Морфологічні зміни в будові тимуса статевонезрілих щурів та тварин репродуктивного періоду після імуностимуляції та імуносупресії. Вплив імуномодулятора тимічного походження останнього покоління на показники органометрії та морфометрії тимуса білих щурів.
Аннотация к работе
В останні десятиліття в світі збільшилася кількість захворювань, етіологія і патогенез яких прямо або опосередковано повязані з порушеннями діяльності імунної системи (В.П. У звязку з цим, будь-яка ендогенна або екзогенна дія обовязково призводять до морфологічних змін в будові і функції органів, що входять в її склад. Фундаментальними дослідженнями доведено, що тимус є первинним регулятором імунних процесів в організмі у звязку з тим, що саме в тимусі визначається майбутня доля Т-лімфоцитів як функціонально активної популяції. Дані літератури свідчать про те, що тимус активно реагує на будь-яку екзогенну або ендогенну дію, що виявляється змінами в його будові і функціях (В.К. Метою дослідження явилося виявлення особливостей змін в будові тимуса щурів на макро-, мікро-і ультраструктурному рівнях після застосування імуностимулюючого лікарського засобу (імунофан) та імуносупресивного препарату (циклофосфан).При роботі з тваринами керувалися положеннями брифінгу Європейського наукового співтовариства «Використання тварин в дослідженнях» (2000) та етичного Кодексу лікаря України, Законом України «Про захист тварин від жорстокого поводження» від 21.02.2006 р. Відразу після екстракції тимус зважували на торсійних вагах, мінімально торкаючись органу, щоб уникнути появи артефактів, визначали розміри за допомогою штангенциркуля ШЦ-1, фіксували в 10% розчині нейтрального формаліну. В тимусі визначали ширину (мкм) і площу кіркової і мозкової речовини (процентне відношення останніх до площі часточки); кірково-мозковий індекс, що є відношенням площі кіркової речовини до площі мозкової; щільність розташування клітин на стандартній площі субкапсулярної зони кіркової речовини (104 мкм2), а також кількість тимоцитів і епітеліоретикулоцитів на даній площі. Максимальну абсолютну масу має тимус після досягнення щурами віку 3 - 4 місяців - 338,33±8,30 мг, тоді як відносна маса тимуса контрольних тварин досягає максимуму на 4 - 5 тижні життя тварини - 3,19±0,26 мг/г. Показник кірково-мозкового індексу тимуса має максимальне значення у статевонезрілих щурів (4,17-4,21), у щурів репродуктивного періоду він знижується (3,62-3,65).У дисертаційній роботі вирішено актуальне наукове завдання - встановлені морфологічні особливості будови тимуса білих щурів при активізації імунної системи після застосування імунофану та при імунодефіцитному стані, викликаному введенням циклофосфану. У статевонезрілих тварин це виявляється статистично значимим збільшенням показників абсолютної і відносної маси залози на 14,16% - 16,16% і 20,89% - 27,66%, лінійних розмірів на 13,65% - 16,49%, 9,96% - 20,75% і 12,60% - 18,12%, ширини і площі кіркової речовини на 7,15% - 23,71% і 9,30% - 12,58%, а також кірково-мозкового індексу - на 40,87% - 54,58% в різні терміни спостереження. У статевозрілих щурів спостерігається збільшення показників абсолютної (10,83% - 16,40%) і відносної (9,45% - 26,41%) маси органу, лінійних розмірів на 7,37% - 17,47%, 15,71% - 18,30% і 10,74% - 21,45% (30 - 90 доба), ширини, площі кіркової речовини і кірково-мозкового індексу на 15,40% - 33,33%, 12,13% - 20,21% і 35,53% - 61,75%, що свідчить про збільшення функціональної активності органу. Показники абсолютної і відносної маси органу статевонезрілих тварин експериментальної групи статистично значимо знижені в порівнянні з даними контрольної групи на 9,90% - 52,89% і 3,00% - 59,93% (1 - 30 доба) відповідно, лінійні розміри - на 21,31% - 45,39%, 14,49% - 28,86% і 13,88% - 37,63% відповідно, показники ширини, площі кіркової речовини і кірково-мозкового індексу - на 20,08% - 42,14%, 6,22% - 18,87% і 25,42% - 50,30% (1 - 30 доба). У тварин репродуктивного періоду після введення циклофосфану спостерігається зменшення показників абсолютної (6,30% - 32,20%) і відносної (13,56% - 38,58%) маси органу і ширини кіркової речовини на 7,69% - 46,21%, його площі на 1,64% - 18,93%, показника кірково-мозкового індексу на 7,12% - 50,74% (1 - 30 доба) в порівнянні з даними контрольної групи тварин.
План
Основний зміст роботи
Вывод
У дисертаційній роботі вирішено актуальне наукове завдання - встановлені морфологічні особливості будови тимуса білих щурів при активізації імунної системи після застосування імунофану та при імунодефіцитному стані, викликаному введенням циклофосфану.
