Устройство бактериологической лаборатории, требования предъявляемые к ее работе. Изучение классификации патогенных для человека микроорганизмов. Правила забора, хранения и транспортировки материала для проведения микробиологического исследования.
Аннотация к работе
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»«Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Пособие содержит основные сведения по устройству и организации работы бактриологической лаборатории, методам забора, хранения и транспортировки материала для бактериологического исследования. Большое внимание уделено вопросам этиологии и лабораторной диагностике бактериальных инфекций. Кратко, в объеме необходимом для врача-лаборанта, раскрыты вопросы патогенеза и клиники бактериальных инфекций. Пособие предназначено для слушателей факультета усовершенствования по курсу лабораторной диагностики, врачей-лаборантов и преподавателей.Распаковка материала, присланного в лабораторию для исследования, проводится лаборантом с соблюдением мер предосторожности. Срок доставки материала в лабораторию не должен превышать двух часов: - необходимо учитывать, что при длительном хранении материала, происходит гибель наиболее требовательных к определенному составу среды и температурному режиму видов микроорганизмов и размножение менее требовательных и медленно растущих видов, что приводит к нарушению количественного соотношения возбудителя и дезориентирует врача-микробиолога при интерпретации результатов; При заборе используют круговые вращательные движения от центра к периферии пораженного участка, во время забора материала не касаются тканей, окружающих рану, чтобы не забрать дополнительную микрофлору. Забор фекалий можно проводить ректальным тампоном (материал от детей) для этого тампон вводят за пределы анального сфинктра и аккуратно вращая, забирают материал из анальных крип. Забор материала при бактериальных инфекциях ЦНС Забор материала: - материал из абсцессов мозга аспирируют и отправляют в лабораторию в емкости с анаэробной средой;Далее изучают колонии, lkztujделают посев на скошенный агар для накопления и идентификации культуры, определяют чувствительность к антибиотикам. Бактериологическая диагностика катетер-ассоциированных инфекций Для лабораторной диагностики проводят: - микроскопию мазков отделяемого в месте установки катетера; Полуколичественный метод исследования удаленного катетера: - для определения возбудителя КАИК проводят четырехкратное прокатывание дистального фрагмента (5-7см), извлеченного катетера по поверхности плотной питательной среды (5% кровяной агар); Образовавшуюся суспензию в объеме 0,1 мл наносят на 5 % кровяной агар и инкубируют при 37 0 С в течение 5 дней с последующим умножением числа выросших колоний на соответствующий коэффициент разведений; обсемененность >103 КОЕ/ мл считается показателем наличия КАИК. Доставленный в лабораторию образец СМЖ (мутную или опалесцирующую) первоначально центрифугируют, используя осадок для мазка и посева; мазок окрашивают метиленовым синим.фермент бараньей крови НАДАЗА разрушает V-фактор (НАД), поэтому на данной среде не растут микроорганизмы, зависимые от этого фактора роста; Является элективной средой для роста и размножения стафилококков, которые могут расти на среде с добавлением высоких концентраций соли. Для нейтрализации жирных кислот, ионов металла, сульфидов, перекиси, которые подавляют рост Bordetella pertusis и Bordetella parapertusis, в среду добавляют крахмал, активированный уголь, сывороточный альбумин. Перевар желатина, крахмал добавляют в среду для нейтрализации жирных кислот, подавляющих рост Bordetella pertusis.
Введение
В настоящее время проблема гнойно-воспалительных заболеваний (ГВЗ) в неинфекционной клинике является одной из приоритетных в практическом здравоохранении. Для современной инфекционной патологии характерны увеличение частоты и удельного веса гнойных инфекций, а также появление новых возбудителей с измененными и раннее неизвестными свойствами.
Увеличение частоты и тяжести течения гнойных инфекций многообразно и связано с рядом причин. Прежде всего, это очень широкое и порой неоправданное использование химиотерапевтических препаратов, нарушающих нормальный биоценоз организма и приводящих к формированию антибиотикоустойчивых штаммов; интенсивное развитие оперативной и другой инвазивной техники, что привело к появлению новых путей передачи; использование для лечения иммунодепрессантов; аллергизация населения и проблемы ятрогенного характера; нарушение правил асептики и антисептики и возникающее на фоне всего перечисленного снижение иммунологической реактивности организма. Повышение удельного веса ГВЗ, несомненно, связано с внедрением в лабораторную диагностику новых экспресс-методов, разработкой и внедрением тест-систем и амплификационных тестов для диагностики. Все эти причины отразились на этиологической структуре современных ГВЗ в неинфекционной клинике, возбудителями которых являются условно-патогенные микроорганизмы, а также привели к широкой циркуляции полирезистентных штаммов бактерий и, как следствие этого, к увеличению удельного веса и тяжести течения внутрибольничных инфекций.
В настоящее время отмечаются новые тенденции в этиологической структуре ГВЗ: 1.Снижение ведущей роли энтеробактерий и повышение частоты встречаемости Гр(-) неферментирующих бактерий (Pseudomotas aeruginosa, Acinetobacter spp.).
2.Увеличение роли Гр( ) бактерий, таких как Enterococcus spp, Streptococcus spp, Staphylococcus spp, в том числе - MRSA метициллино-резистентные Staphylococcus aureus, MRSE- метициллино-резистентные
S. epidermidis .
3. Появление возбудителей, которые редко встречались раньше,-Stenotrophomonass maltophilia, Flavobacterium spp, грибов рода Candida .
Успешное решение вопроса борьбы с госпитальными гнойно-воспалительными и септическими заболеваниями связано, в первую очередь, с их своевременной микробиологической диагностикой, рациональной химиотерапией и решением ряда эпидемиологических вопросов. Особенно важна правильная трактовка полученных результатов.
6
1. Бактериологическая лаборатория
1.1. Устройство бактериологической лаборатории Бактериологическая лаборатория - комплекс помещений, специально оборудованных для проведения бактериологических исследований.
При лечебно-профилактических учреждениях бактериологические лаборатории проводят исследования: - диагностического и профилактического характера: обследуют организованные коллективы и отдельных лиц на носительство патогенных бактерий.
В бактериологической лаборатории: - проверяют бактериальную загрязненность смывов с инвентаря, оборудования и рук, персонала родильных домов и хирургических стационаров, детских ясель и садов, работников предприятий общественного питания и торговли пищевыми продуктами;
- выполняют анализы, необходимые для постановки, уточнения диагноза заболевания.
Материалом для исследования в бактериологических лабораториях являются: - моча, фекалии, мокрота, гной, кровь, спинномозговая жидкость; - слизь из зева и носа, трупный материал;
- объекты окружающей среды: вода, воздух, почва, продукты питания, смывы с рук, инвентаря и т.д;
- контроль за состоянием внешней среды в хирургических стационарах, отделениях реанимации, аптеке, стерильных материалов, смывов с рук персонала и оборудования, операционных и перевязочных 1 раз в неделю.
Сотрудники бактериологической лаборатории выполняют следующие функции: - прием, регистрацию и посев поступающего на исследование материала;
- выделение чистых культур и определение их чувствительности к антибактериальным препаратам;
- уничтожение инфицированного материала; - выдачу результатов исследований;
- проведение инструктажа медицинского персонала о показаниях, методике забора, хранения и транспортировке взятого материала.
Лаборатория должна располагаться в отдельном здании или в изолированной части здания и иметь не менее 2 входов.
Все помещения лаборатории условно делят на «чистую» и «заразную» зоны.
Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, приточно-вытяжной вентиляцией, центральным отоплением, горячим водоснабжением.
В лаборатории должны быть оборудованы раковины для мытья рук персонала и раковины, предназначенные для мытья инвентаря.
7
Предъявляемые требования: - окна должны быть с легко открываемыми форточками и оборудованы мелкими сетками;
- все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение;
- стены лаборатории должны быть облицованы глазурной плиткой на высоту 1,5м или выкрашены масляной краской светлых тонов;
- помещения лаборатории должны быть непроницаемы для грызунов;
- столы, на которых производится микроскопирование, должны быть оснащены специальными настольными лампами дневного света. Рабочие поверхности столов изготавливаются их водонепроницаемого, кислото- и щелочеустойчивого материала, не портящегося при обработке дезинфицирующими растворами;
- мебель лаборатории не должна иметь щелей и пазов, затрудняющих обработку обеззараживающими веществами;
- в коридорах или на хорошо доступных местах должны быть размещены щиты с набором противопожарного инвентаря;
- в лаборатории должна быть аптечка с необходимым набором средств для оказания первой помощи.
Помещения лаборатории должны быть распланированы таким образом, чтобы соблюдалась поточность (этапность) технологического пtrialса.
Регистратура и помещение для приема проб размещается при входе в лабораторию. Исследуемый материал в лабораторию доставляется в специальном металлическом футляре, биксе и т.д. Распаковка материала, присланного в лабораторию для исследования, проводится лаборантом с соблюдением мер предосторожности. Банки и пробки, содержащие материал, обтирают дезинфицирующим раствором и ставят в металлические подносы и штативы. Бикс, в котором доставляется материал, обрабатывают внутри дезинфицирующим раствором. Только после этого в него можно положить чистую посуду, требуемую в отделении.
Основные помещения бактериологической лаборатории
1. Посевная и рабочая комнаты должны быть размещены смежно и приближены к помещению для приема проб с учетом соблюдения поточности работы с зараженным материалом. В бактериологической лаборатории проводятся исследования по 4 основным группам: кишечная, воздушно-капельная, гнойно-воспалительная, санитарная бактериология. Необходимо иметь различные комнаты для работы по всем этим группам.
2. Бокс предназначен для проведения работ в асептических условиях. В боксе проводится контроль стерильности простерилизованной продукции, смывов с рук хирургов, шовного материала, аптечной продукции.
