Определение условий успешного роллерного органотипического культивирования свободноплавающих срезов, полученных с тканей постнатального мозга и сетчатки глаза крыс. Установление оптимальных сроков культивирования структур постнатального мозга и сетчатки.
Аннотация к работе
Изучение 3D-цитосфер, независимо от методов их культивирования, направлено на получение возможно более полных данных о развитии и патологии клеток в изолированных тканевых системах, максимально соответствующих данным о процессах их развития и патологии in vivo. При изучении структур центральной и периферической нервной системы широко используются методы органотипического культивирования срезов пренатального мозга, спинномозговых и симпатических ганглиев в камерах Максимова, постнатального мозга 7-8-суточных крыс культивируемых на покровных стеклах во вращающихся пробирках (Gahwiller,1981; 1984) и на полупроницаемых поликарбонатных мембранах (Stoppini at al., 1991), которые позволяют изучать условно трехмерные (плоскостные) культуры. Впервые показано, что клетки, формирующие сфероиды, полученные на основе срезов сетчатки и гиппокампа, проявляют наибольшую жизнеспособность и пластические потенции к формированию органоспецифической структуры по сравнению с таковыми из неокортекса. Диссертационная работа изложена на …….страницах, содержит ... рисунка и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 268 цитируемых источника. постнатальный мозг сетчатка органолептический Срезы гиппокампа, неокортекса (НК) и сетчатки переносили во флаконы (V= 50, 25, 15 мл) с питательной средой для культивирования (V= 10, 6, 3 мл соотв.), закрывали силиконовой пробкой, помещали на роллер в инкубатор при температуре 35.5 ОС (рис.1) и культивировали при постоянном вращении (60 об/мин) в течение 10-15суток.Впервые показана возможность использования метода органотипического культивирования для изучения процессов развития и экспериментальной патологии нейронов головного мозга и сетчатки постнатальных и взрослых животных. Преимущество метода роллерного культивирования состоит в возможности одновременного культивирования большого числа фрагментов нервной ткани в идентичных условиях, что обеспечивает статистическую достоверность полученных результатов.
Вывод
1. Впервые показана возможность использования метода органотипического культивирования для изучения процессов развития и экспериментальной патологии нейронов головного мозга и сетчатки постнатальных и взрослых животных.
2. Определены экспериментальные условия, в том числе возраст животных, способы выделения ткани, среды и сроки культивирования, необходимые для выполнения экспериментальных исследований с использованием метода органотипического роллерного культивировании нервной ткани постнатальных и взрослых животных
3. Преимущество метода роллерного культивирования состоит в возможности одновременного культивирования большого числа фрагментов нервной ткани в идентичных условиях, что обеспечивает статистическую достоверность полученных результатов.
4. Показано, что исходно уплощенные срезы ткани головного мозга и сетчатки формируют in vitro сфероиды с трехмерной организацией, характерной для соответствующих отделов ЦНС in vivo.
5. Схранность трехмерной цитоархитектоники в роллерных культурах гиппокампа, неокортекса и сетчатки определяется межнейронными и нейроглиальными отношениями, сформировавшимися к началу культивирования и специфическими для конкретных изученных структур ЦНС.
6. Впервые показано образование новых капилляров (неоангиогенез) в роллерных культурах сетчатки постнатальных и взрослых крыс с помощью гистологических, ультраструктурных и иммуноцитохимических исследований.
7. Показана возможность использования метода роллерного культивирования, как адекватной модели для изучения влияния нейропротекторов при патогистологических изменениях нейронов.
Список литературы
Статьи: Victorov I.V., Lyjin A.A., Aleksandrova O.P. A new method of organotypic brain cultures: free-floating slices of postnatal rat hippocampus. // Brain. Res. Prot. 2001. Vol. 7. P. 30-37.
Александрова О.П., Лыжин А.А., Викторов И.В. Гистогенез гиппокампа и новой коры головного мозга постнатальных крыс в органотипических роллерных культурах свободноплавающих срезов мозга. // Бюлл. экспер. биол. и мед. 2001. № 9. C. 333-337.
Востриков В.М., Коломеец Н.С., Александрова О.П., Викторов И.В., Уранова Н.А., Сухих Г.Т. Органотипические культуры свободноплавающих срезов продолгованого мозга эмбрионов человека. // Морфология. 2003. №4. С. 41-47.
Викторов И.В., Лыжин А.А., Александрова О.П., Фрайер Д., Дирнагль У. Роллерные органотипические культуры сетчатки постнатальных крыс. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2004. Т. 137. №4. С. 476-480.
Александрова О.П., Лыжин А.А., Викторов И.В. Особенности развития сенсомоторной коры 7-8 дневных крыс в роллерных культурах свободноплавающих срезов мозга. // Морфология. 2004. Т. 125. №1. С. 12-15.
Викторов И.В., Александрова О.П., Алексеева Н.Ю., Лыжин А.А. Роллерные органотипические культуры сетчатки постнатальных и взрослых крыс, как экспериментальная модель для изучения ретинопатий. // Морфология. 2004. Т. 125. №1. С. 124-125.
Aleksandrova O.P., Lyzhin A.A., Victorov I.V. Characteristics of the sensomotor cortex in rats aged 7-8 days in roller cultures of free-floating brain slices. // Neurosci. Behav. Phisiol. 2005. V. 35. P. 9-15.
Vostrikov V.M., Kolomeets N.S., Aleksandrova O.P., Viktorov I.V., Uranova N.A., Sukhikh G.T. Organotypic cultures of free-floating slices of human embryo metulla oblongata. // Neurosci. Behav. Physiol. 2005. V. 35. P. 9-15.
Rzeczinski S., Victorov I.V., Lyjin A.A., Aleksandrova O.P., Harms C., Kronenberg G., Freyer D., Scheibe F., Priller J., Endres M., Dirnagl U. Roller culture of free-floating retinal slices: a new system of organjtypic cultures of adult rat retina. // Ophthalmic Research. 2006. Vol. 38. P. 263-269.