1. Використані експериментальні моделі імуностимульованого та імунодефіцитного стану в морфологічному експерименті дозволили виявити динаміку змін органометричних і морфометричних параметрів тимуса експериментальних тварин, що підтверджена даними електронномікроскопічного дослідження і аналізу складу периферичної крові.
2. Морфологічна будова тимуса щурів зазнає істотні зміни після імуностимуляції. У статевонезрілих тварин це виявляється статистично значимим збільшенням показників абсолютної і відносної маси залози на 14,16% - 16,16% і 20,89% - 27,66%, лінійних розмірів на 13,65% - 16,49%, 9,96% - 20,75% і 12,60% - 18,12%, ширини і площі кіркової речовини на 7,15% - 23,71% і 9,30% - 12,58%, а також кірково-мозкового індексу - на 40,87% - 54,58% в різні терміни спостереження. У статевозрілих щурів спостерігається збільшення показників абсолютної (10,83% - 16,40%) і відносної (9,45% - 26,41%) маси органу, лінійних розмірів на 7,37% - 17,47%, 15,71% - 18,30% і 10,74% - 21,45% (30 - 90 доба), ширини, площі кіркової речовини і кірково-мозкового індексу на 15,40% - 33,33%, 12,13% - 20,21% і 35,53% - 61,75%, що свідчить про збільшення функціональної активності органу. Введення імунофану щурам статевонезрілого віку викликає більш виражені реактивні гістологічні зміни з боку тимуса, ніж в групі тварин репродуктивного періоду, що повязано з недосконалістю функціонування регуляторних систем молодого організму.
3. Морфологічні зміни тимуса статевонезрілих тварин після імуносупресії носять більш виражений характер в порівнянні з даними в групі щурів репродуктивного періоду. Показники абсолютної і відносної маси органу статевонезрілих тварин експериментальної групи статистично значимо знижені в порівнянні з даними контрольної групи на 9,90% - 52,89% і 3,00% - 59,93% (1 - 30 доба) відповідно, лінійні розміри - на 21,31% - 45,39%, 14,49% - 28,86% і 13,88% - 37,63% відповідно, показники ширини, площі кіркової речовини і кірково-мозкового індексу - на 20,08% - 42,14%, 6,22% - 18,87% і 25,42% - 50,30% (1 - 30 доба). У тварин репродуктивного періоду після введення циклофосфану спостерігається зменшення показників абсолютної (6,30% - 32,20%) і відносної (13,56% - 38,58%) маси органу і ширини кіркової речовини на 7,69% - 46,21%, його площі на 1,64% - 18,93%, показника кірково-мозкового індексу на 7,12% - 50,74% (1 - 30 доба) в порівнянні з даними контрольної групи тварин. На 90 добу превалюють процеси адаптації і відновлення нормальної гістологічної структури і морфометричних параметрів органу.
4. Застосування імунофану спричиняє виражений вплив на процеси дозрівання і диференціювання тимоцитів у тварин репродуктивного періоду, про що свідчить аналіз мазків-відбитків і гістологічних зрізів тимуса, забарвлених гематоксилін-еозином та азур ІІ-эозином. Спостерігається статистично значиме збільшення щільності розташування клітин на одиниці площі зрізу в субкапсулярній зоні кіркової речовини тимуса статевозрілих тварин на 6,30% - 33,37% (15 - 90 доба), що свідчить про стимулюючий вплив препарату. Одноразове введення циклофосфану експериментальним тваринам призводить до зниження щільності розташування клітин на 28,25% - 41,23% (1 - 30 доба).
5. Дослідження ультраструктури тимуса білих щурів після введення імунофану свідчить про інтенсивний розвиток органел синтезу в клітинах епітеліоретикулярної строми (30 діб). Після застосування циклофосфану в паренхімі тимуса спостерігається поява активних макрофагів і плазмоцитів. Присутність останніх вказує на порушення проникності гематотимусного барєру. Встановлені зміни характерні для 1 доби спостереження після введення імуносупресора, тоді як через 30 діб після введення циклофосфану відмінності в будові тимуса експериментальних тварин істотно нівелюються.
6. Стан імуностимуляції, що індукується введенням імунофану, проявляється на фоні статистично значимого збільшення рівня Е-розеткоутворюючих клітин на 25,53% (30 діб). Застосування імуносупресора призводить до зменшення рівня Е- розеткоутворюючих клітин на 1 - 30 добу спостереження на 9,42% - 28,54%. Зміни гемограми після імуностимуляції і імуносупресії носять різноспрямований характер залежно від стану гемопоезу.
Практичні рекомендації
1. Отримані дані щодо високого ступеня реактивності тимуса в умовах екзогенних дій можуть бути використані при проведенні лікувально-профілактичних заходів в практичній медицині.
2. Морфологічні зміни в будові тимуса щурів після проведених екзогенних дій свідчать про необхідність комплексного підходу в діагностиці та лікуванні в онкологічній, імунологічній, алергологічній, педіатричній практиках.
