 г. - 356 с.
6. Овчаренко О.А. Анализ пластома и митохондриона соматических гибридов Brassica napus Arabidopsis thaliana // Актуальні проблеми фізіології, генетики та біотехнології рослин і грунтових мікроорганізмів. Тези доповідей ІХ конференції молодих дослідників, присвяченої 100-річчю від дня народження академіка АН УРСР і ВАСГНІЛ П.А. Власюка. Київ, 24 - 25 лютого 2005. - С. 69.