Способы восстановления и компенсации нарушенных функций головного мозга. Создание импортозамещающих ноотропных лекарственных средств. Характеристика, свойства и применение листьев гинкго двулопастного. Разработка унифицированных методик анализа сырья.
Аннотация к работе
В основном это ЛП, изготовленные на основе листьев гинкго двулопастного (Ginkgo biloba L., сем. Листья гинкго двулопастного входят в Европейскую и Британскую фармакопеи. На основе извлечений из листьев гинкго двулопастного производятся такие препараты как танакан, билобил, мемоплант, гинкор форт, гинкор гель и др., разрешенные к применению в Российской Федерации. До сих пор не решены вопросы определения подлинности сырья и препаратов гинкго с использованием ТСХ и УФ-спектроскопии, хотя ранее проводились исследования по стандартизации сырья и препаратов гинкго. В нашем исследовании мы опирались на анализ нативных флавоноидов гинкго - как гликозидов (производные кемпферола, изорамнетина и др.), так и метилированных производных аментофлавона, или 8,3"-бисапигенина (гинкгетин, изогинкгетин), присущих именно этому виду сырья, что повышает достоверность и эффективность как качественного, так и количественного анализа.В результате предварительных исследований химического состава листьев гинкго двулопастного с использованием химических реакций в данном сырье обнаружены флавоноиды (цианидиновая реакция, цианидиновая реакция по Брианту), терпеноиды (реакция Либермана-Бурхарда), дубильные вещества (реакция с хлоридом железа (III)) и другие фенольные соединения (реакция с диазобензолсульфокислотой). С целью обоснования методик качественного и количественного анализа нами проведена препаративная хроматографическая работа по выделению доминирующих флавоноидов - нарциссина, никотифлорина, гинкгетина и изогинкгетина. С использованием колоночной хроматографии и последующей перекристаллизацией получены вещества, которые по физико-химическим константам, данным УФ-, ЯМР и масс-спектров, а также качественным реакциям и реакциям химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз) охарактеризованы как никотифлорин (3-О-рутинозид кемпферола), нарциссин (3-О-рутинозид изорамнетина), а также диметилированные производные бифлавоноида (бисапигенина) - гинкгетин и изогинкгетин (табл. В этой связи, нами предложены новые подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении доминирующего и диагностического флавоноида гинкгетина в присутствии ГСО рутина (качественные реакции), а также определение суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии. лекарственный ноотропный гинкго мозг При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм гинкгетин и изогинкгетин обнаруживаются в виде одного доминирующего пятна желто-оранжевого цвета с Rf около 0,9; никотифлорин - в виде темно-желтого пятна с Rf около 0,5; нарциссин - в виде желтого пятна с Rf около 0,4-0,5 (рис.Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы флавоноидов в листьях гинкго двулопастного с доверительной вероятностью 95% составляет 4,12%. В основу качественного анализа экстракционных препаратов гинкго двулопастного в соответствии с принципом унификации методик положены ранее обсужденные для ЛРС подходы: разработана ТСХ-методика определения доминирующего специфического флавоноида гинкгетина и качественные реакции. В основу количественного определения суммы флавоноидов в настойке и экстракте гинкго двулопастного, как и в случае сырья, положен метод дифференциальной спектрофотометрии. Определение суммы флавоноидов во всех рассматриваемых случаях предложено проводить в пересчете на рутин, что нашло отражение в проектах ФСП на сухой экстракт гинкго и настойку гинкго. Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в настойке и экстракте гинкго двулопастного представлены в таблице 5.0,05 г (точная навеска) экстракта сухого помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 15 мл спирта этилового 70 % и растворяют при нагревании и периодическом перемешивании на кипящей водяной бане. Извлечение охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора 70% спиртом этиловым до метки и фильтруют через бумажный фильтр с синей полосой в колбу вместимостью 25 мл (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% раствора хлорида алюминия в 95% спирте этиловом и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки (испытуемый раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл испытуемого раствора (Б), доведенного до метки 95% этиловым спиртом в мерной колбе, вместимостью 25 мл (раствор сравнения Б). Содержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на рутин в процентах (X) вычисляют по формуле: где D - оптическая плотность испытуемого раствора;В результате изучения химического состава листьев гинкго двулопастного, культивируемого в Российской Федерации, впервые выделены 5 индивидуальных веществ, относящихся к флавоноидным соединениям. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и результатов химических превращений (кислотный и ферментный гидролиз) как нарциссин, никотифлорин, рутин, изогинкгетин и гинкгетин. Разработаны мето
План
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫСодержание суммы флавоноидов листьев гинкго двулопастного в зависимости от места культивированияСодержание суммы флавоноидов в препарате в пересчете на рутин в процентах (Х) вычисляют по формуле: