Підвищення вихідної активності ферменту шляхом оптимізації умов культивування продуценту. Вплив речовин різної хімічної природи на біосинтез та активність ферменту. Фізико-хімічні і каталітичні властивості ферментного препарату, специфічність його дії.
Аннотация к работе
НАЦІОНАЛЬНА АКАДЕМІЯ НАУК УКРАЇНИ ІНСТИТУТ МІКРОБІОЛОГІЇ І ВІРУСОЛОГІЇ ІМ. Д.К. ЗАБОЛОТНОГО УДК 577.152.32:577.151.5:582 a-L-РАМНОЗИДАЗА PENICILLIUM COMMUNE 266 03.00.07 - мікробіологія Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук РЗАЄВА ОЛЬГА МИКОЛАЇВНА КИЇВ - 2007 Дисертацією є рукопис. Робота виконана у відділі біохімії мікроорганізмів Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України Науковий керівник: доктор біологічних наук, професор Варбанець Людмила Дмитрівна, Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України, завідувач відділу біохімії мікроорганізмів Офіційні опоненти: доктор біологічних наук, професор, член-кореспондент НАН України Костерін Сергій Олексійович, Інститут біохімії ім. О.В. Паладіна НАН України, завідувач відділом біохімії м’язів доктор біологічних наук, професор Зайченко Олександр Максимович, Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України, завідувач лабораторії вторинних метаболітів мікроміцетів Захист відбудеться 17 жовтня 2007 р. о 1200 годині на засіданні Спеціалізованої вченої ради Д 26.233.01 по захисту докторських дисертацій при Інституті мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України за адресою: Д 03680 МСП, м. Київ, вул. Заболотного, 154. Унікальна специфічність дії і висока каталітична активність, а також все більш широка доступність індивідуальних ферментів спричинила їх широке використання в наукових дослідженнях в галузі молекулярної біології і генетики, а також для вирішення деяких практичних завдань медицини, харчової, мікробіологічної промисловостей, контролі оточуючого середовища. б-L-Рамнозидаза - це фермент, який характеризується специфічністю щодо термінальних б-1,2-, б-1,4- та б-1,6-зв’язаних залишків L-рамнози, яка присутня в природних глікокон’югатах та синтетичних глікозидах. У літературі зустрічаються відомості щодо продуцентів б-L-рамнозидази бактеріального (Sphingomonas sp., Bacteroides JY-6, Pseudomonas paucimobilis, Clostridium stercorarium, Bacillus sp. Gl 1) та грибного (Penicillium, Aspergillus, Mucor, Fusarium) походження. На сьогодні відомо декілька комерційних препаратів б-L-рамнозидази (гесперидиназа Aspergillus niger, нарингіназа Penicillium decumbens), які випускаються в продаж фірмою “Sigma” (USA). В Україні препарати б-L-рамнозидази відсутні. Метою роботи було одержання очищеного препарату б-L-рамнозидази, вивчення його фізико-хімічних та каталітичних властивостей, субстратної специфічності для розробки основ його практичного застосування. Предметом дослідження було вивчення умов біосинтезу ферменту, оптимізація умов культивування P. commune для отримання максимального виходу б-L-рамнозидази, розробка схем виділення і очистки ферменту, вивчення його фізико-хімічних властивостей, деяких каталітичних та кінетичних параметрів, специфічності дії. · Вперше встановлено, що синтетичні похідні порфіринів, комплекси бісцитратогерманієвої кислоти з аспарагіновою кислотою, треоніном та L-глутаміновою кислотою здатні активувати б-L-рамнозидазу 1 і 2 P. commune від 10 до 430 %. · Вперше встановлено, що каталітично активними групами ферментів P. commune, які відповідають за прояв б-L-рамнозидазної активності, є карбоксильна група С-кінцевої амінокислоти (можливо аспарагінової або глутамінової) та імідазольна група гістидину. При визначенні a-L-рамнозидазної та інших глікозидазних активностей (a- і b-глюкозидазної, a- і b-галактозидазної, a- і b-ксилозидазної, a-фукозидазної, a-манозидазної, a- і b-N-ацетилглюкозамінідазної, a- і b-N-ацетилгалактозамінідазної) використовували відповідні синтетичні субстрати: n-нітрофеніл-a-L-рамнопіранозид (“Sigma”, USA), n-нітрофеніл-a- і b-D-глюкопіранозид (“Sigma”, USA), n-нітрофеніл-a- і b-D-ксилопіранозид (“Koch-Light”, UK), n-нітрофеніл-a- і b-D-галактопіранозид (“Sigma”, USA), n-нітрофеніл-a-L-фукопіранозид (“Koch-Light”, UK), n-нітрофеніл-a-D-манопіранозид (“Koch-Light”, UK), n-нітрофеніл-N-ацетил-a- і b-D-глюкозамінід (“Koch-Light”, UK), n-нітрофеніл-N-ацетил-a-D-галактозамінід (“Sigma”, USA), n-нітрофеніл-N-ацетил-b-D-галактозамінід (“Serva”, Germany).