Аналіз впливу трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку та фетальної печінки на показники імунної системи у опромінених та неопромінених мишей. Визначення залежності ступеня змін у печінці і тимусі після трнсплантації від віку.
Аннотация к работе
Ця система постійно зазнає негативного впливу зовнішніх факторів та спричинених ними ендогенних порушень, що позначається на зниженні функціональних можливостей системи імунітету та організму в цілому (Ярилин А. А., 2003). Найважливіша властивість ГСК полягає в здатності підтримувати власну популяцію протягом тривалого часу і забезпечувати диференційовані клітини крові та імунної системи, які виконують в організмі специфічні функції. Біологічна значимість стовбурових клітин полягає в тому, що вони відіграють провідну роль в організації багатоклітинних організмів і є центральним елементом структурно-функціональних одиниць тканин і органів (Bryder D. et al., 2006; Chambers S. et al., 2007). Необхідно враховувати, що власні ГСК здатні нормально виконувати свої функції в тісному взаємозвязку з мікрооточенням (нішею), оскільки в організмі існує не лише кількісний, а й функціональний баланс стовбурових клітин та їхніх ніш (Suda T. et al., 2005). Визначення субпопуляцій клітин кісткового мозку, тимуса, селезінки і фетальної печінки з використанням моноклональних антитіл до поверхневих мембранних маркерів; дослідження здатності стовбурових клітин кісткового мозку утворювати in vitro колонії клітин-попередників гранулоцитів і макрофагів (КУК-ГМ) та колонії стромальних клітин-попередників фібробластів (КУК-Ф) за допомогою культурального методу; визначення проліферативної активності спленоцитів під впливом Т-клітинних (фітогемаглютинін - ФГА) та В-клітинних (ліпополісахарид E.coli - ЛПС) мітогенів в реакції бласттрансформації лімфоцитів; оцінка показників фагоцитарної активності перитонеальних макрофагів в реакції поглинання латексу; визначення рівня аглютинінів та гемолізинів в сироватці крові мишей; визначення кількості антитілоутворюючих клітин (АУК) в селезінці; виявлення нащадків трансплантованих клітин в кістковому мозку реципієнтів ГСК по флуоресценції зеленого флуоресцентного білка (GFP) методом люмінесцентної мікроскопії та проточної цитометрії; виявлення трансплантованих ГСК в головному мозку імуногістохімічним методом з використанням моноклональних антитіл проти GFP за допомогою лазерної скануючої мікроскопії; визначення маси тіла, тимуса, селезінки та індексу маси тимуса і селезінки; визначення загальної кількості ядровмісних клітин кісткового мозку, тимуса, селезінки, перитонеального ексудату.Донорами ГСК кісткового мозку були тварини віком 3 місяці, донорами ГСК фетальної печінки - плоди мишей 13,5 дня гестаційного періоду. Трансплантацію клітин (1•107 виділених ядровмісних клітин кісткового мозку, або 0,8•107 виділених ядровмісних клітин фетальної печінки, що відповідає 2•104 відсортованих Lin-Sca-1 c-kit клітин) проводили в хвостову вену мишам в обємі 100 мкл середовища RPMI-1640 за допомогою розробленого нами пристрою. Субпопуляції Lin-, Lin-Sca-1 c-kit , Lin-Sca-1 c-kit flt CD150-, Lin-Sca-1 c-kit flt-CD150 та Lin-Sca-1 c-kit flt-CD150-ГСК кісткового мозку та фетальної печінки визначали методом проточної цитометрії за допомогою моноклональних антитіл, конюгованих з флуорохромами (Becton Dickinson, США) в робочій концентрації 0,5 мкг на 106 клітин за рекомендаціями фірми-виробника. При фенотипуванні ГСК кісткового мозку для трансплантації за маркерами LSK-клітин та їх субпопуляцій було встановлено, що LSK-клітини становили біля 0,18% від усіх виділених ядровмісних клітин. Через 3 тижні після трансплантації в кістковому мозку опромінених реципієнтів ГСК фетальної печінки кількість ядровмісних клітин була більшою не лише порівняно з реципієнтами ГСК кісткового мозку, а й з тваринами контрольної групи, що особливо виражено у старих тварин (р<0,05).В дисертаційній роботі здійснено теоретичне узагальнення та наведено вирішення наукового завдання щодо виявлення впливу трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин різного ступеня зрілості на функцію імунної системи в нормі та при її пошкодженні в молодому і старому віці. Трансплантація гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку та фетальної печінки дозволяє компенсувати пошкодження імунної системи та впливає на перебудову імунної відповіді у молодих та старих мишей. У опромінених та неопромінених мишей в ранні терміни після трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку або фетальної печінки субпопуляції клітин в тимусі перерозподіляються в бік зростання ранніх недиференційованих CD4-8-тимоцитів та диференційованих CD4 8-і CD4-8 клітин, при відносному зниженні кількості проміжних малодиференційованих CD4 8 тимоцитів, що вказує на прискорення дозрівання цих клітин в тимусі. Виявлено збільшення кількості CD4 8 клітин в кістковому мозку та селезінці після опромінення та трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин фетальної печінки у старих мишей, а у молодих - після трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку. В ранні терміни після трансплантації гемопоетичних стовбурових клітин кісткового мозку або фетальної печінки у опромінених молодих та старих мишей зростають показники фагоцитарної активності пери