Клиническая характеристика больных системной красной волчанкой и лиц контрольных групп. Изучение антителообразования к аденозиндезаминазе у больных. Иммунологическая и дифференциальная диагностика, определение критерия эффективности проводимой терапии.
Аннотация к работе
Определение антител к АДА и выяснение их влияния на активность этого фермента у больных СКВ как с позиций диагностики активности и формы патологического процесса, изучения отдельных звеньев патогенеза заболевания, так и возможности коррекции, контроля эффективности проводимой терапии представляет собой актуальную задачу. Изучить содержание антител к аденозиндезаминазе в сыворотке крови больных СКВ в зависимости от активности, повреждения, характера течения, клинических особенностей заболевания и показателей качества жизни, связанного со здоровьем. На защиту выносится положение о возможности использования определения антител к аденозиндезаминазе с помощью метода иммуноферментного анализа в качестве дополнительного теста для выделения степени активности, клинических вариантов СКВ, оценки эффективности проводимой терапии, а также для изучения биологических свойств ферментов, аутоантигенов и механизмов взаимодействия антиген-антитело. Методы определения антител к аденозиндезаминазе у больных СКВ иммуноферментным методом внедрены в практику работы муниципального учреждения здравоохранения «Городская клиническая больница №25» г. Антитела к АДА были выявлены у 9 (18,8%) человек из группы сравнения, причем повышенные уровни антител к ферменту определялись у четырех больных РА, у двух больных ССД, у двух больных с системным васкулитом (СВ), у одного больного дерматомиозитом (ДМ) и ни у одного человека с болезнью Шегрена (БШ) (см. рисунок 1).Наряду с этим была выявлена положительная корреляционная связь между активностью АДА в сыворотке крови и наличием инфекционных осложнений у больных СКВ во время стационарного лечения (r = 0,376; p = 0,018). При сравнении групп пациентов с наличием инфекционных осложнений и без таковых, статистически значимые различия (помимо активности АДА, p = 0,008, критерий Манна-Уитни) были выявлены только для уровня С-реактивного белка (p = 0,044) и пиурии (p = 0,003). С целью изучения взаимосвязей лабораторных параметров больных СКВ был проведен корреляционный анализ, позволивший выявить ряд корреляций лабораторных показателей между собой и объединить эти показатели в группы. У больных СКВ АФЛ класса IGG были выявлены у 25 (41,7%), причем 8 человек имели низкий уровень позитивности (от 10 до 25 GPL-U/ml), 13 человек были умеренно позитивными (от 25 до 100 GPL-U/ml) и 4 человека - высокопозитивными (более 100 GPL-U/ml) по данным антителам. Антитела к фосфолипидам класса IGM выявлены у 19 (31,7%) больных СКВ: 12 человек имели низкий уровень позитивности (от 10 до 25 MPL-U/ml), 5 человек были умеренно позитивными (от 10 до 25 MPL-U/ml) и 2 человека - высокопозитивными (более 100 MPL-U/ml) по IGM-АФЛ.При применении иммобилизированных гранулированных магнитоуправляемых препаратов на основе аденозиндезаминазы в модификации иммуноферментного метода лабораторного анализа в сыворотке крови больных СКВ антитела к аденозиндезаминазе выявляются в более высоком уровне и значительно чаще (53,3%), чем в среднем при других аутоиммунных ревматических заболеваниях (18,8%). Антитела к аденозиндезаминазе появляются на ранних стадиях СКВ и их обнаружение может быть использовано для своевременной диагностики заболевания. Уровень антител к аденозиндезаминазе зависит от активности СКВ и не зависит от варианта течения и продолжительности заболевания, что может быть использовано в качестве дополнительного индикатора активности патологического процесса. При использовании в комплексном лечении больных СКВ экстракорпоральных методов наблюдается выраженное, но непродолжительное, снижение уровня антител к аденозиндезаминазе. При определении антител к аденозиндезаминазе в сыворотке крови иммуноферментным методом за норму следует считать показатели в диапазоне от 0,049 Ед до 0,091 Ед; положительными следует считать значения, превышающие 0,112 Ед.
План
Содержание антител к аденозиндезаминазе у различных клинических групп больных системной красной волчанкой
Вывод
1. Разработан и апробирован способ получения иммобилизированной формы аденозиндезаминазы (ЕС 3.5.4.4.). Установлено, что взаимодействие аденозиндезаминазы со специфическими анти телами в условиях in vitro сопровождается определенным снижением ее ферментативной активности (в среднем на 60%).
2. При применении иммобилизированных гранулированных магнитоуправляемых препаратов на основе аденозиндезаминазы в модификации иммуноферментного метода лабораторного анализа в сыворотке крови больных СКВ антитела к аденозиндезаминазе выявляются в более высоком уровне и значительно чаще (53,3%), чем в среднем при других аутоиммунных ревматических заболеваниях (18,8%). У здоровых лиц антитела к аденозиндезаминазе отсутствуют.
