Интегрированная оценка адаптационных возможностей собак в раннем постнатальном онтогенезе при алиментарной депривации - Автореферат

Определить содержание и динамику ряда основных гормонов (кортизола, тироксина, трийодтиронина, эстрадиола-17b, прогестерона, тестостерона), показателей углеводного и белкового обменов; уровень морфологических показателей крови у щенков в раннем постнатальном онтогенезе в разном физиологическом аспекте. Изучить характер и основные закономерности в динамике гормональных, морфологических и биохимических показателей крови у щенков в раннем постнатальном онтогенезе с разным напряжением адаптационных механизмов. Изучить корреляционную связь между состоянием вегетативной нервной системы и адаптационных резервов организма у собак, гормональным фоном, морфологическими показателями крови и уровнем обменных процессов организма собак в онтогенезе. Впервые дана характеристика гормонального статуса щенков в раннем постнатальном онтогенезе по уровню в крови гормонов коры надпочечников (кортизола), щитовидной (тироксина, трийодтиронина) и половых желез (прогестерона, эстрадиола-17?, тестостерона) в связи с особенностями функционального и физиологического состояния организма при алиментарной депривации. Динамика функционального состояния сердечно-сосудистой системы, показателей гормонального, иммунного и вегетативного статуса у щенков в раннем постнатальном онтогенезе, отражает особенности адаптационного синдрома при алиментарной депривации, а изменения в данных системах могут визуализироваться до развития клинических нозологических форм и являются основой донозологической диагностики при индивидуальном исследовании.Кроме того, животные первой опытной группы не имели дефицита массы тела, животные второй опытной группы имели дефицит массы тела 5-10% (гипотрофия I степени), животные третьей опытной группы имели дефицит массы тела 10-20% (гипотрофия II степени). У животных на полнорационном кормлении СОЭ составила 4,04±1,1 мм/ч, что в сравнении с уровнем СОЭ у животных с гипотрофией I степени - 5±1,88мм/ч и II степени - 6,89±3,05мм/ч больше на 25 % и 75 % соответственно. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 5,63?1,044 ?109г/л и 7,3?3,67?109г/л соответственно, что на 45% и 29% меньше чем у животных получавших полнорационное кормление. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 2,83?0,21 % и 1,68?0,932 % соответственно, что на 31 % и 40 % меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление. Таким образом, до 4 месяцев уровень гормонов щитовидной железы у щенков на традиционном кормлении выше на 5-10%, чем у щенков на полнорационном кормлении, но после 4 месячного возраста происходит снижение уровня гормонов щитовидной железы на 5-17% у щенков на традиционном кормлении в сравнении с полнорационным кормлением.При изучении морфологических показателей крови у сук с разным типом кормления, нами было выяснено, что по мере развития гипотрофии у собак развивается снижение показателей ККК, а при гипотрофии первой и второй степени отмечается выраженная анемия (90,01±15,57г/л, 3,97±1,327*1012/л). При наличии неблагополучия местности по парвовирусному энтериту или другому заболеванию: увеличение процента среднеквадратичного отклонения от среднего значения показателя эритроциты (и его производные) до 8% или показателя лейкоциты (и производные этого показателя) до 10% - риск развития заболевания умеренный; увеличение процента среднеквадратичного отклонения от среднего значения показателя эритроциты (и его производные) от 9% до 15% или показателя лейкоциты (и производные этого показателя) от 11% до 20 - риск развития заболевания высокий; увеличение процента среднеквадратичного отклонения от среднего значения показателя эритроциты (и его производные) выше 16% или показателя лейкоциты (и производные этого показателя) выше 20% - риск развития заболевания очень высокий. Кормление сук полнорационными кормами «Pedigree» в период от начала течки до конца лактации приводит к более быстрому формированию и адаптации желудочно-кишечного тракта у щенков полученных от этих сук, в сравнении с щенками полученными от сук, получавших традиционное кормление. По мере развития гипотрофии у щенков на скудном кормлении сначала отмечается повышение уровня гормонов щитовидной железы (Т3 до 2,88±0,12 нмоль/л; Т4 до 181,08±5,25 нмоль/л) с последующим их снижением ниже нормы (Т3 до 1,70±0,14 нмоль/л; Т4 до 43,75±2,81 нмоль/л), что отображает первоначальное усиление обмена веществ у щенков с недостаточным кормлением, но при продолжительном скудном кормлении отмечается снижение уровня гормонов щитовидной железы с характерным снижением интенсивности обмена веществ. У щенков находящихся на полнорационном кормлении наблюдается увеличение экскреции НА, ДА и ДОФА, при этом выраженность реакции САС тем выше, чем выше ИВТ; щенков находящихся на традиционном кормлении наблюдается увеличение экскреции НА, ДА и ДОФА, при этом выраженность реакции САС тем несколько ниже, чем у щенков на полнорационном кормлении; у щенков с гипотрофией первой степени наблюдается резкое увеличение экскреции НА, ДА при одновременном снижении ДО

