Дослідження виконані в напрямку удосконалення відомих та розробки нових технологій низькотемпературної консервації статевих клітин гусаків, півнів, а також ембріональних клітин курей в облицьованих гранулах та пайєтах. Доказана ефективність використання.
Аннотация к работе
Основні положення дисертації розроблені в лабораторії клітинної інженерії та кріоконсервації генетичних ресурсів Інституту птахівництва УААН при виконанні планових досліджень по розділах: 41.05.01H "Удосконалити методи і прийоми зберігання, використання резервних ліній, місцевих рідкісних порід" (номер державної реєстрації 01870085916) в 1986-1990 рр.; 02.02 "Розробити методи одержання монозиготних близнюків і клонування птиці" (номер державної реєстрації UA01000703P) державної програми України на 1991-1995 рр. "Фундаментальні дослідження"; 01.04.01ф. Вперше розроблені лабораторні експрес-методи, які передбачають використання, як флуорохром, тіазіновий червоний i етідіум бромід або а-нафтіламін та дозволяють з високої точністю (коефіцієнт кореляції r=0,97) визначити запліднюючу здатність сперми півнів за 5-10 хвилин. Розроблені технології дають змогу здійснювати низькотемпературну консервацію сперми гусаків і півнів при забезпеченні її запліднюючої здатності на високому рівні. Розроблені технології передбачають консервацію сперми гусаків, півнів, ембріональних клітин в облицьованому вигляді, що створює ряд істотних переваг порівняно з іншими відомими технологіями. Розроблені експрес-методи визначення життєздатності статевих та ембріональних клітин дають змогу суттєво прискорити проведення пошукових досліджень по їх низькотемпературній консервації.Флуоресцентний метод дозволяє швидко (за 3-10 хвилин) та з високою точністю (коефіцієнт кореляції r=0,93-0,97) оцінювати запліднюючу здатність сперми півнів за станом акросом при визначенні його за допомогою таких флуорохромів, як а-нафтіламин або суміш тіазинового червоного та етідіум броміда. При заморожуванні сперми півнів з лінійною швидкістю спостерігається масове ушкодження акросом сперматозоїдів в трьох температурних зонах (від 0°С до початку кристалізації;-16° --22°С та-80 --90°С), якого можна уникнути шляхом застосування ступінчатого режиму охолодження. Одержання не менше, ніж 30 - 50% життєздатних сперматозоїдів після кріоконсервації та високих показників відтворювання (заплідненість яєць 75-85%, вивід курчат 70-75%) забезпечується при заморожуванні сперми півнів за ступінчастим режимом (спочатку зі швидкістю 3°С/хв до початку кристалізації, а після експозиції на плато кристалізації протягом 1 - 3 хвилин зі швидкістю 30°С/хв до-16 --22°C, 70°С/хв до-80 --90°C з послідуючим занурюванням в рідкий азот), розморожуванні при 40°C та використанні для штучного осіменіння курей в дозі 0,12 мл та з інтервалом один раз в три - чотири доби.