Бокс комплектуется из 2-х помещений: собственно бокса и предбоксника. Для бокса может быть выделено отдельное помещение. Предбоксник должен быть отделен от бокса стеклянной перегородкой с дверью. Стены, потолок и оборудование боксов и предбоксников должны быть окрашены светлой
8 масляной краской или выложены плиткой, не иметь выступов, карнизов, щелей, трещин, пол должен быть покрыт линолеумом или плиткой. Бокс должен быть оборудован приточно-вытяжной вентиляцией с преобладанием притока над вытяжкой. В боксе и предбокснике для обеззараживания воздуха устанавливают бактерицидные лампы на высоте не ниже 2 м от пола.
3. Моечная оборудована для мытья посуды. Здесь обязательно должны быть раковины, горячая вода, емкости для замачивания чашек, петель, пробирок, стол.
4. Стерилизационное помещение для стерилизации питательных сред, предметов медицинского назначения, лабораторной посуды.
5. Средоварочная. В ней производится приготовление, разлив, хранение питательных сред.
6. Помещение для монтирования посуды.
7. Помещение для персонала. Здесь оборудованы шкафчики для верхней одежды и вешалки для халатов. Обязательной формой одежды является халат, колпак, сменная обувь.
8. Другие помещения: материальная предназначена для хранения запасов реактивов, посуды, аппаратуры, хозяйственного инвентаря.
На каждую группу микробиологических исследований необходимо иметь отдельный термостат. В больших лабораториях целесообразно вместо расстановки нескольких термостатов, оборудовать термальную комнату в изолированном темном помещении, включающую термальную камеру, стены которой покрываются теплоизоляционным материалом, а вдоль стен устраивают стеллажи, покрытые легко дезинфицируемым материалом, и предбоксник.
Работу с жидкостями осуществляют с помощью груш или автоматических пипеток. Для обеззараживания инфекционного материала в лаборатории должны находиться емкости с дезинфицирующим раствором.
Работу с культурами микробов I и II групп можно проводить только с разрешения Центральной режимной Комиссии Главного управления карантинных инфекций Министерства Здравоохранения РФ.
Работа с возбудителями III и IV групп требует соблюдения обычного режима работы лаборатории, обеспечивающего надежную защиту персонала лаборатории от внутри лабораторных заражений в процессе исследований и надлежащее обеззараживание материала, исключающее возможность распространения инфекции за пределы лаборатории. Производственные лаборатории, производящие работы с микроорганизмами III и IV группы патогенности должны располагаться в отдельно стоящих зданиях, не связанных с производственными помещениями, или в изолированном блоке здания, имеющим два отдельных входа, а лаборатории, работающие с микроорганизмами IV группы патогенности, могут располагаться в изолированном блоке производственного корпуса.
9
Порядок хранения культур I-IV групп.
Культуры хранят в пробирках на плотных питательных средах и в ампулах в лиофилизированном состоянии. На пробирках должны быть наклеены этикетки с номерами штамма по инвентарной книге, названием возбудителя и датой пересева. Культуры хранят в холодильниках или сейфах.
Порядок передачи культур микробов внутри учреждения и за его пределы. Из лаборатории в лабораторию в пределах одного учреждения культуры микробов III-IV групп передаются по письменному разрешению заведующего; возбудители I-II групп-с разрешения руководителя учреждения. Для выдачи культур за пределы лаборатории необходимо официальное требование за подписью руководителя учреждения, скрепленное гербовой печатью.
1.2. Требования, предъявляемые к работе бактериологической лаборатории: - доставка в лабораторию материала проводится в контейнерах, биксах или в сумках-холодильниках;
- во время работы с патологическим материалом, которую проводят в боксах и предбоксниках, двери должны быть закрыты, выход из бокса во время работы запрещен;
- после окончания работы все объекты, содержащие патогенные биологические агенты (ПБА), убираются в холодильники, термостаты, шкафы для дезинфекции;
- слив необеззараженных жидкостей в канализационную сеть запрещен;
- посуда со сгустками крови подлежит обеззараживанию дезинфицирующими растворами;
- после завершения работы в «заразной» зоне все помещения ее запираются и опечатываются; хранение ПБА, их учет, передача, транспортировка и уничтожение проводится в соответствии с требованиями СП 1.2.036-95;
- в одном и том же помещении допускается поочередное проведение диагностических и экспериментальных исследований после проведения дезинфекции помещения;
- в лаборатории должен храниться минимум недельный запас дезинфицирующих средств;
- контроль работы автоклавов проводят в соответствии с «Методическими указаниями по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов»;
- обязательно проводить текущую уборку помещений ежедневно влажным способом после окончания рабочего дня: в «чистой» зоне лаборатории с использованием моющих средств; в «заразной» зоне уборку проводят с применением дезинфектантов;
- в боксах обязательно еженедельная генеральная уборка с применением дезинфицирующих средств. После проведения влажной уборки обязательно включают бактерицидные лампы.
Возбудители заразных болезней в соответствии со степенью опасности заражения для работающих с ними лиц подразделяются на четыре группы.
10
Классификация патогенных для человека микроорганизмов I-IV групп патогенности
(Извлечение из приложения 5.1 к СП 1.2.011-94) Бактерии
Группа I: Yersinia pestis.
Группа II: Vibrio cholera О1 и О139, Brucella spp., Francisella spp., Bacillus anthracis, сапа, Rickettsia prowazekii.
2. Основные правила забора, хранения и транспортировки материала для проведения микробиологического исследования
Результаты микробиологической диагностики зависят не только от правильного исследования материала, но и - в не меньшей степени - от соблюдения всех основных правил его забора. Нарушение правил забора, получение непрезентативных клинических образцов, неправильная и несвоевременная их доставка в лабораторию, - все это снижает достоверность результатов бактериологических исследований, ведет к неверно полученным результатам, что в конечном итоге может нанести вред больному.
Материал для исследования определяется клинической картины заболевания. Учитывается локализация возбудителя на данном этапе патогенеза: - материал по возможности берется непосредственно из очага инфекции;
- если очаг локализации не ясен, но отмечается резкий подъем температуры, берут на исследование кровь;
- материал надо брать до начала лечения антибиотиками и исключить возможность попадания в него антимикробных препаратов;
- взятие материала необходимо проводить в асептических условиях, строго соблюдая меры безопасности при работе с микробиологическим материалом;
- после забора необходимо в кратчайшие сроки доставить исследуемый материал в лабораторию, оберегая его от воздействия света, тепла, холода, механических повреждений, используя для доставки специальные контейнеры.
Оптимальным является первичный посев в месте забора материала
Срок доставки материала в лабораторию не должен превышать двух часов: - необходимо учитывать, что при длительном хранении материала, происходит гибель наиболее требовательных к определенному составу среды и температурному режиму видов микроорганизмов и размножение менее требовательных и медленно растущих видов, что приводит к нарушению количественного соотношения возбудителя и дезориентирует врача-микробиолога при интерпретации результатов;
- при исследовании на анаэробы биологический материал необходимо поместить в анаэробные условия. Для жидких образцов (кровь, гной, экссудат, жидкости из стерильных полостей) используют специальные флаконы с жидкой питательной средой, заполненные газовой смесью определенного состава. В них уколом иглы через плотно прилегающую крышку вносят материал. Собранный материал доставляют в лабораторию и исследуют в максимально сжатые сроки;
- материал забирают в достаточном количестве, которое обеспечивало бы необходимый для исследования объем. К исследуемому клиническому материалу, направленному в лабораторию прилагается сопроводительный документ, в котором указывается Ф.И.О больного, время забора материала, предполагаемый диагноз.
12
2.1. Требования, предъявляемые к забору, хранению и транспортировке крови для бактериологического исследования
Забор материала: - кровь берут из локтевой вены после тщательной обработки кожи на месте прокола. Для забора используют стерильный вакуумный шприц;
- при заборе крови медперсоналу необходимо соблюдать меры защиты, предусмотренные правилами работы с контагиозным материалом.
Обработка места венопункции.
Кожу тщательно очищают 70% этанолом, протирают тампоном, смоченным в йодном растворе, круговыми движениями от центра к периферии и дают высохнуть. Прокалывают вену на участке забора (строго в стерильных перчатках). После проведения венопункции остатки йода на коже удаляют спиртом.
1. При лихорадке неясного происхождения кровь исследуют 2 раза в течение часа, потом через 2 часа и 36 часов.
2. При остро возникшем септическом состоянии исследуют 2-3 образца крови с интервалами в 30 минут, в период подъема температуры. При подострым течении сепсиса кровь исследуют в 1-й день троекратно с интервалом 15-20 минут, через 24 часа проводят еще 3 исследования.
3. Важнейшим условием является отсутствие антибиотикотерапии. Если же лечение антибиотиками проводилось в предшествующие 1-2 недели кровь, исследуют два раза в сутки в течение 3 дней.
4. Объем венозной крови при венопункции у детей 3-5 мл, у взрослых 10-30 мл (в зависимости от веса пациента).
5. Непосредственно перед посевом крови пробку флакона дезинфицируют этиловым спиртом и настойкой йода, после чего прокалывают иглой шприца и производят посев крови. Флаконы маркируют и до транспортировки в лабораторию содержат в термостате или при комнатной температуре (не в холодильнике). Возможен забор крови в шприц с иголкой. В шприц набирают 10-15 мл крови, перемешивают ее с гепарином осторожным покачиванием (иглу не снимают) и отправляют в лабораторию.
6. В случае подозрения на катетер-ассоциированную инфекцию используют сосудистый катетер. Стерильно отрезают его дистальный конец длиной 5 см, помещают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию.