1. Морфологические и биохимические исследования крови у щенных сук с разным типом кормления

В опытах использовали восемьдесят клинически здоровых сук породы немецкая овчарка в возрасте от 1,5 до 5 лет, принадлежащих частным владельцам. Из них нами было сформировано четыре группы: контрольная - 20 сук и три опытных группы по 20 голов в каждой. Кормление животных контрольной группы осуществляли сухим кормом Pedigree, в объеме согласно наставлению по применению. Животные опытных групп находились на обычном «домашнем» рационе весь период исследования. Кроме того, животные первой опытной группы не имели дефицита массы тела, животные второй опытной группы имели дефицит массы тела 5-10% (гипотрофия I степени), животные третьей опытной группы имели дефицит массы тела 10-20% (гипотрофия II степени).

Выяснено, что при полнорационном и традиционном кормлении количество гемоглобина и число эритроцитов у сук 155,9±9,81г/л, 6,33±0,12*1012г/л, и 153,8±9,96г/л, 6,51±1,168*1012г/л соответственно. Тогда как при гипотрофии I и II степени 123,2±12,68г/л, 4,91±1,49*1012г/л, и 90,01±15,57г/л, 3,97±1,327*1012г/л. Показатель гематокрита у животных с I и II степенью гипертрофии был меньше, по сравнению с животными, получающими полнорационные корма, на 11 % и 34 %, что составило 0,33±0,03ед. и 0,27±0,04 ед. соответственно.

СОЭ у животных получавших традиционное кормление составила 4,13±0,93 мм/ч. У животных на полнорационном кормлении СОЭ составила 4,04±1,1 мм/ч, что в сравнении с уровнем СОЭ у животных с гипотрофией I степени - 5±1,88мм/ч и II степени - 6,89±3,05мм/ч больше на 25 % и 75 % соответственно.

Уровень лейкоцитов у сук, получавших традиционное кормление, 10,4?2,14?109г/л. Тогда как, этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма, был 9,7?1,69?109г/л. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 5,63?1,044 ?109г/л и 7,3?3,67?109г/л соответственно, что на 45% и 29% меньше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество эозинофилов у собак, получавших традиционное кормление было 3,68?1,28%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 4,12?1,08 %. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 2,83?0,21 % и 1,68?0,932 % соответственно, что на 31 % и 40 % меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество палочкоядерных нейтрофилов у собак, получавших традиционное кормление было 7,9?2,27 %. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 6,7?0,991 %. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 11,55?2,17% и 16,23?3,01 % соответственно, что на 71 % и 142 % больше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество сегментоядерных нейтрофилов у сук, получавших традиционное кормление было 63,05?11,59 %. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма составил 55,9?11,07%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени поднялся до 61,3?13,18 % и 68,8?14,02 % соответственно, что на 9 % и 23 % больше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество лимфоцитов у собак, получавших традиционное кормление, было 29,7?7,62%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 21,22?9,61%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 19,33?2,94 % и 12,2?5,46% соответственно, что на 8% и 42% меньше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество моноцитов у сук, получавших традиционное кормление было 3,9?1,06%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 3,8?1,0%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 4,8?1,56% и 2,5?1,51% соответственно, что на 26% больше и на 34% меньше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Таким образом, отмечается снижение показателей красной и белой крови у собак по мере развития гипотрофии. Вместе с тем, не выявлено статистически значимых отличий между показателями красной крови у первой и второй группы в данные периоды исследования.

Было выявлено, что для I степени и II степени гипотрофии характерно увеличение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови соответственно до 104,5?8,67 Е/л; 125,1?9,74 Е/л, тогда как в группе животных с полнорационным кормлением эти показатели были 92,03?7,76 Е/л (р<0,001).

Увеличение активности щелочной фосфатазы до 94,73?5,46 Е/л при I степени гипотрофии, до 167,9?6,44 Е/л при II степени гипотрофии (p<0,05), относительно показателей у животных при полнорационном кормлении составило 45% и 158% соответственно.

Уровень мочевины у собак, получавших традиционное кормление был 6,11?1,11 ммоль/л. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 7,66?1,03 ммоль/л. У животных с I и II степенью гипотрофии этот показатель равен 7,34?0,86 ммоль/л и 10,11?0,98 ммоль/л, что в сравнении с показателями животных получавших полнорационное кормление на 4% меньше и 31% больше. Уровень глюкозы у собак, получавших традиционное кормление был 4,83?0,1 ммоль/л. У собак, получавших полнорационное кормление был 4,76?0,29 ммоль/л. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составило 4,89?0,1 ммоль/л и 8,83?0,1 ммоль/л соответственно, что на 2% и 85% больше чем у животных получавших полнорационное кормление.

На втором этапе исследования от сук участвующих в предыдущем опыте были получены щенки. При этом щенков продолжали кормить по тем же принципам, что и их матерей.

У щенков количество гемоглобина (г/л), в группе животных получавших традиционное кормление составляло 93,2±5,57. В группе животных получавших полнорационное кормление этот показатель был выше 95,68?5,09. При I и II степени гипотрофии количество гемоглобина (г/л) было соответственно на 26% и 35% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление. Число эритроцитов у собак, получавших традиционное кормление, было 4,26?0,69, что равно количеству эритроцитов у животных получавших полнорационные корма. Тогда как этот же показатель в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составило 3,21?0,84 и 2,76?1,2 соответственно, что на 25% и 35% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Число гематокрита у собак, получавших традиционное кормление, было 0,3?0,02. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма, был 0,31?0,01. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составило 0,22?0,03 и 0,2?0,04 соответственно, что на 30% и 36% меньше чем у животных получавших полнорационное кормление.

Уровень лейкоцитов у собак, получавших традиционное кормление, 10,7?0,35?109/л. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма, был 9,2?0,3?109/л. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составило 5,3?0,78?109/л и 4,45?1,05?109/л соответственно, что на 42% и 51% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество эозинофилов у щенков, получавших традиционное кормление, было 7,1?0,17%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 4,5?0,12%. А в группе животных с гипотрофией I степени составил 3,4?0,2%, что на 24% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество палочкоядерных нейтрофилов у собак, получавших традиционное кормление, было 10,4?0,13%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 5,8?0,11%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 18,4?0,39% и 20,4?1,01%, что на 217% и 251% больше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество сегментоядерных нейтрофилов у собак, получавших традиционное кормление, было 51,1?1,1%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 53,7?0,74%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 62,3?1,22% и 65,1?2,08%, что на 16% и 21% больше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество лимфоцитов у собак, получавших традиционное кормление, было 25,4?0,76%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 33,4?0,69%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 12,8?0,84% и 12,4?1,42%, что на 61% и 62% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Количество моноцитов у собак, получавших традиционное кормление, было 3,8?0,19%. Тогда как этот же показатель в группе животных получавших полнорационные корма был 3,5?0,14%. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 3,1?0,22% и 0,6?0,29%, что на 11% и 82% меньше/, чем у животных получавших полнорационное кормление.

Таким образом, отмечается снижение показателей красной крови у собак по мере развития гипотрофии. Вместе с тем, не выявлено статистически значимых отличий между показателями красной крови у первой и второй группы в данный период исследования. Также, по мере развития гипотрофии у щенков отмечается развитие лейкопении. Особенно выражено снижение абсолютного количества лимфоцитов, их процентное количество отображало трехкратное снижение в группе с гипотрофией второй степени по отношению к здоровым животным, но, учитывая нарастающую лейкопению, абсолютную лимфопению общее количество лимфоцитов было еще меньше.

Выяснено, что для щенков I и II степени гипотрофией характерно увеличение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови соответственно до 134,69?6,97 Е/л; 144,81?8,13 Е/л, тогда как в группе животных с полнорационным кормлением эти показатели были 112,35?5,41 Е/л (р<0,001). То есть показатели АЛАТ при гипотрофии были на 32,5 Е/л выше, чем в группе животных с полнорационным кормлением.

Увеличение активности щелочной фосфатазы с 186,12?5,08 Е/л при I степени гипотрофии, до 202,07?7,26Е/л при II степени гипотрофии (p<0,05), относительно показателей у животных при полнорационном кормлении составило 161% и 175% соответственно.

Уровень мочевины у щенков, получавших полнорационное и традиционное кормление был 4,27?0,19 ммоль/л. Тогда как этот же показатель в группе животных с гипотрофией I и II степени был соответственно 6,74?0,26 ммоль/л и 6,47?0,49 ммоль/л. Уровень глюкозы у щенков, получавших традиционное кормление был 4,78?0,18 ммоль/л. У животных, получавших полнорационное кормление был 4,56?0,17 ммоль/л. А в группе животных с гипотрофией I степени и II степени составил 4,5?0,09 ммоль/л и 3,87?0,09 ммоль/л соответственно, что на 8% и 16% меньше, чем у животных получавших полнорационное кормление.

В зависимости от типа кормления происходило снижение альбумина в большей степени, чем снижение ?-глобулинов при незначительных изменениях ?- и ?- глобулинов в сыворотке крови. Уменьшение содержания альбумина происходило изза снижения протеинсинтетической функции гепатоцитов. Тогда как снижение уровня ?-глобулинов и менее выраженное ?-глобулинов, по всей видимости, происходило в силу резкого снижения уровня лейкоцитов, в том числе и лимфоцитов у животных с гипотрофией первой и второй степени, снижении продукции IGG, IGA, IGM.

2. Гормональные исследования у щенков с разным типом кормления в раннем постнатальном онтогенезе

Гормональный статус у щенков в раннем постнатальном онтогенезе характеризуется большой лабильностью. В связи с высокой интенсивностью постнатальной дифференцировки тканей в 5-7-дневном возрасте происходит активное поглощение гормонов, и их уровень снижается. Для животных первого месяца жизни характерна значительная интенсивность роста и развития. После месяца уровень гормонов щитовидной железы резко снижается.

Как видно из таблицы 2 у 1-3 дневных щенков полученных от сук на полнорационном кормлении уровень Т3 и Т4 был самым высоким за весь период исследования и составил 8,12±0,32 нмоль/л и 168,29±2,74 нмоль/л, соответственно. Соотношение Т3/Т4, оказалось также самым высоким и составило 4,83±0,23 Т3 нмоль/л. При исследовании в 5-дневном возрасте УРОВЕНЬТ3 резко упал до 2,01±0,12 нмоль/л, в период с 10 по 25-дневный возраст у различных щенков в этой группе уровень Т3 колебался от 2,45±0,07 нмоль/л до 2,68±0,06 нмоль/л, а после 30 дней, в период отъема уровень Т3 резко повышался в два раза, достигая 4,6±0,09 нмоль/л. Но уже в два месяца он снова падал до фонового 2,05±0,10 нмоль/л, и в дальнейшем не отмечалось резких сдвигов Т3 у щенков в этой группе.

Динамика Т4 очень похожа на динамику Т3 отмечается снижение Т4 с 10 по 15-дневный у различных щенков в этой группе до 104,29±4,91. Начиная с месяца, наблюдалось достаточно резкое повышение до 157,64±10,92 нмоль/л.

Таблица 2 Концентрация гормонов щитовидной железы в сыворотке крови щенков, полученных от сук на полнорационном кормлении в возрастном аспекте

Возраст Т3, нмоль/л Т4, нмоль/л Т3/Т4 · 100, %

1-3 дня 8,12±0,32 168,29±2,74 4,83±0,23

5-7 дней 2,01±0,12*** 131,61±5,33*** 1,53±0,35***

10-15 дней 2,45±0,07** 104,29±4,91** 2,35±0,18

20-25 дней 2,68±0,06* 121,98±8,79 2,20±0,21

1 мес. 4,6±0,09** 157,64±10,92 2,9±0,32

2 мес. 2,05±0,10** 52,68±4,81*** 3,89±0,47***

3 мес. 1,59±0,11** 41,2±2,87* 3,86±0,47

4 мес. 2,05±0,23* 62,98±3,15*** 3,26±0,54

5-6 мес. 2,45±0,16* 68,26±5,83 3,59±0,82

7-9 мес. 2,83±0,31* 88,63±3,38** 3,19±0,37

10-12 мес. 2,58±0,09* 78,16±5,40 3,30±0,28

* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001 разница статистически достоверна в сравнении с предыдущим показателем.