3. Факт більш вираженої реакції органу на імуностимуляцію та імуносупресію у статевонезрілих тварин вимагає пильної уваги фахівців при проведенні діагностичних та лікувальних заходів в педіатрії.
Список литературы
1. Захаров А.А. Особенности строения тимуса половозрелых белых крыс после применения циклофосфана / А.А. Захаров // Таврический медикобиологический вестник. - 2008. - Т. 11, № 3, ч. I. - С. 45-49.
2. Захаров А.А. Морфологические изменения тимуса после иммуносупрессии в эксперименте / А.А. Захаров // Клінічна анатомія та оперативна хірургія. - 2008. - Т. 7, № 4. - С. 15 - 19.
3. Захаров А.А. Особенности строения тимуса неполовозрелых белых крыс после применения имунофана / А.А. Захаров // Світ біології та медицини. - 2009. - № 1. - С. 54 - 57.
4. Кащенко С.А. Органометрические особенности строения тимуса белых крыс после иммуностимуляции и иммуносупрессии / С.А. Кащенко, А.А. Захаров // Український журнал клінічної та лабораторної медицини. - 2009. - Т. 4, № 3. - С. 50 - 52. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка статті до друку).
5. Захаров А.А. Особенности ультрамикроскопического строения тимуса половозрелых белых крыс после применения имунофана / А.А. Захаров // Український медичний альманах. - 2009. - Т. 12, № 1. - С. 75 - 77.
6. Кащенко С.А. Морфологические изменения структуры тимуса и особенности показателей периферической крови половозрелых крыс после введения циклофосфана / С.А. Кащенко, А.А. Захаров // Український морфологічний альманах. - 2007. - Т. 5, № 4. - С. 128. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
7. Lee A.V. Morphological changes of structure of thymus and features of indexes of peripheral blood of mature rats after introduction of cyclophosphan / A.V. Lee, A.A. Zakharov, S.A. Kashchenko // Український медичний альманах. - 2008. - Т. 11, № 1. - С. 186-187. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
8. Кащенко С.А. Особенности строения тимуса экспериментальных животных после иммуносупрессии / С.А. Кащенко, А.А. Захаров // В зб. матеріалів наук.-практ. конфер. «Прикладні аспекти морфології експериментальних і клінічних досліджень», 29-30 травня 2008 р. - м. Тернопіль, «Укрмедкнига». - С. 54-55. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
9. Kashchenko S.A. Changes of thymus structure of mature white rats after cyclophosphanum application / S.A. Kashchenko, A.A. Zakharov // Macedonian journal of medical sciences. - 2008. - № 1 (suppl. 1). - P. 36-37. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
10. Морфологические особенности органов иммунной и эндокринной систем после применения циклофосфана / С.А. Кащенко, И.В. Бобрышева, А.А. Захаров, С.Ю. Штепа // Морфология. - 2008. - Т. 133, № 2. - С. 61. (Особисто здобувачем проведено морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, підготовка тез до друку).
11. Кащенко С.А. Изменения в строении тимуса половозрелых крыс после иммуностимуляции / С.А. Кащенко, А.А. Захаров // В зб. матеріалів наук.-практ. конфер. «Морфологічні основи компенсаторно-пристосувальних процесів і їх структурне забезпечення», 10-11 жовтня 2008 р. - м. Тернопіль, «Укрмедкнига». - С. 33-34. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
12. Кащенко С.А. Особливості будови тимуса експериментальних тварин після імуносупресії / С.А. Кащенко, О.О. Захаров // ХІІ конґрес Світової федерації українських лікарських товариств: тези доповідей. - Івано-Франківськ-Київ-Чікаґо, 2008. - С. 507-508. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
13. Lee A.V. Features of thymus structure of experimental animals after imunofan administration / A.V. Lee, S.A. Kashchenko, A.A. Zakharov // Український медичний альманах. - 2009. - Т. 12, № 1 (додаток). - С. 33 - 34. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
14. Gorlov N.V. Morphological features of thymus structure of immature rats after cyclophosphanum introduction / N.V. Gorlov, S.A. Kashchenko, A.A. Zakharov // Український медичний альманах. - 2009. - Т. 12, № 1 (додаток). - С. 23 - 24. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
15. Zakharov A.A. Morphological changes of thymus structure of immature rats after imunofan administration / A.A. Zakharov // Український медичний альманах. - 2009. - Т. 12, № 1 (додаток). - С. 66 - 67. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).
16. Кащенко С.А. Особенности ультрамикроскопического строения тимуса половозрелых белых крыс после применения имунофана / С.А. Кащенко, А.А. Захаров // Мат. ІІІ міжнародної наук.-практ. конф. «Проблеми та перспективи методичних підходів до аналізу стана здоровя», 26-27 березня 2009 р. - м. Луганськ, Луганський державний медичний університет. - С. 37. (Особисто здобувачем проведено забір матеріалу, морфометричний аналіз, статистична обробка отриманих даних, їх узагальнення, підготовка тез до друку).