Хранение - не более 2 часов при комнатной температуре. Транспортировка. Используются стерильные транспортировочные емкости со средой, содержащей нейтрализаторы антибиотиков.
2.2 Требования, предъявляемые к забору, хранению и транспортировке ликвора для бактериологического исследования
Забор материала.
Взятие материала производят при люмбальной пункции. Ее проводит врач до начала антибиотикотерапии. Место пункции обрабатывают йодсодержащим антисептиком и этиловым спиртом. Для забора используют иглу с мандреном, которую вводят между L3-L4 или L5-S1 пояснично-крестцовыми позвонками.
13
Достигнув субарахноидального пространства, удаляют мандрен и ликвор вытекает из иглы под давлением.
Ликвор собирают в стерильную пробирку с герметично закрывающейся крышкой. Обычно материал собирают в три пробирки для микробиологического, клинического и биохимического анализа.
При подозрении на туберкулезную или грибковую инфекцию у взрослых берут не менее 10 мл исследуемого материала.
Доtrialенный в лабораторию образец СМЖ первоначально центрифугируют, используя осадок для приготовления мазка и посева.
Хранение
Собранный ликвор необходимо срочно доставить в лабораторию. Сохранить его можно при 370С не более 15 мин, избегая охлаждения (так как менингококки гибнут при других температурах).
Транспортировка: - в стерильных одноразовых пробирках с завинчивающейся пробкой; - в щприце с иглой, воткнутой в стерильную резиновую пробку;
- в пробирке с тиогликолевой средой, закрытой стерильной резиновой пробкой;
- в транспортировочной емкости для сохранения анаэробов.
2.3. Требования, предъявляемые к забору материала из стерильных в норме локусов для проведения бактериологического исследования
Забор материала.
Забор перикардиальной жидкости следует проводить следующим образом. Кожу в месте пункции предварительно обрабатывают йодом (или йод-спирт) в течение 1 минуты с помощью ватного тампона, используя концентрические движения от места пункции к периферии. Непосредственно перед проведением пункции кожу необходимо обработать 70% спиртом. Применяют стерильную иглу и стерильный шприц, которым забирают жидкость в количестве 5 мл. Если транспортировка происходит немедленно, пробы доставляют непосредственно в шприце, предварительно удалив иглу и надев на наконечник шприца стерильный колпачок. Если нет возможности немедленно транспортировать материал, используют специальные герметические транспортные контейнеры.
Исследование синовиального выпота позволяет дифференцировать воспалительные и дегенеративные процессы суставов и имеет значение для диагностики этиологии артрита. Получить синовиальный выпот удается, главным образом, из полости коленного сустава путем пункции его медиального верхнего заворота. Реже удается получить синовиальный выпот из других суставов: плечевого, тазобедренного, лучезапястного. Пункцию полости сустава проводят до начала антибиотикотерапии со строгим соблюдением асептики и антисептики.
Синовиальный выпот доставляют в лабораторию в течение 10-15 минут после забора. Допускается ее хранение при 4 0 С в течение 24 часов.
14
Полученный суставной выпот помещают в стерильную пробирку с 5% кровяным агаром; кожу выбранного участка тщательно обрабатывают йодсодержащим препаратом; делают прокол кожи иглой и забирают не менее 1 мл материала (возможно хирургическим путем).
Лаважные воды (промывные воды из желудка) отбирают рано утром, обязательно до еды. Для забора вводят зонд через нос в желудок и вводят 25-30 мл стерильной дистиллированной воды.
Хранение
Хранить материал можно не более 15 минут при комнатной температуре до начала исследования. В случае хранения материал более 1 часа его следует нейтрализовать гидрокорбанатом натрия.
Транспортировка: - в стерильной одноразовой емкости с завинчивающейся крышкой; - в закрытом шприце без иглы или с иглой;
- необходимо использовать транспортное устройство.
2.4 Требования, предъявляемые к забору биоптатов для проведения бактериологического исследования
Забор материала.
Забор материала проводят в ходе хирургического вмешательства или биопсии; для увлажнения ткани добавляют несколько капель стерильного физиологического раствора.
Хранение: - если ткань забрали хирургическим путем, то ее надо сохранить при -70 0 С для дальнейшего исследования. Объем исследуемого образца для количественного анализа может быть не более 1 см 3;
- биоптаты для обнаружения Helicobacter. pylori отбирается при эндоскопическом исследовании, помещается в стерильные пробирки с транспортной средой. Их можно сохранять не более 1 часа при комнатной температуре.
Транспортировка
Для транспортировки используют анаэробное транспортное устройство или стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой.
2.5.Требования к забору, хранению и транспортировке мокроты для проведения бактериологического исследования
Забор материала.
Перед забором утренней порции мокроты больной должен прополоскать рот кипяченой водой или слабым раствором антисептика, почистить зубы. Мокроту собирают в стерильную банку с бусами для проведения гомогенизации материала. Перед посевом мокроту тщательно растирают в ступке. В стерильную банку с бусами помещают 1 мл мокроты, добавляют туда 9 мл пептонной воды или пептонного бульона. Смесь тщательно встряхивают в
15 течение нескольких минут, получают гомогенат, из которого готовят последовательные десятикратные разведения.
При заборе материала из глубины бронхов используют защtrialые щеточки, что предохраняет материал от контаминации флорой верхних дыхательных путей.
При исследовании трахеобронхиального содержимого при заборе материала используют стерильный шприц, который вводят в трахею. Для этого вводят 10 мл стерильного физиологического раствора, вызывая рефлекс кашля, откашливаемый смыв помещают в стерильную посуду.
Хранение - не более 2 часов при комнатной температуре. Пробу хранят в холодильнике при 4 0С не более 2-3 часов, если исследование не может быть начато в течение 4 часов.
Транспортировка
Используют стерильную одноразовую емкость с завинчивающейся крышкой (для сбора мокроты).
2.6. Требования к забору, хранению и транспортировке гнойного отделяемого для проведения бактериологического исследования
Забор материала.
Взятие материала проводят с помощьюстерильного тампона, чаще всего во время операции или перевязки. Тщательно обрабатывают поверхность вокруг раны ватным тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом, или любым другим антисептиком. При заборе используют круговые вращательные движения от центра к периферии пораженного участка, во время забора материала не касаются тканей, окружающих рану, чтобы не забрать дополнительную микрофлору.
Поверхность язвы дезинфицируют, верхний слой удаляют, делают соскоб со дна язвы; если имеется гнойный экссудат, его собирают шприцом или стерильным тампоном; гнойное содержимое из раны после укуса, собирают шприцом после дренирования инфицированной раны.
При заборе материала, взятого во время оперативного вмешательства, можно направить на исследование содержимое абсцесса.
Аспират из глубины ткани получают с помощью стерильного шприца. Хранение - не более 2 часов при комнатной температуре. Транспортировка: - проводится в стерильной транспортировочной емкости со средой для анаэробов;
- в шприце без иглы, закрытым стерильной резиновой пробкой;
- в шприце с иглой, обработанной 70% спиртом и воткнутой в стерильную резиновую пробку;
- используют одноразовый зонд-тампон, вмонтированный в стерильную сухую пробирку (тубсер) или емкость транспортировочную со стерильной специальной средой.
16
2.7. Требования к забору, хранению и транспортировке желчи для проведения бактериологического исследования
Забор материала: - желчь забирают при зондировании в процедурном кабинете, проведенным натощак и помещают в три чистые пробирки. Для исследования в отдельные пробирки забирают три фракции (порции) А, В, С желчи.
- порция А - дуоденальное содержимое; порция В - пузырная желчь; порция С-желчь из желчных протоков.
Хранение - не более 2 часов при комнатной температуре. Транспортировка
Полученные фракции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 часов от момента взятия. Пробирки с желчью во время транспортировки необходимо держать строго в вертикальном положении и следуют обеспечить температурный режим - 370С.
2.8. Требования к забору, хранению и транспортировке мочи для проведения бактериологического исследования
Забор материала: - забор мочи для бактериологического исследования проводят до начала антибиотикотерапии;
- исследуют среднюю порцию утренней свободно-выпущенной мочи;
- мочу собирают в стерильные емкости, нельзя собирать мочу из мочеприемника, судна;
- перед забором мочи необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов с мылом и кипяченой водой, чтобы избежать контаминации при мочеиспускании нормальной микрофлорой промежности посев мочи проводят не позже двух часов после взятия материала или в течение 8 часов, при условии ее хранения в холодильнике. Если время не выдержано, то лучше анализ повторить;
- при подозрении на туберкулез почек исследование мочи проводят в течение трех последовательных дней;
- катетеризацию мочевого пузыря следует проводить в случае необходимости, так как эта процедура связана с риском инфицирования мочевых путей;
- для разграничения воспалительного процесса в почках и мочевом пузыре мочевой пузырь опорожняют и вводят в него 50 мл раствора содержащего неомицин и полимиксин. Через 10 минут берут пробу мочи для исследования.
При локализации процесса в мочевом пузыре моча остается стерильной, при инфекции в почках отмечается бактериоурия.
При заборе мочи с использованием катетера, необходимо: - пережать дренажную трубку на 10 мм ниже отверстия уретры; - протереть трубку спиртовым раствором и ввести иглу в трубку; - набрать 3-4 мл мочи;
- снять зажим с катетера;
17
- доставить мочу в лабораторию в течение 2 часов, если она неохлажденная, и в течение 6 часов, если она охлажденная;
- при подозрении на анаэробную инфекцию мочу забирают при проведении надлобковой пункции, которая считается «золотым стандартом» в случае сомнительных результатов бактериологического исследования. При этом необходимо пунктировать мочевой пузырь через нижнюю абдоминальную стенку, используя стерильную иглу и шприц. Надлобковые аспираты показаны больным с неясным числом колоний и клиническими проявлениями инфекции мочевого тракта.
Забор средней порции мочи: - у женщин необходимо вымыть наружные половые органы мылом или протереть марлевым тампоном смоченным повидон-йодом. Нужно использовать 4 тампона, проводя каждым тампоном один раз спереди назад. Затем обмыть наружные гениталии и участок вокруг отверстия уретры стерильным, смоченным стерильной водой марлевым тампоном;
- у мужчин необходимо обмыть отверстие уретры мылом и водой, помыть половой член, отвести крайнюю плоть.
При разведенных половых губах или отведенной крайней плоти выпустить немного мочи, приостановить мочеиспускание и собрать в контейнер 20-50 мл мочи.
Для забора мочи у новорожденных и детей следует дать им выпить воды или другой жидкости. Чисто вымыть наружные половые органы ребенка, усадить его на колени матери или медицинской сестры, которая соберет мочу ребенка в стерильную емкость. Контейнер с исследуемым материалом закрывают крышкой и доставляют в лабораторию.
Хранение: - без консерванта не более 2 часов при комнатной температуре; - с консервантом не более 24 часов при комнатной температуре.
Транспортировка
Используется стерильная одноразовая емкость для сбора мочи с завинчивающейся крышкой или стерильная одноразовая пробирка с крышкой.
2.9.Требования к забору, хранению и транспортировке фекалий для провtrialя бактериологического исслеtrialия
Забор материала: - фекалии собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики. При естественной дефекации сбор проводят с пеленок или из горшка стерильным шпателем, вмонтированным в ватную пробку пробирки;
- при профилактическом обследовании здоровых людей на тифо-паратифозное носительство, обследуемому необходимо давать за 3 часа до сбора материала 25-30 г сернокислой магнезии в стакане воды, которая является желчегонным и слабительным;
- забор материала проводят при появлении первых признаков заболевания, до начала лечения антибиотиками;
18
- при выделении Clostridium difficile жидкие мягкие фекалии забирают в чистый сухой контейнер с широким горлом не менее 5 мл. Сохранять материал можно не более 1 часа при комнатной температуре, до 24 часов при 4 0С;
- у больных с частым жидким стулом материал забирают не менее 5 раз в сутки. Нельзя замораживать материал, так как это приводит к потере активности цитотоксина.
Забор фекалий можно проводить ректальным тампоном (материал от детей) для этого тампон вводят за пределы анального сфинктра и аккуратно вращая, забирают материал из анальных крип.
Хранение
Сохранять материал на транспортном тампоне следует не более 2 часов. В лабораторию он должен быть доставлен не позже 2 часов после взятия, в противном случае его необходимо сохранять в холодильнике. При невозможности немедленного посева собранный материал помещают в пробирки с консервирующим раствором.
Транспортировка должна проводиться с соблюдением необходимых правил осторожности - в биксах, пеналах в течение часа, двух часов. Если такой возможности нет, то фекалии необходимо перенести в поддерживающую среду Кэрри-Блейера, желательно не держать более 2 часов.
2.2. Требования, предъявляемые к забору материала при различных бактериальных инфекциях
2.2.1. Забор материала при бактериальных инфекциях глаз Забор материала: - кератиты - забор производят платиновой петлей или тампоном (после обезболивания);
- конъюнктивиты - забор проводят петлей, шпателем, тампоном. Берут соскобы с конъюнктивы и переносят на предметное стекло и микроскопируют;
- дакриоциститы и дакриоадениты - петлей или тампоном из язвочек у края ресниц, после удаления сухих гнойных корочек, а также выдергивают несколько ресниц;
- инфекции века - корочки удаляют пинцетом и забирают материал из язвочек у основания ресниц;
- инфекции слезных мешков - выделяемый при массаже секрет берут пипеткой или стерильным ватным тампоном.
2.2.2. Забор материала при бактериальных инфекциях уха Забор материала: - при спонтанном гноеистечении после очистки наружного слухового прохода стерильным ватным тампоном забирают гнойное отделяемое;
- если барабанная перепонка не повреждена, то очищают наружный слуховой проход слабым раствором детергента, после прокола барабанной перепонки шприцем отбирают жидкость и помещают ее в стерильный контейнер или отправляют в лабораторию в шприце или с защитным колпачком;
19
- содержимое барабанной полости получают при тимпанопункции или парацентезе;
- при воспалении наружного уха материал из очага берут стерильным ватным тампоном. При этом кожу обрабатывают 70% этиловым спиртом и промывают стерильным изотоническим раствором хлорида натрия.
2.2.3. Забор материала при бактериальных инфекциях кожи
- фурункулез: для исследования желательно взять стерильно удаленный «стержень» фурункула;
- карбункулез: берут гной (содержимое карбункула), при септическом состоянии - кровь;
- абсцесс: перед забором необходимо удалить наружный экссудат тщательным протиранием салфеткой или тампоном со стерильным ИХН (физиологическим раствором) или 70% этанолом. Обычно используют два тампона, одним из них берут материал для посева, а другим - для окрашивания мазка по Граму. Материал для посева консервируют, погружая тампон в среду Стюарта;
- вскрытый абсцесс: материал берут методом аспирации или тампоном из глубины очага поражения на границе со здоровыми тканями;
- закрытый абсцесс: необходимо провести аспирацию содержимого через иглу и в асептических условиях перенести материал в анаэробное транспортное устройство;
- флегмона: перед забором необходимо для удаления поверхностей микрофлоры протереть место забора материала тампоном или салфеткой со стерильным ИХН или 70 % этанолом. Аспирацию материала необходимо проводить шприцем с иглой из области наибольшего воспаления, лучше - из центра. Аспират внести непосредственно в пробирку с завинчивающейся крышкой. Дальнейшее исследование желательно провести не позднее чем через 15 минут.
2.2.4. Забор материала при бактериальных инфекциях ЦНС Забор материала: - материал из абсцессов мозга аспирируют и отправляют в лабораторию в емкости с анаэробной средой;
- биопсийный материал получают во время операции, помещают в емкость с анаэробной средой или в стеклянную пробирку с тиогликолевой средой, закрытую стерильной резиновой пробкой.
2.2.5. Забор материала при бактериальных инфекциях ротовой полости Забор материала: - забор материала необходимо проводить натощак или через 3-4 часа после еды;
- перед забором пробы больной обязательно должен прополоскать рот кипяченой водой. Поверхность десен и зубов следует специально тщательно обтереть стерильным ватным тампоном;
20
- при заборе зубного налета во избежание контаминации изолируют десну стерильным ватным валиком. Налет забирают стерильным инструментом, служащим для кюретажа, осторожно чтобы не повредить эмаль. С инструмента материал для исследования снимают стерильным ватным шариком, который помещают в питательную среду;
- дентин исследуют после тщательнойочистки кариозной полости. Пробы берут стерильным тонким ватным тампоном или турундами на корневых иглах, либо плотно скрученными из ваты шариком, диаметром 2-5 мм;
- при абсцессах и флегмонах ротовой полости исследуют материал, полученный со стороны полости рта. Соблюдают меры, предупреждающие контаминацию исследуемого материала: ограничение операционного поля от слюны, обработка слизистой оболочки и кожи спиртом и эфиром.
2.2.6. Забор материала при бактериальных инфекциях желудочно-кишечного тракта
Забор материала
Из пищевода и желудка мат
Вывод
1. Если на первом этапе образовался комплекс АГ-АТ, то на нем адсорбируется комплемент. И при добавлении гемолитической системы-гемолиза не происходит, так как комплемента в свободном состоянии не осталось. Все компоненты реакции берутся в строго определенных рабочих дозах.
2. Если в исследуемой сыворотке АГ и АТ не объединились (комплекс не образовался), то комплемент остался в свободном состоянии и он адсорбируется на комплексе гемолитической системы. Визуально это проявляется в лизисе эритроцитов и образовании « лаковой» крови.
Перед постановкой РСК все компоненты, участвующие в реакции титруют.
Титром гемолитической сыворотки считают ее наибольшее разведение, которое вызывает полный гемолиз эритроцитов в течение 1 часа при 37 0С.
Рабочая доза гемолитической сыворотки равна тройному ее титру.
Титр комплемент - это наименьшее его количество, которое вызывает полный гемолиз эритроцитов.
Рабочая доза комплемента - в основном опыте РСК (в объеме 0,5мл) должна быть выше титра на 20-30%.
Титр антигена - это минимальная доза, не вызывающая задержку гемолиза.
Для РСК используют рабочую дозу АГ=1/2 ее титра.
3.4.4. Реакции иммунитета с использованием метки
Реакция иммунофлюоресценции
Реакция основана на использовании флюорохромов, химически связанных с АТ. При этом меченные люминесцентной меткой АТ вступают во взаимодействие с корпускулярным АГ. Образовавшиеся специфические комплексы обнаруживают по интенсивному свечению, регистрируемому с помощью люминесцентного микроскопа. Существуют разновидности этой реакции. При постановке прямой РИФ используют противомикробные флюоресцирующие АТ то есть против возбудителя.
Непрямая РИФ ставится в два этапа. На первом этапе используют обычные антимикробные сыворотки. На втором, образовавшиеся на первом этапе комплексы АГ-АТ выявляют с помощью люминесцентной сыворотки, которая содержит меченные АТ против Ig того вида животного, сыворотка которого была использована на первом этапе реакции.
35
Иммуноферментный анализ
Метод основан на использовании меченных ферментом сывороток. Индикация образовавшихся комплексов проводится по химическим реакциям между ферментом и субстратом, сопровождающихся изменением цвета. Интенсивность окраски хромогена соответствует количеству образовавшихся комплексов АГ-меченные ферментом АТ. В качестве фермента чаще всего используют пероксидазу, щелочную фосфатазу. Для проведения анализа используют твердофазовый носитель с сорбированным АГ или АТ. Реакция может ставиться для обнаружения как АГ так и АТ.
