Специфичность анализа крови, оценка чувствительности животных к бактериям. Оптимизация условий постановки ПЦР-РВ для идентификации возбудителя Pasteurella multocida. Современные средства диагностики и методы ликвидации инфекционных болезней сайгаков.
Аннотация к работе
В связи с этим, целью нашего исследования являлось - оптимизация условий постановки ПЦР-РВ для диагностики возбудителя Pasteurella multocida, который ежегодно вызывает заболевание и гибель сайгаков на территории Республики Казахстан. С целью подбора праймеров для постановки ПЦР в реальном времени, были выбраны 4 гена Pasteurella multocida subsp. multocida str. Сравнительный анализ нуклеотидной последовательности данного гена с международной базой данных показал, что данный ген является высококонсервативным (99-100%) для бактерий рода Pasteurella multocida. После анализа нуклеотидных последовательностей возбудителя Pasteurella на следующем этапе исследований проводили подбор праймеров и зондов для постановки ПЦР в реальном времени. Проведенные исследования по апробации трех специфических праймеров в ПЦР на возбудитель Pasteurella multocida показали, что первая пара праймеров на ген SODA амплифицировала фрагмент ДНК размером 92 п.н., третья пара праймеров на ген RPOB амплифицировала фрагмент ДНК размером 144 п.н. при этом электрофоретический анализ продукта амплификации показывал четкую линию ДНК, а вторая пара праймеров на ген INFB амплифицировала фрагмент ДНК размером 93 п.н., однако электрофоретический анализ продукта амплификации показывал слабую линию ДНК.Для оптимизации постановки ЦПР-РВ выбраны 4 гена Pasteurella multocida - INFB, SODA, RPOB, ATPD, и на эти гены были подобраны праймеры и зонды для постановки ПЦР в реальном времени. В результате были отобраны три пары праймеров на гены - INFB, SODA, RPOB, ATPD. В ходе исследовании с помощью ПЦР тест-системы подобрана одна пара праймеров и зонда - прямой 5"-TTGTTGTTTGATCATCGCATT-3" и обратный 5"-GATGAAAACGGTCAACCAGT-3", 6FAM-TATCGTGTTGAACCCGCTAGGTG-BHQ1 на ген RPOB.