После месячного возраста происходит более быстрое падение Т4, чем Т3. Уровень Т4 снижается с 157,64±10,92 нмоль/л до 52,68±4,81 нмоль/л, при этом отношение Т3/Т4, повышается до 3% к месячному возрасту и уже не снижается ниже этого значения до конца периода исследования.

Имеются отличия в динамике гормонов щитовидной железы у щенков находящихся на полнорационном и традиционном кормлении. Так нами обнаружено, что у щенков на традиционном кормлении в первые дни жизни уровень Т3 и Т4 был выше на 5% и 7,6%, и составил 8,53±0,35 нмоль/л и 181,08±5,25 нмоль/л соответственно, при этом уже к 5-дневному возрасту их количество, также как и в группе щенков на полнорационном кормлении снижается, и резко увеличивается только в период отъема, после чего опять снижается, но не столь выражено как Т3. При этом уровень Т3 и Т4 в период с 5-7 день у щенков на традиционном кормлении оказался на 5,5% и 8,8% выше, чем у щенков на полнорационном кормлении, и составил 2,12±0,21 нмоль/л и 143,19±6,27 нмоль/л соответственно (табл. 3).

Таблица 3 Концентрация гормонов щитовидной железы в сыворотке крови щенков на традиционном кормлении в возрастном аспекте

Возраст Т3, нмоль/л Т4, нмоль/л Т3/Т4 · 100, %

1-3 дня 8,53±0,35 181,08±5,25 4,71±0,11

5-7 дней 2,12±0,21*** 143,19±6,27*** 1,48±0,13***

10-15 дней 2,59±0,08** 111,07±2,29** 2,33±0,12

20-25 дней 2,88±0,12** 131,62±8,79 2,19±0, 27

1 мес. 2,69±0,10 121,25±9,51 2,22±0,24

2 мес. 2,22±0,25** 56,05±4,47*** 3,96±0,60***

3 мес. 1,70±0,14** 43,75±2,81* 3,86±0,48

4 мес. 2,12±0,09* 46,70±3,83*** 4,18±0,54

5-6 мес. 2,31±0,18* 65,77±5,47 3,55±0,73

7-9 мес. 2,68±0,18 71,68±4,12** 4,03±0,46

10-12 мес. 2,57±0,25 71,38±4,17 3,36±0,23

* р<0,05, ** р<0,01, *** р<0,001 разница статистически достоверна в сравнении с предыдущим показателем.

С 10 по 15 день уровень Т3 и Т4 у щенков на традиционном кормлении был на 5,7% и 6,5% выше, чем у щенков на полнорационном кормлении, и составил 2,59±0,08 нмоль/л и 111,07±2,29 нмоль/л соответственно. В последующие дни наблюдалась положительная тенденция в росте уровня гормонов щитовидной железы. А после 30 дней, в период отъема уровень Т3 и Т4 снижаются до 2,69±0,10 нмоль/л и 121,25±9,51 нмоль/л, что в процентном соотношении с группой полнорационного кормления указывает на снижение уровня Т3 и Т4 на 7,6% и 6,7% соответственно. В 3 месячном возрасте в крови щенков понижался уровень тиреоидных гормонов (Т3 с 2,22±0,25 до 1,70±0,14, а Т4 имело более интенсивное снижение показателей с 56,05±4,47 по 43,75±2,81), что в сравнении с первой группой составило Т3 на 7%, а Т4 на 6,2%. Интересно отметить, что если до 4-месячного возраста динамика гормонов щитовидной железы практически была идентична динамике у щенков на полнорационном кормлении, но отличалась повышением показателей на 4-10%, то после 4 месяцев отмечалось снижение показателей гормонального статуса щитовидной железы. Так в период с 6-месячного по 12-месячный возраст у щенков на традиционном кормлении отмечались следующие показатели Т3 3,31±0,18 нмоль/л; 2,68±0,18 нмоль/л; 2,57±0,25 нмоль/л, что было на 5%, 6,3%, и 4,7% ниже, чем в соответствующем возрасте у щенков на полнорационном кормлении. Эта же закономерность наблюдалась и в динамике Т4, уровень которого в 4-х, 6-и, 9-и, 12-и месячном возрасте составил 46,70±3,83 нмоль/л, 65,77±5,47 нмоль/л, 71,68±4,12 нмоль/л и 71,38±4,17 нмоль/л соответственно, что было на 17,3%, 5%, 17,3%. и 9% ниже, чем у щенков на полнорационном кормлении.