Основные этапы реакции по обнаружению АТ. 1. Сорбция известного АГ в лунке планшета.
В основе этого метода лежит использование АТ, меченных радиоактивной меткой. Материал, в котором ищут неизвестный АГ, обрабатывают такой сывороткой. Если в исследуемом материале есть соответствующий АГ, образуется комплекс АГ-АТ, обладающий радиоактивностью. Ее легко выявить с помощью счетчика Гейгера. Если соответствующих АГ в исследуемом материале нет, то меченные радиоактивной меткой АТ не связываются и легко удаляются на этапе промывания. Как и реакция иммунофлюоресценции радиоиммунный анализ может быть проведен в прямом и непрямом вариантах для обнаружения АГ
3.5. Молекулярно-генетические методы
ДНК-гибридизация Различают две методики гибридизации: 36
1) гибридизация, проводимая в растворе;
2) гибридизация, проводимая на твердой поверхности (блот-гибридизация).
Гибридизация в растворе
При реализации этого метода искомая нуклеиновая кислота и зонд взаимодействуют в водной реакционной смеси, что повышает скорость процесса гибридизации.
Метод ДНК-гибридизации основан на способности денатурированной одно-цепочечной ДНК достраивать гомологичную цепь в бесклеточной системе. В качестве материала для второй цепи используют ДНК зонды (коммерческие фрагменты молекулы известной ДНК, гомологичные фрагментам искомой ДНК возбудителя меченные радиоактивным изотопом или ферментом).
При наличии в исследуемом материале гомологичных участков ДНК, по закону комплементарности, ДНК-зонд взаимодействует с этим материалом.
Учет результата проводят по уровню радиоактивности или при добавлении к пробе субстрата, который соответствует используемому в зонде ферменту. Образование специфического комплекса субстрат-фермент означает, что в исследуемом материале есть ДНК соответствующая ДНК - зонду.
Гибридизация на твердом носителе (блот - гибридизация)
Блот-гибридизация основана на ДНК - гибридизации зонда на твердой поверхности, которой является полимерный мембранный фильтр.
Основные этапы исследования: - исследуемый образец обрабатывают ультразвуком для получения коротких фрагментов, находящихся в нем ДНК;
- проводят денатурацию нуклеиновой кислоты (НК);
- денатурированные НК наносят на мембранный фильтр и фиксируют;
- предварительную гибридизацию проводят со специальным буфером при 650С в течение 4 часов;
- добавляют гибридизационный буфер, который содержит денатурированный зонд и проводят гибридизацию при 650С в течение 16 часов.
«Сэндвич»-гибридизация
Этот метод предполагает использование двух видов ДНК-зондов, которые гомологичны различным участкам искомой нуклеиновой кислоты. Чтобы связать искомую нуклеиновую кислоту, присутствующую в исследуемом образце, один зонд фиксируют на мембране. После окончания процесса гибридизации мембрану отмывают от исследуемого материала и добавляют раствор, который содержит второй зонд, несущий метку. После этого процесс гибридизации повторяют, при этом меченый зонд взаимодействует с искомым участком нуклеиновой кислоты. Окончательная детекция проводится в зависимости от характера метки - ферментно-гибридизационные, флюоресцентные, хемилюминесцентные и т.д.
37
Гибридизация in situ
Процесс гибридизации проводят непосредственно на срезе или в мазке с использованием зондов. Основу метода составляет прtrial твердофазной гибридизации или гибридизации в растворе. Зонд, который используется в реакции, содержит флюоресцирующую метку. После окончания процесса гибридизации связавшиеся молекулы в исследуемом мазке или срезе выявляют в флюоtrialнтном микроскопе.
Метод позволяет проводить количественный анализ.
Полимеразная цепная реакция
Принцип метода основан на естественной репликации ДНК, которая включает денатурацию спирали ДНК, расхождение нитей и комплементарный синтез новых нитей ДНК. ПЦР обеспечивает амплификацию фрагментов генома и быстрое накопление определенной последовательности ДНК. В результате получают большое количество ДНК, которое достаточно для проведения анализа различными методами детекции.
Для реализации реакции используют набор праймеров-фрагментов ДНК, которые являются маркерами данного возбудителя. При добавлении такого праймера к пробе исследуемого материала, содержащей денатурированную одноцепочечную ДНК возбудителя, происходит их соединение с комплементарным участком ДНК. Образовавшиеся двунитевые фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации и так повторяется много раз, поэтому реакция носит цепной характер. За 2-3 часа происходит 30-40 циклов амплификации, что приводит к образованию большого количества соответствующих копий нуклеотидных последовательностей, которое можно зарегистрировать.
Компоненты реакции: 1 .Праймеры-олигонуклеотиды, которые состоят из 15-30 нуклеотидов, комплиментарных участкам на идентифицируемой матричной ДНК.
2. Смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов, которые являются строительным материалом, используемым Tag - полимеразой для синтеза второй цепи ДНК.
3. Tag -полимераза обладает ДНК - полимеразной активностью.
4. Буферный раствор, катализатор фермента Tag - ДНК- полимеразы.
5. Исследуемый образец - препарат, который служит мишенью для последующей амплификации.
ДНК - чипы
Технология ДНК чипов основана на гибридизации нуклеотидной последовательности исследуемого материала с известными ДНК последовательностями, расположенными в определенном порядке, иммобилизованными на поверхности стекла или кремня. Результат реакции детектируется по флюоресценции зонда, предварительно меченного флюорохромом и гибридизированного с одной из иммобилизированных проб.
38
Биочип-матрица, состоит из ячеек. В каждой ячейке закреплен олигонуклеотид (последовательность из нескольких нуклеиновых кислот). Каждый нуклеотид имеет одинаковую длину и отличается от другого последовательностью аминокислот.
Исследуемый образец наносят на все ячейки чипа, а затем через некоторое время сливают. Если имеется нуклеотид комплементарный закрепленному в ячейке, то между ними образуется связь и после промывания они не удаляются. Затем образец помещают в флюоресцентный микроскоп, который регистрирует результат образования комплекса по световому сигналу. Светящиеся ячейки кодируют олигонуклеотиды исходной пробы.
Таким образом, зная нуклеотиды, которые были изначально помещены в данной ячейке, можно сделать вывод о составе фрагмента исследуемой ДНК.
Стафилококки относятся к семейству Micrococcaceae, роду Staphylococcus. Наибольшее клиническое значение имеют: S. aureus, S. epidermidis (эпидермальный стафилококк), S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. lugdunensis, S. schleiferi, S. warneri; коагулазоотрицательные S. epidermidis, S. hyicus, S. saprophyticus, S. hominis, S. warneri, S. lugdunensis, S. simulans, S. auricularis, S capitis, S. cohnii, S. caprae, S. pasteuri, S. xylosus.
Выбор материала для исследования зависит от локализации инфекционного процесса: - гной, раневое отделяемое, кровь, мокрота, моча, пунктат из очагов воспаления, мазки со слизистых оболочек носоглотки, СМЖ;
- при пищевых токсикоинфекциях - рвотные массы, промывные воды желудка, фекалии, продукты питания, употребляемые в пищу, смывы с инструментов, оборудования; воздух, вода.
Основные этапы бактериологического исследования гнойного отделяемого при стафилококковой инфекции
1 день исследования: - при исследовании гнойного отделяемого на первом этапе делают мазки, окрашивают по Граму. При микроскопии в мазке можно обнаружить Гр( ) кокки диаметром 0,5-1,5 мкм. Кокки расположены небольшими гроздьевидными скоплениями;
- проводят первичный посев патологического материала на кровяной, желточно-солевой или молочно-солевой агар. Чашки с культурой помещают в термостат и инкубируют 8-24 часов при 370С. Для выявления пигментообразования чашки с кровяным и желточно-солевым агаром (ЖСА), дополнительно выдерживают на свету при комнатной температуре.
2 день исследования
Просмотр посевов. Изучение культуральных свойств выросшей культуры: - при росте на кровяном агаре можно зарегистрировать гемолитические и непрозрачные негемолитические колонии белого или золотисто - желтого цвета с гладкой поверхностью и ровными краями. Колонии золотистого стафилококка окружены зоной полного гемолиза. Если стафилококки обладают лецитиназой, то при их росте на ЖСА образуются зоны помутнения с радужным венчиком-проявление лецитиназной (лецитовителлазной) активности;
40
- отбор изолированных колоний;
- из колоний готовят мазок, окрашивают по Граму для изучения морфолого-тинкториальных свойств;
- изолированные колонии пересевают на скошенный агар для накопления. Посевы помещают в термостат на 24 часа при 37 0С.
3 день исследования: - просмотр посева и описание культуральных свойств на скошенном агаре; - проверка чистоты выделенной культуры;
- если культура чистая, то делают посев в среды пестрого ряда для изучения биохимических свойств выделенной культуры и ряда дополнительных свойств.
Для этого ставят следующие тесты: - анаэробная ферментация до кислоты: маннита, трегалозы, маннозы, мальтозы, сахарозы;
- определение нитрат редуктазы; продукции ацетоина; PYR-тест, тест на орнитин-декарбоксилазу; определение плазмокоагулазы;
- тест на термостабильную ДНК-азу, тест на щелочную фосфотазу; тест на уреазу;
- тест на устойчивость к полимиксину В.
1. Для выявления плазмокоагулазы суточную культуру стафилококка помещают в 0, 5 мл разведенной 1:5 цитратной кроличьей плазмы. Пробу инкубируют в термостате и через 18 часов после инкубации просматривают. Если после инкубации на дне пробирки обнаруживается студнеобразный сгусток, то это свидетельствует о наличаи у изучаемого штамма плазмокоагулазы.