3. Антитела к аденозиндезаминазе появляются на ранних стадиях СКВ и их обнаружение может быть использовано для своевременной диагностики заболевания.
4. Уровень антител к аденозиндезаминазе зависит от активности СКВ и не зависит от варианта течения и продолжительности заболевания, что может быть использовано в качестве дополнительного индикатора активности патологического процесса.
5. Наиболее высокие значения антител к аденозиндезаминазе выявлены у больных СКВ с умеренной и высокой степенью активности заболевания, на стадии развернутых клинических проявлений.
6. Применение на стационарном этапе лечения больных системной красной волчанкой иммуносупрессивных препаратов (цитостатиков) приводит к значительному снижению антител к аденозиндезаминазе. При использовании в комплексном лечении больных СКВ экстракорпоральных методов наблюдается выраженное, но непродолжительное, снижение уровня антител к аденозиндезаминазе.
7. Динамика ферментативной активности аденозиндезаминазы и уровня антител к энзиму, наблюдаемая на фоне проводимой терапии, позволяет использовать их в качестве дополнительных критериев эффективности лечения больных СКВ.
Практические рекомендации
1. Полученные иммобилизированные гранулированные магнитоуправляемые препараты на основе аденозиндезаминазы рекомендуется использовать в диагностических целях для выявления специфических антител к энзиму у больных системной красной волчанкой в иммуноферментном методе исследования.
2. При определении антител к аденозиндезаминазе в сыворотке крови иммуноферментным методом за норму следует считать показатели в диапазоне от 0,049 Ед до 0,091 Ед; положительными следует считать значения, превышающие 0,112 Ед.
3. При определении ферментативной активности аденозиндезаминазы следует считать нормальными значения в диапазоне от 6,92 МЕ до 10,42 МЕ. Для СКВ характерно снижение активности аденозиндезаминазы до 6,84±2,54 МЕ. При минимальной активности СКВ значения активности аденозиндезаминазы соответствуют показателям здоровых лиц, для умеренной активности СКВ характерны значения от 4,56 до 8,82 МЕ, для высокой активности СКВ - от 3,22 до 8,92 МЕ.
4. Для уточнения степени активности СКВ рекомендуется дополнительно использовать совместное определение показателей уровня антител к аденозиндезаминазе и активности фермента. При минимальной активности СКВ значения активности аденозиндезаминазы и уровень антител к ферменту соответствуют показателям здоровых лиц, для умеренной активности СКВ характерны значения активности энзима в диапазоне 4,56-8,82 МЕ и значения экстинции в диапазоне 0,056-0,226 Ед, для высокой активности СКВ - в диапазоне 3,22-8,92 МЕ и 0,081-0,237 Ед соответственно.
5. Выявление высокого уровня антител к аденозиндезаминазе у больных СКВ (выше 0,150 Ед) на фоне стойкого снижения активности фермента (ниже 6,37 МЕ) при отсутствии нормализации определяемых показателей в течение 3-4 недель стационарного лечения может свидетельствовать о наличии органных поражений (нейропсихические проявления, развитие цитопенического и антифосфолипидного синдромов) и необходимой коррекции проводимой терапии.
6. В процессе стационарного лечения больных СКВ рекомендуется использовать комплексное определение антител к аденозиндезаминазе (иммуноферментным методом с использованием иммобилизированных антигенных магнитоуправляемых препаратов) и активности фермента (методом Martinek R.G., основанным на калориметрическом определении аммиака с помощью фенолгипохлоритного реактива) в качестве критерия эффективности проводимой терапии. Снижение уровня антител к аденозиндезаминазе коррелирует с клиническим улучшением.
7. Определение антител к аденозиндезаминазе рекомендуется применять для дифференциальной диагностики между СКВ и другими аутоиммунными ревматическими заболеваниями (системной склеродермией, дерматомиозитом, системными васкулитами, болезнью Шегрена, ревматоидным артритом), используя данный тест как самостоятельно, так и совместно с измерением активности аденозин дезаминазы в сыворотке крови.
Список литературы
1. Алехина И.Ю., Грехов Р.А., Салман Расем, Сущук Е.А., Махачев М.А., Александров А.В., Зборовская И.А. Роль аутоантител к каталазе в патогенезе системной красной волчанки // Материалы V национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека», 18-22 сентября 2007 г. - Смоленск, ФГУ «Смоленский ЦНТИ», 2007. - С. 157-160.