Рисунок 1. Динамика концентрации Т3 в сыворотке крови щенков, полученных от сук с разным типом кормлении

Таким образом, до 4 месяцев уровень гормонов щитовидной железы у щенков на традиционном кормлении выше на 5-10%, чем у щенков на полнорационном кормлении, но после 4 месячного возраста происходит снижение уровня гормонов щитовидной железы на 5-17% у щенков на традиционном кормлении в сравнении с полнорационным кормлением.

Рисунок 2. Динамика концентрации Т4 в сыворотке крови щенков, полученных от сук с разным типом кормлении

На рисунках 1, 2 видно, что у щенков на традиционном кормлении и с гипотрофией первой степени, первоначально отмечался более высокий уровень тиреоидных гормонов, чем у щенков на полнорационном кормлении, но с 4 месяца жизни, уровень этих гормонов резко падал, при этом падение уровня тиреоидных гормонов тем выраженнее, чем сильнее гипотрофия. При гипотрофии второй степени уровень тиреоидных гормонов оставался монотонно низким. Другими словами, у здоровых щенков на традиционном кормлении отмечались тенденции, характерные для щенков с гипотрофией, а именно, повышенная стимуляция (раздражение) гипоталамо-гипофизарно-тиреоидной оси с последующим снижением ее функции, при традиционном кормлении на 10% относительно животных на традиционном кормлении и выраженном угнетении данной оси при гипотрофии второй степени.

У щенков в возрасте 1-3 суток, отмечался высокий уровень кортизона и половых гормонов. Эти показатели в группе животных на полнорационном кормлении составляли: эстрадиола - 0,49±0,03 нмоль/л, прогестерона 2,27±0,19 нмоль/л; тестостерона 2,11±0,08 нмоль/л, кортизола 67,02±11,22 нмоль/л. Но уже в последующие 3 дня жизни показатели кортизола снижались до 40,07±5,93 нмоль/л. Снижались также показатели и других стероидных гормонов: эстрадиола до 0,32±0,04 нмоль/л, прогестерона до 1,22±0,20 нмоль/л; тестостерона до 1,45±0,13 нмоль/л. Интенсивное снижение продолжалось до 20 - 25 дня и на данном периоде имело максимальное снижение половых гормонов и кортизола. На 30 день в период отъема уровень кортизона и половых гормонов начинал повышаться.

У щенков в возрасте два и три месяца концентрация кортизола и тиреоидных гормонов снижалась. Установлено, что кортикостероидная и тиреоидная системы регуляции взаимозависимы (Эпштейн Н.А., 1970). Снижение уровня кортизола в период максимального увеличения живой массы щенков можно считать физиологически целесообразным, так как известно, что кортикостероиды способны ингибировать репликацию клеток, синтез гормона роста (Voung V.R., 1980).

Возраст щенков 10-12 месяцев соответствует периоду полового созревания. В организме формируется дополнительная мотивация - половая доминанта, которая сопровождается изменениями во всем организме животных. В крови щенков повышается уровень кортизола, гормонов щитовидной и половых желез.

Концентрация гормонов у щенков с 10-месячного возраста (период физиологической зрелости) соответствует установившемуся уровню метаболизма, характеризующемуся снижением энергии роста и биосинтетической активности тканей.

Увеличение и стабилизация концентрации стероидных гормонов (половых и кортизола) установлены в крови щенков в 13-18 месяцев. Это указывает на завершение формирования половой функции и способности животных плодотворно осеменяться. Содержание гормонов щитовидной железы снижается.

Отражением адаптивных перестроек и возрастания эндоцитоза гормонов тканями является снижение уровня кортизола на 21,17 нмоль/л (р<0,05) и увеличением трийодтиронина и тироксина - на 1,05 нмоль/л (р<0,05), 1,15 нмоль/л соответственно у щенков в возрасте 12 месяца по сравнению с 6 месячными животными. Стабильный уровень половых гормонов у щенков этого возраста свидетельствует об их нормальной репродуктивной функции.

Таким образом, характер колебаний уровня гормонов в крови щенков в постнатальном периоде отражает всю совокупность физиологических реакций, поддерживающих состояние гомеостаза в разные возрастные периоды.