2. Для определения ДНК-азной активности суточную агаровую культуру стафилококка засевают бляшками на чашку Петри с ДНК содержащим мясопептонным агаром. После инкубируют при 370 С в течение 24 часов. После инкубации на чашку наносят 5 мл 1 N раствора соляной кислоты, которую через 1-2 минуты сливают. Через несколько минут вокруг колоний микробов, которые продуцируют ДНК-азу образуются зоны просветления.
3. Определение фосфатазы: - суточную культуру засевают бляшками на чашку с фенолфталеиновым агаром;
- чашки инкубируют 18-24 часа при температуре 370С; выросшие колонии обрабатывают парами аммиака;
- если колонии окрашиваются в розовый цвет, то это говорит о наличии фосфатазной активности.
4. Определение ацетона: - суточную культуру стафилококка засевают в бульон Кларка; - посевы инкубируют 24 часа при 37 0С;
- после инкубации в пробирки с культурой добавляют 5% спиртовой раствор L-нафтола и 40% раствор NAOH;
- посевы повторно инкубируют 1 час;
41
- учитывают результат. При наличии ацетона среда окрашивается в красный цвет.
5. Лизоцимная активность: - готовят взвесь культуры Micrococcus lysodeicticus (2 млрд. микробных клеток на 1 мл среды). Подвергают кипячению в течение 20 мин и добавляют к расплавленному агару. Перемешивают и разливают в чашки Петри;
- после подсушивания агара его засевают исследуемой культурой. Посев помещают в термостат на 24-48 часов при 370С. Если вокруг колоний образовались зоны просветления, это говорит о наличии лизоцима у культуры;
- определяют чувствительность к антибиотикам.
4 день исследования: - окончательная идентификация до вида проводится по комплексу изученых биологических свойств;
- внутривидовая дифференциация проводится с помощью типовых бактериофагов;
- при подозрении на пищевую токсикоинфекцию проводят исследование на продукцию экзотоксина стафилококков. Для определения экзотоксинов стафилококков используют иммуноферментные тест-системы.
Иммунологическая диагностика проводится при определении стафилококкового анатоксина в сыворотке крови при диагностике хронической стафилококковой инфекции. Используется метод РПГА с эритроцитарным стафилококковым диагностикумом.
Стрептококки относятся к семейству Streptococcaceae роду Streptococcus. Наибольшее клиническое значение имеют: Streptococcus pyogenes (пиогенные стрептококки), стрептококки группы В - Streptococcus agalactiae (?-гемолитические стрептококки групп С и G, стрептококки группы Д
( Streptococcus bovis) и пневмококки (Streptococcus pneumoniae). Стрептококки группы Д чаще вызывают эндокардиты, менингиты, а так же некоторые «зеленящие стрептококки», вызывающие бактериемии, эндокардиты, глубокие абсцессы печени, мозга. Streptococcus disgalactiae - C, G, S. anginosus - A, C, F, G. зеленящий стрептококк Streptococcus minis, Streptococcus sanguis, Streptococcus salivaricus, Streptococcus mutans, Streptococcus anginosus, Streptococcu bovis.
Материал для исследования
Выбор материала для исследования зависит от локализации инфекционного процесса: гнойное отделяемое, кровь, мокрота, ликвор, отделяемое слизистой оболочки, моча, биоптаты.
42
Основные этапы бактериологического исследования гнойного отделяемого при стрептококковой инфекции
1 день исследования: - при исследовании гнойного отделяемого на первом этапе делают мазки и окрашивают по Граму;
- при микроскопии в мазке можно обнаружить Гр( ) кокки диаметром около 2 мкм, расположенные цепочками, реже парами;
- проводят первичный посев гнойного отделяемого на кровяной агар и в пробирку с сахарным бульоном: а) для выделения стрептококков группы А и В из смеси культур посев делают на кровяной агар с неомицином;
б) для выделения Streptococcus bovis - посев материала делают на желчно-эскулиновый агар;
в) для выделения Streptococcus agalactiae - гнойное отделяемое сеют на селективный бульон с налидиксовой кислотой и гентамицином;
г) в качестве сред обогащения используют бульон для стрептококков и среду для контроля стерильности (СКС);
- после посева чашки помещают в эксикатор с плотно прилегающей крышкой или в анаэростат, на дно которого ставят зажженную свечу. Стрептококки при культивировании в условиях повышенной концентрации СО2 бурно растут. По мере возрастания СО2 в анаэробных условиях свеча гаснет, что создает благоприятные условия для роста стрептококка. Посевы инкубируют при температуре 370С в течение 24 часов.
2 день исследования: - через 24 часа просматривают посев на твердой питательной среде и в сахарном бульоне. Изучают культуральные свойства. На кровяном агаре стрептококки образуют мелкие точечные колонии серовато-белого цвета. В сахарном бульоне отмечается придонно-пристеночный рост.
На кровяных средах образуется зоны гемолиза, по которым стрептококки делят на 3 группы: - ?-гемолитические стрептококки на кровяном агаре дают частичный гемолиз с формированием полупрозрачной с зеленоватым оттенком зоны вокруг колоний, которая образуется в результате превращения гемоглобина в метгемоглобин. Колонии у зеленящих стрептококков мелкие, сероватого цвета с гладкой или шероховатой поверхностью. Такой рост характерен для Streptococcus salivarius, Streptococcus mutans, Streptococcus ovaries;
- ?-гемолитические стрептококки - полное просветление среды вокруг колоний, полный лизис эритроцитов. Колонии слизистые, прозрачные, правильной формы, возможно матовые, шероховатые с приподнятым центром или мелкие, блестящие круглые с ровными краями и влажной поверхностью. Слизистая консистенция у колоний Streptococcus pyogenes (за счет капсулы). Блестящие колонии характерны для Streptococcus agalactiae;
43
- ?-гемолитические стрептококки (негемолитические) - при росте не изменяют питательную среду вокруг колоний. Клинического значения не имеют.
Рост стрептококка на жидкой питательной среде имеет свои осtrialости: - Streptococcus pyogenes: придонно-пристеночный рост, прозtrialя среда;
- Streptococcus bovis, Streptococcus agalactiae вызывают интенсивное помутнение бульона с образованием гомогенного осадка.
На следующем этапе готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. В мазках из выросших колоний характерных для возбудителя длинных цепочек кокков не обнаруживается. Стрептококки располагаются одиночно, парно, короткими цепочками или скоплениями неправильной формы. Подозрительные на стрептококк колонии пересевают на кровяной агар для накопления чистой культуры и ее дальнейшей идентификации.
3 день исследования: - проверка чистоты выделенной культуры. Микроскопия мазка; - постановка тестов для биохимической идентификации: а) определение вида гемолиза на кровяном агаре; б) постановка пробы на каталазу;
в) определение чувствительности к бацитрацину и сульфаниламидам (сульфаметоксазол и триметоприм);
г) постановка САМР-теста (определение белка синергидного гемолиза); д) постановка теста Фогеса-Проскауэра (на образование ацетоина);
е) гидролиз гиппурата натрия;
ж) постановка желчно-эскулинового теста; з) рост в бульоне с 6,5% натрия хлорида;
и) определение наличия PYR (пирролидониламидопептидазы).
Проба на каталазу основана на способности бактерий, имеющих данный фермент, расщеплять перекись водорода с образованием кислорода и воды.
Для постановки теста чистую культуру тампоном или стеклянной палочкой вносят в каплю 3% раствора перекиси водорода на стекле и растирают. В присутствии каталазы перекись водорода разлагается с образованием пузырьков газа.
САМР-тест-стрептококки группы В (Streptococcus agalactiae) вырабатывает протеин (CAMP-фактор), который усиливает лизис эритроцитов при взаимодействии с бета-лизином золотистого стафилококка (белок синергидного гемолиза).
При постановке CAMP - теста чашку с кровяным агаром засевают суточной культурой S . aureus, которая продуцирует ?-лизин. Исследуемую культуру стрептококка засевают перпендикулярно к линии посева стафилококка. Для положительного контроля используют Streptococcus agalactiae, для отрицательного контроля Streptococcus pyogenes. Инкубируют 18 часов при 370С. Если CAMP-тест положительный на месте пересечения посевов стафилококка и Streptococcus agalactiae выявляется зона усиления
44 гемолиза в виде «крыла» бабочки, что говорит о наличии в исследуемом материале Streptococcus agalactiae.
PYR-тест основан на обнаружении фермента пирролидонилариламидазы, который продуцируют большинство стрептококков (Streptococcus pyogenes): - для постановки теста 0,2 мл питательного бульона, который содержит 0,01 % ?-пиролидонил-бета-нафтиламида, засевают исследуемой культурой. Посев инкубируют при 370С в течение 4 часов;
- после инкубации добавляют одну каплю альдегида. Если реакция положительная, то это проявляется ярко-красным окрашиванием.
Желточно-эскулиновый тест используется для дифференциации Streptococcus bovis (гр Д), которые растут на желточно-эскулинновом агаре. При росте на среде образуется темно-коричневые или черные пятна. Для постановки теста изучаемую культуру засевают на агаровую среду, содержащую 40% желчи, 0,1 % эскулина, 0,05% цитрата железа. Посевы инкубируют в течение 24 - 48 часов при температуре 370С.
Гидролиз гиппурата натрия. Метод позволяет дифференцировать стрептококки гр.В, которые способны вызывать гидролиз гиппурата натрия Культуру стрептококка, забирают петлей тщательно размешивают в 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата натрия. Инкубируют в течение 2 часов при 370С, после чего добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в смеси бутанола и ацетона (1:1). Если реакция положительная, то через 10 минут появляется ярко-бордовое окрашивание.