2. Александров А.В., Алехина И.Ю., Мнацаканян С.Г., Махачев М.А. Перспективы повышения качества лабораторной диагностики ревматических заболеваний // Материалы II Национального конгресса терапевтов «Новый курс: консолидация усилий по охране здоровья нации», Москва 7-9 ноября 2007 г. - М., Издательство «Бионика», 2007. - С.8.
4. Симакова Е.С., Махачев М.А., Алехина И.Ю., Зборовская И.А. Роль антител к аденозиндезаминазе при системной красной волчанке // Вестник Российского государственного медицинского университета. - 2008, №2(61). - С.53.
5. Алехина И. Ю., Махачев М.А., Александров А.В., Зборовская И.А. Инновации в лабораторной диагностике: Применение иммобилизированных магнитосорбентов при хронических иммуновоспалительных заболеваниях // Научно-практическая ревматология. - 2008, №2 (Приложение). - С.4.
6. Александров А.В., Мнацаканян С.Г., Алехина И.Ю., Махачев М.А., Шилова Л.Н., Зборовская И.А. Определение антител к ксантиноксидазе в диагностике ревматоидного артрита // Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. - 2008, №2. - С.41-44.
7. Александров А.В., Алехина И.Ю., Шилова Л.Н., Маслова-Сорокина Е.В., Махачев М.А., Матасова И.А., Емельянов Н.И. Современные биотехнологии в лабораторной диагностике ревматических заболеваний: иммунологические аспекты поражения сосудов у больных системной красной волчанкой и системной склеродермией // Аллергология и иммунология. - 2008. - Т.9, №3. - С.334.
8. Алехина И.Ю., Махачев М.А., Маслова-Сорокина Е.В., Новикова О.В., Емельянова О.И. Определение антител к ферментам пуринового метаболизма в диагностике неврологической патологии у больных системной красной волчанкой // Материалы III Национального конгресса терапевтов «Новый курс: консолидация усилий по охране здоровья нации», Москва 5-7 ноября 2008 г. - М., Издательство «Бионика», 2008. - С.10-11.
9. Александров А.В., Алехина И.Ю., Махачев М.А., Маслова-Сорокина Е.В., Емельянов Н.Н., Зборовская И.А. Магнитоуправляемые сорбенты на основе иммобилизированных антигенов: новые возможности лабораторной диагностики воспалительных аутоиммунных заболеваний // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины», Чита, 2008. - С.163-164.
10. Мнацаканян С.Г., Александров А.В., Алехина И.Ю., Махачев М.А., Стажаров М.Ю., Емельянов Н.И. Аутоантитела к ксантиноксидазе: иммунологические аспекты изменения пуринового метаболизма при воспалительных ревматических заболеваниях // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXV, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2008. с.73-74.
11. Махачев М.А., Маслова-Сорокина Е.В., Александрова Н.В., Алехина И. Ю., Зборовская И.А. Роль антител к аденозиндезаминазе и ксантиноксидазе в диагностике клинических вариантов системной красной волчанки // Актуальные проблемы современной ревматологии. Сборник научных работ / под ред. Академика РАМН А.Б.Зборовского/. - Вып. XXVI, Волгоград, ООО «Царицынская Полиграфическая компания», 2009. с.46-48.
12. Александрова Н.В., Ткаченко Л.В., Алехина И.Ю., Александров А.В., Махачев М.А., Зборовская И.А. Клинико-диагностическое значение определения антител к аденозиндезаминазе у женщин с привычным невынашиванием беременности // Вестник Российского университета Дружбы народов. Серия Медицина, 2009, №6, с. 304-309.
13. Алехина И.Ю., Махачев М.А., Маслова-Сорокина Е.В., Александрова Н.В., Емельянов Н.И. Клинико-патогенетическая роль антител к аденозиндезаминазе и ксантиноксидазе у больных с системной красной волчанкой с лабораторными признаками антифосфолипидного синдрома // Материалы IX Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении», Санкт-Петербург, 21-22 апреля 2009 г. - Вестник Российской военно-медицинской академии. - 2009, №1(25), Приложение (часть II). - С.586-587.
14. Махачев М.А., Александрова Н.В., Алехина И.Ю., Шилова Л.Н., Новикова О.В., Емельянов Н.И. Использование новых технологий для определения антител к аденозиндезаминазе в лабораторной диагностике аутоиммунных заболеваний // Материалы VII Съезда Союза аллергологов и иммунологов СНГ, Санкт-Петербург, 25-28 апреля 2009 г. - Аллергология и иммунология. - 2009, Т.10, №2. - С.221.
15. Makhachev M.A., Alexandrova N.V., Alekhina I.Y., Zborovskaja I.A. Role of antibodies to adenosine deaminase for diagnostics of clinical variants of systemic lupus erythematosus // Annual European Congress of REUMATOLOGY, EULAR 2009. - Annals of the Rheumatic Diseases. - 2009. - Vol. 68, Supplement №3. - P.729.