Исследование активности Na,K-АТФазы в гомогенате головного мозга крысы после прединкубации с гемолизатом эритроцитов. Фракционирование гемолизат эритроцитов с помощью гель-фильтрации. Исследование влияния полученных фракций на активность Na,K-АТФазы.
Аннотация к работе
Исследовать активность Na,K-АТФАЗЫ в гомогенате головного мозга крысы после прединкубации с гемолизатом эритроцитов. Оценить зависимость модулирующего эффекта гемолизата эритроцитов и его отдельных фракций на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы от содержания в среде определения ферментативной активности ЭДТА и ионов магния и кальция. Проведено разделение с помощью гель-фильтрации гемолизата эритроцитов на отдельные фракции, три из которых модулировали активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы в зависимости от соотношения двухвалентных ионов в среде инкубации. Впервые показано, что одна из трех модулирующих фракций обладала магний-и кальций-зависимым ингибирующим эффектом на активность Na,K-АТФАЗЫ, а активирующий эффект двух других фракций гемолизата эритроцитов в отношении фермента являлся кальций-зависимым. Показано, что в гемолизате эритроцитов и в его отдельных фракциях присутствуют модуляторы активности Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы, степень влияния которых на активность фермента зависит от соотношения двухвалентных ионов (магния и кальция) в среде определения ферментативной активности.Учитывая это, изучали влияние гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы в зависимости от содержания в среде определения ферментативной активности ЭДТА, MGCL2 и CACL2. Изучение влияния различных концентраций CACL2 на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга после прединкубации с гемолизатом эритроцитов показало, что при высокой концентрации CACL2 (1 ММ) в среде определения ферментативной активности ингибирующий эффект гемолизата эритроцитов отсутствовал (табл.3). В связи с отсутствием ингибирующего эффекта гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга при высокой концентрации CACL2, исследовали влияние содержания MGCL2 в среде определения ферментативной активности при разных концентрациях CACL2 на ингибирование фермента гемолизатом эритроцитов. Показано, что в среде, содержащей 0,1 ММ CACL2, ингибирующий эффект гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга сохранялся при всех исследованных концентрациях MGCL2 в среде определения ферментативной активности (табл. Активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы (МКМ Фн/мг белка/ч) в зависимости от концентрации MGCL2 в среде определения ферментативной активности, содержащей 0,1 ММ CACL2, до и после прединкубации с гемолизатом эритроцитов, (M±m)Активность Na,K-АТФАЗЫ в гомогенате головного мозга крысы после прединкубации с гемолизатом эритроцитов снижалась на 40 % по сравнению с контролем в стандартной среде определения ферментативной активности.
План
Содержание белка определяли по методу Lowry et al (1951).
Вывод
1. Активность Na,K-АТФАЗЫ в гомогенате головного мозга крысы после прединкубации с гемолизатом эритроцитов снижалась на 40 % по сравнению с контролем в стандартной среде определения ферментативной активности. Изучение влияния ЭДТА и ионов магния и кальция на процесс ингибирования Na,K-АТФАЗЫ головного мозга крысы гемолизатом эритроцитов показало, что действие внутриклеточных модуляторов на Na,K-АТФАЗУ зависит от соотношения двухвалентных ионов в среде определения ферментативной активности.
2. Полученные с помощью гель-фильтрации отдельные фракции гемолизата эритроцитов обладали разнонаправленными эффектами на Na,K-АТФАЗУ гомогената головного мозга крысы, что указывает на присутствие в гемолизате эритроцитов ингибиторов и активаторов фермента.
3. Результаты исследования влияния отдельных фракций гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ головного мозга крысы в зависимости от содержания двухвалентных ионов в среде определения ферментативной активности указывают на наличие в эритроцитах модуляторов активности фермента с магний- и кальций-зависимыми свойствами, так и только с кальций-зависимыми свойствами.
4. Совокупность полученных результатов позволяет предположить, что влияние гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ гомогената головного мозга крысы и характер зависимости этого влияния от двухвалентных ионов обусловлены взаимодействием внутриклеточных модуляторов фермента.
Список литературы
1. Дубровский В.Н., Кыров Д.Н., Силиванова Е.А., Шалабодов А.Д. Активность Na ,К -АТФАЗЫ и ацетилхолинэстеразы в различных отделах головного мозга крыс при иммобилизационном стрессе различной продолжительности// Материалы 5 Общероссийской научной конференции "Успехи современного естествознания" г.Сочи 27-29 сентября 2004г. Успехи современного естествознания - №8. - 2004. - С.41-42.
2. Кыров Д.Н. Регуляция активности Na,K - АТФАЗЫ гемолизатом эритроцитов крыс// Сборник материалов Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина" 14-16 апреля 2005 г., г. Санкт-Петербург. Приложение к журналу "Вестник молодых ученых". Серия "Науки о жизни". - C. 65.
3. Дубровский В.Н., Кыров Д.Н., Силиванова Е.А., Шалабодов А.Д. Активность Na,K - АТФАЗЫ головного мозга и эритроцитов крыс при стрессе// Материалы Всероссийской конференции "Менделеевские чтения" 26-28 мая 2005 г., г. Тюмень. - С.126-129.
4. Кыров Д.Н., Силиванова Е.А., Дубровский В.Н., Шалабодов А.Д. Исследование действия модуляторов, выделенных из эритроцитов, на активность Na,K-АТФАЗЫ головного мозга крыс// Научные труды I Съезда физиологов СНГ 19-23 сентября 2005 г., г. Сочи, Дагомыс, Т.2. - С. 52.
5. Кыров Д.Н., Силиванова Е.А., Дубровский В.Н., Шалабодов А.Д. Влияние гемолизата эритроцитов на активность Na,K-АТФАЗЫ головного мозга крыс// Вестник Тюменского государственного университета, №5 - 2006. - С. 4-12.