Серологическая диагностика стрептококковой инфекции. Серологическая диагностика основана на: 1) обнаружении полисахаридного АГ клеточной стенки (группоспецифический полисахарид С) в реакциях преципитации, латексагглютинации и др.;
2) определении в крови специфических стрептококковых АТ к стрептолизину О в парных сыворотках. Титры антистрептолизина в норме - 250 международных единиц, при острых и хронических стрептококковых инфекциях они возрастают (AESTO);
3) определение титра антигиалуронидазы (AEHYS) при диагностике активности ревматического процесса. В норме титр не превышает 300 единиц (AEHYS), а у больных ревматизмом повышается до 1000 единиц и выше;
4) использовании реакции коагглютинации для выявления , Streptococcus pyogenes гр А в клиническом материале;
5) ИФА при диагностике стрептококков группы А (Streptococcus pyogenes) в нативном материале.
Пневмококки относятся к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus, виду Streptococcus pneumoniae. Возбудитель является нормальным обитателем верхних дыхательных путей и является основным этиологическим фактором острых пневмоний, менингитов, отитов и синуситов.
45
Материал для исследования
Выбор материала для исследования зависит от локализации инфекционного процесса: кровь, ликвор, плевральная и перикардиальная жидкость, мокрота, биопсийный, бронхоскопический материал, фарингеальные мазки.
Основные этапы бактериологического исследования мокроты при пневмонии пневмококковой этиологии
1 день исследования
- Из мокроты готовят два мазка, один окрашивают по Граму, другой по методу Бурри-Гинса для выявления капсул. При микроскопии можно обнаружить Гр( ) диплококки ланцетовидной формы окруженные капсулой.
Возможна постановка реакции набухания капсулы по Нейфельду. Для этого готовят мазок из исследуемого материала с добавлением капли поливалентной пневмококковой антикапсулярной сыворотки и капли метиленовой сини. Мазок накрывают покровным стеклом и проводят микроскопию. Капсула вокруг клеток пневмококка набухает и увеличивается в размере, что позволяет ее четко увидеть. Этот феномен позволяет отдифференциировать пневмококки от других стрептококков.
Первичный посев проводят на кровяной агар. Инкубируют при 370С в атмосфере с 5-10% СО2 в течение 24 часов.
2 день исследования
После инкубации чашки просматривают, выявляют характерные для пневмококка колонии с зоной L-гемолиза.
Колонии пересевают на чашки с кровяным агаром для накопления чистой культуры.
3 день исследования
Проводят дальнейшее изучение выделенной чистой культуры по феномену лизиса желчью.
Тест лизиса с желчью основан на способности 10% желчи крупного рогатого скота лизировать культуры пневмококка. Для постановки теста на плотную питательную среду, засеянную культурой, наносят каплю желчного бульона и выдерживают 10-15 минут. Если на месте капли через это время клетки уплотняются или исчезают (Streptococcus pneumoniae). Только Streptococcus pyogenes растет.
Тест с оптохином основан на определении чувствительности пневмококка к оптохину. Выделенную чистую культуру засевают на кровяной агар, содержащий до 5 мкг/мл оптохина. Посевы инкубируют при 370С в течении 18-24 часов. После чего учитывают зону задержки роста, которая для Streptococcus pneumoniae должна быть не менее 18 мм и диагностически превышать зону задержки роста ?- стрептококков.
46
Окончательную идентификацию культуры проводят серологическими методами, которые позволяют идентифицировать капсулярный АГ пневмококка с помощью реакции преципитации, латексагглютинации.
Серологическая диагностика.
Для серодиагностики проводят определение уровня антипневмококковых АТ в сыворотке крови больного, используя непрямой вариант метода флюоресцирующих АТ ИФА. При постановке метода флюоресценции в качестве АГ используют аутоштаммы пневмококка, выделенные у больного. Для диагностики пневмококковой инфекции применяют биологический метод. Для его постановки 0,5-1 мл исследуемого материала вводят внутрибрюшинно белым мышам. Через несколько дней (до 5) мышь погибает от сепсиса, ее вскрывают, из сердца проводят забор крови, которую засевают и исследуют.
Менингококки относятся к семейству Neisseriaceae, роду Neisseria, виду N. meningitidis. Возбудитель относится к III группе патогенности. Вызывает эпидемический цереброспинальный менингит, менингококковый назофарингит, менингококковый сепсис.
Материал для исследования
Выбор материала для исследования зависит от локализации инфекционного процесса: - при цереброспинальном менингите - СМЖ; - при менингококковом сепсисе - кровь, - при назофарингите - носоглоточная слизь;
- в остальных случаях - соскоб из геморрагических элементов сыпи, секционный материал.
Основные этапы бактериологического исследования СМЖ при менингококковой инфекции
1 день исследования: - если СМЖ мутная (гнойная), мазки готовят без ее предварительной обработки;
- если СМЖ светлая, ее подвергают центрифугированию (при 3 тыс. об /мин в течение 20 минут) и из осадка готовят мазки, которые окрашивают по Граму. При микроскопии можно увидеть менингококки, имеющие вид диплококков бобовидной формы, возможно окруженных нежной капсулой, расположенных либо внутри лейкоцитов либо свободно;
- СМЖ засевают на две чашки с сывороточным или асцит-агаром. Посевы помещают в термостат при 370С на 24 часа. Надосадочную жидкость используют для постановки реакции преципитации с менингококковой преципитирующей сывороткой для обнаружения АГ менингококка. Одну чашку инкубируют в обычной атмосфере, вторую - при повышенной концентрации СО2 (10-12%);
47
2 день исследования: - изучают характер роста культуры на средах: колонии мелкие, прозрачные, с ровными краями с гладкой поверхностью, слегка выпуклые;
- из типичных для менингококка колоний, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют;
- выросшую культуру засевают на: - одну пробирку с сывороточным агаром при при 370С. - вторую пробирку с сывороточным агаром при 220С.
Эти тесты ставят для дифференциации патогенных менингококков от сапрофитов.
Проводят посев в пробирку с полужидким сывороточным агаром для накопления.
3 день исследования: - просматривают посевы и отмечают рост на сывороточном агаре при 370С и отсутствие роста на сывороточном агаре при 220C;
- постановка тестов для изучения биохимических свойств проводят при посеве культуры на среды пестрого ряда;
- посев чистой культуры на скошенный агар для сохранения.
4 день исследования: - проводят интерпретацию результатов биохимических тестов и на основании результатов комплекса биологических свойств выделенной культуры дают ответ;
- для диагностики генерализованных форм менингококковой инфекции с 3-5 дня болезни проводят серодиагностику - РПГА с парными сыворотками для выявления нарастания титра АТ. Разработана ПЦР для обнаружения менингококковой нуклеиновой кислоты (НК);
- для иммуноиндикации используют реакции иммунофлюоресценции, РСК.
Микробиологическое исследование носоглоточной слизи
1 день исследования.
Носоглоточную слизь засевают на чашку с сывороточным агаром и ристомицином, (на среде с ристомицином Гр( ) кокки не растут).
2 день исследования: - проводят просмотр посевов. Описывают культуральные свойства возбудителей;
- материал из колоний подозрительных на менингококк засевают на чашки с сывороточным агаром для выделения чистой культуры.
3 день исследования: - просматривают посевы предыдущего дня;
48
- ставят реакцию на оксидазу (менингококк оксидазоположителен);
- из оксидазоположительных колоний готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют;
- для изучения биохимических свойств культуру засевают на среды пестрого ряда.
4 день исследования: - проводят учет результатов посева на среды пестрого ряда (биохимическая идентификация);
- по результатам биохимической идентификации проводят серологическую идентификацию. Для этого культуру менингококка типируют с помощью стандартных агглютинирующих сывороток в реакции агглютинации. Выявление АТ проводят в РПГА с парными сыворотками.
Гонококки относятся к семейству Neisseriaceae роду Neisseria, виду N. gonorrhoeae. Относится к III группе патогенности. Вызывает гонорею, бленнорею, реже воспаление слизистых глотки и прямой кишки.
Материал для исследования
Выбор материала зависит от локализации инфекционного процесса.
По показаниям проводят забор соскобов со слизистых различных органов поражения (прямой кишки, глотки), гнойное отделяемое конъюнктивы глаз.
Основные этапы бактериологического исследования гнойного отделяемого при гонококковой инфекции
1 день исследования: - для микроскопии готовят два мазка, фиксируют и окрашивают метиленовым синим и по Граму. При микроскопии можно обнаружить бобовидные Гр(-) диплококки, расположенные внутрилейкоцитарно. Микроскопию используют при острой форме инфекции до применения антибиотикотерапии. Дальнейшую идентификацию культуры проводят, если в мазке гонококки не обнаружены, но можно увидеть другие формы бактерий или атипичные гонококки. Наличие в мазке характерных гонококков позволяет предварительно поставить диагноз гонококковой инфекции;
- проводят посев исследуемого материала на питательную среду: сывороточные среды, среды с добавлением дрожжевого гидролизата, казеина, асцитической жидкости. Для подавления роста сопутствующей флоры в среду добавляют ристомицин, полимиксин. Посев инкубируют при 370С в течение 24-72 часов в атмосфере, которая содержит 20% СО2.
49
2 день исследования: - просмотр посевов и описание культуральных свойств выделенной культуры. Гонококки растут в виде мелких колоний, напоминающих каплю росы, бесцветные, реже желтоватые;
- пересевают на скошенный агар для накопления.
3 день исследования: - описание культуральных свойств культуры при росте на скошенном агаре; - проверка чистоты выделенной культуры (микроскопия);
- если культура чистая, то проводят постановку биохимических тестов: глюкоза, мальтоза, сахароза, фруктоза, маннит;
- определяют потребность в СО2;
- делают посев в среду Пешкина для определения подвижности; - тест на чувствительность к антибиотикам;
- посев на скошенный агар для сохранения культуры.
4 день исследования
Учет результатов биохимических тестов. Окончательная идентификация. При хронической форме гонореи также используют бактериоскопический метод (после проведения метода провокации). Используют метод серодиагностики РСК, методы иммуноиндикации.
В настоящее время в лабораторную практику внедрены тест-системы для ПЦР - диагностики гонококковой инфекции. Широко используется тест мультиплексной ПЦР для выявления Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonass vaginalis.
Возбудитель относится к семейству Enterobacteriaceae, роду Haemophilus, видам Haemophilus influenzae, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus haemolyticus,Haemophilus aprophilus, Haemophilus segnis, Haemophilus ducreyi.
Они вызывают различные оппортунистические инфекции: менингит, воспаление верхних дыхательных путей, бронхит, пневмонию, эмпиему, конъюнктивит, отит, эпиглоттит (Haemophilus influenzae серовар В).
Материал для исследования
Выбор материала для исследования зависит от локализации инфекционного процесса: мокрота, кровь, ликвор, серозная жидкость.
Основные этапы бактериологического исследования СМЖ при гемофильной инфекции
1 день исследования: - проводят центрифугирование СМЖ и осадок засевают на плотные питательные среды с кровью, параллельно делают посев на среду обогащения (жидкая питательная среда Файлдса), среды содержащие Х и V фактор;
- инкубируют при 370С в течение 24 часов.
50
2 день исследования: - просмотр посевов предыдущего дня. Через 24 часа на плотных средах с кровью вырастают мелкие прозрачные колонии. Если посев сделан на шоколадный агар, то можно обнаружить крупные колонии, имеющие мышиный запах;
- из изолированных колоний готовят мазок, окрашивают по Граму. При микроскопии можно обнаружить мелкие Гр(-) палочки с капсулой или бескапсульные (дополнительное окрашивание по методу Бурри-Гинса). Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар для накопления.
3 день исследования: - описывают характер роста на скошенном агаре; - проверяют чистоту выделенной культуры;
- ставят тесты для изучения биохимических свойств на каталазную и оксидазную активность; тест на ферментацию углеводов; тест на гемолитическую активность; порфириновый тест; тест на потребность в Х и Y факторах; тест на расщепление глюкозы, сахарозы, лактозы, маннита.
Для идентификации L-гемолитических стрептококков необходимо ставить тест на чувствительность к желчи, оптохину, на гидролиз эскулина.
Проба на каталазу основана на способности бактерий имеющих данный фермент расщеплять перекись водорода с образованием кислорода и воды. Чистую культуру тампоном или стеклянной палочкой вносят в каплю 3% раствора перекиси водорода на стекле и растирают. В присутствии каталазы перекись водорода разлагается с образованием пузырьков газа.
Порфириновый тест основан на потребности H. influenzae в факторе Х. H. influenzae способна к синтезу аминолевуленовой кислоты. В присутствии этой кислоты в среде Х-независимые гемофилы синтезируют и секретируют порфирины, которые являются промежуточными соединениями биосинтеза гема. Исследуемые бактерии засевают на плотную среду и наносят на поверхность диски, которые пропитаны АЛК. Посевы инкубируют 24 часа при 370 С, после чего посев облучают УФ-лучами. Коричневую флюоресценцию можно наблюдать, если выросшие микроорганизмы Х-независимы.
Состав среды для перв
Список литературы
1. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. МУ 4.2.2039-05. Техника сбора транспортировки биоматериала в микробиологической лаборатории.
2. Практические аспекты современной клинической микробиологии./Л.З. Скала, С.В.Сидоренко, А.Г.Нехорошева, И.Н.Лукин, С.А. Грудинина.- М.: Мир, 2004.-312с.
3. Марри П.Р., Шей И.Р. Клиническая микробиология. Краткое руководство.- М.: Мир, 2006.-425с.
4. Овчииников Ю.М, Гамов В.П. Болезни носа, глотки, гортани и уха: Учебник. - М.: Медицина, 2003.- 320с.
5. Офтальмология. Учебник / Под ред. Е.И. Сидоренко. - М.: ГЭОТАР-МСД, 2002. - 408 с. (Серия XXI век).
6. Покровский В.И., Пак С.Г, Брико Н.И., Данилин Б.К. Инфекционные болезни и эпидемиология /Учебник:-2-е изд., испр.-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004.-816 с.
7. Медицинская лабораторная диагностика /Справочник/ Под ред. проф. Карпищенко.- Санкт-Петербург: Интермедика, 2002.- 600 с.
8. Шендров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание.- М: Изд-во «Грантъ», 2001.- Т 1,2,3.- 288 с.
9. Урология. Учебник для вузов / Под ред. академика РАМН Н.А. Лопаткина.- М.: ГЭОТАРМЕД, 2002.- 520 с.
11. Инфекция и антимикробная терапия //Consilium medicum.- Т. 05/N.-6/2003.
12. Коплак А.В., Махсон Н.Е., Мельникова В.М. Гнойная травматология костей и суставов.-1985.- 385 с.
172
Содержание
Введение..............................................................................................................................................3 1. Бактериологическая лаборатория.................................................................................................7 1.1. Устройство бактериологической лаборатории.....................................................................7 1.2. Требования, предъявляемые к работе бактериологической лаборатории:......................10
2. Основные правила забора, хранения и транспортировки материала для проведения микробиологического исследованиия............................................................................................12
2.1. Требования, предъявляемые к забору, хранению и транспортировке крови для бактериологического исследования ...........................................................................................13 2.2 Требования, предъявляемые к забору, хранению и транспортировке ликвора для бактериологического исследования ...........................................................................................13 2.3. Требования, предъявляемые к забору материала из стерильных.....................................14 в норме локусов для проведения бактериологического исследования...................................14 2.4 Требования, предъявляются к забору биоптатов для проведения бактериологического исследования.................................................................................................................................15 2.5.Требования к забору, хранению и транспортировке мокроты для проведения бактериологического исследования ...........................................................................................15 2.6. Требования к забору, хранению и транспортировке гнойного отделяемого для проведения бактериологического исследования.......................................................................16 2.7. Требования к забору, хранению и транспортировке желчи для проведения бактериологического исследования ...........................................................................................17 2.8 Требования к забору, хранению и транспортировке мочи для проведения бактериологического исследования ...........................................................................................17 2.9.Требования к забору, хранению и транспортировке фекалий...........................................18 для проведения бактериологического исследования................................................................18 2.2. Требования, предъявляемые к забору материала при различных бактериальных инфекциях.....................................................................................................................................19
4.14. Микробиологическая диагностика заболеванией, вызываемых Salmonella typhi , Salmonella paratyphi А и В............................................................................................................61 4.15. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых сальмонеллами...........62
5. Бактериальные поражения органов и систем организма..........................................................64 5.1.Бактериальные поражения глаз............................................................................................64 5.2.Бактериальные поражения уха.............................................................................................68 5.3.Бактериальные поражения кожи.........................................................................................70 5.4. Бактериальные поражения лимфатической системы ........................................................74 5.5. Бактериальные поражения опорно-двигательного аппарата............................................75 5.6. Бактериальные поражения центральной нервной системы (ЦНС)..................................77 5.7. Бактериальные поражения сердечно-сосудистой системы...............................................81 5. 8. Бактериальные поражения крови........................................................................................84 5.9. Бактериальные поражения органов дыхания .....................................................................88 5.10. Бактериальные поражения органов пищеварения ..........................................................97 5.11. Бактериальные поражения органов брюшной полости и брюшины...........................104 5.11. Бактериальные поражения брюшной полости..............................................................104 5.12. Бактериальные поражения мочевыводящих путей (ИМП)...........................................106 5.14. Бактериальные поражения женских половых органов..................................................110 5.15. Бактериаьное поражение молочных желез.....................................................................115
6. Антибактериальные препараты ................................................................................................119 7. Тесты для самоконтроля............................................................................................................125 Приложение 1 .................................................................................................................................130 Бактериологическое исследование крови...............................................................................130 Бактериологическая диагностика катетер-ассоциированных инфекций..............................130 Количественный метод микробиологической диагностики КАИК.....................................131 Бактериологическое исследование СМЖ................................................................................131 Бактериологическое исследование мокроты...........................................................................131
Бактериологическое исследование проводят в первые 4-5 дней от начала заболевания, желательно до начала антибиотикотерапии. Повторное исследование проводят в случае, неэффективности антибактериальной терапии, при затяжном течении пневмонии, при сохранении рентгенологических, клинических и лабораторных данных................................132
Бактериологическое исследование мочи .................................................................................133 Бактериологическое исследование фекалий при подозрении на ОКИ.................................134 Бактериологическое исследование гнойного отделяемого...................................................134 Бактриологическое исследование синовиальной жидкости..................................................135 Приложение 2 .........................................................................Ошибка! Закладка не определена. Универсальные среды для культивирования бактерий..Ошибка! Закладка не определена. Приложение 3 .................................................................................................................................145 Биологическая характеристика отдельных возбудителей......................................................145
Учебное издание
174
Эврика Георгиевна-Авраамовна Донецкая, Николай Иванович Зрячкин
Основы клинической бактериологии
Учебное пособие
Редактор Л.Г. Алехнович
Подписано к печати 18.01.2009 Тираж 100.
410012, Саратов, ул. Б.Казачья, 112, СГМУ Отпечатано в типографии ООО «Ризоп» 410056, Саратов, ул. Шевченко, 2А Обьем 10 печ.л