У щенков в группе для кормления которых использовались традиционные корма в возрасте 1-3 суток по сравнению с показателями группы полнорационного кормления уровень эстрадиола, прогестерона и кортизола увеличивался на 2% в первом случае , 2,8% во втором и 8,7% в третьем и составил - 0,50±0,04 нмоль/л, 2,32±0,17 нмоль/л, 73,39±10,13 нмоль/л. Что же касается тестостерона, то его уровень снижался на 2,4% и составлял на 2,06±0,06 нмоль/л. Но уже в последующие 3 дня жизни показатели кортизола снижались до 43,96±5,49 нмоль/л. Снижались также показатели и других стероидных гормонов: эстрадиола до 0,33±0,02 нмоль/л, прогестерона до 1,25±0,18 нмоль/л, тестостерона до 1,49±0,14 нмоль/л. Но при сравнении с показателями группы животных для кормления которых использовались полнорационные корма, отмечался рост уровня гормонов, который составлял: эстрадиола 3%, прогестерона 2,4%, тестостерона 2,8% и кортизола 8,8%. Подобно тому, как и в группе с полнорационным кормлением, стремительное снижение уровня гормонов продолжалось до 20 - 25 дня и на данный период имело максимальное снижение половых гормонов и кортизола. Их значения составили: эстрадиол 0,11±0,05 нмоль/л, прогестерон 0,68±0,19 нмоль/л, тестостерон 0,83±0,02 нмоль/л, кортизола 29,04±4,38 нмоль/л. Что превысило показатели предыдущей группы на 9% у эстрадиола, 3% у прогестерона, 4,8% у тестостерона и 9,1% у кортизона. На 30 день в период отъема и в последующий период времени уровень кортизона и половых гормонов начинал повышаться без существенных колебаний.

Таким образом, у щенков на традиционном кормлении отмечается некоторое повышение уровня гормонов надпочечников по сравнению с традиционным кормлением в начале жизни, с последующим снижением кортикостероидов к 4 месяцам по сравнению с полнорационным кормлением, что, по всей видимости, отображает напряжение в системе гипоталамус-гипофиз-надпочечники. При гипотрофии первой степени эти изменения выражены ярче. При гипотрофии второй степени отмечается резко снижение показателей как кортикостероидов, так и половых гормонов. Кроме того, после 4 месяцев жизни отмечается дальнейшее снижение уровня кортизола более чем в два раза, что, по всей видимости, отображает истощение не только гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, но и всех осей гипоталамо-гипофизарной системы.

3. Микробная сукцессия кишечника щенков полученных от сук с разным типом кормления

С первого дня у щенков отмечены различия в количественном и качественном составе микрофлоры кишечника. Так у щенков от сук на традиционном кормлении, в 100% случаев фецес содержал непатогенные эшерихии, при этом их количество было 5,93±0,694, тогда как у щенков от сук, получавших «Pedigree», эшерихии не удалось выделить от одного щенка, при этом их титр у троих щенков был ниже 0,5 lg/г фекалий, а разброс значений в выборке составил от 0,28 до 9,27 lg/г фекалий. По данным изученной нами литературы непатогенные эшерихии являются нормальной микрофлорой кишечника у щенков первого дня жизни. Поэтому выделение этих бактерий в большем количестве у животных второй группы нельзя рассматривать, как дисбактериоз или другую патологию. Энтерококки высевались из фекалий обеих групп, при этом в первой группе они были выделены у 17 щенков (65%), а во второй группе у 15 щенков, что составило 82,2%. Эти бактерии высевались в титрах от 1,65 до 6,58 (СКО - 0,392 и 0,336 соответственно). Тем не менее, при сравнении 2-х этих групп выявлены статистически значимые отличия в количестве энтерококков в фецесе. Лактобактерии высевались в 74,3% и 49,6% от щенков первой и второй групп соответственно, также обнаружены статистические различия в содержании лактобактерий у щенков первого дня жизни. Так в первой группе их количество колебалось от 0 до 11,14 lg/г фекалий, с СКО=0,561, тогда как во второй группе от 0 до 3,12, при СКО=0,864. Бифидумбактерии у щенков первого дня жизни не высевались.

Кроме того, у одного щенка 2 группы были выделены клебсиеллы в количестве 0,2 lg/г фекалий и гемолитические эшерихии у 2 щенков в количестве 0,96 и 0,49

Таким образом, у щенков первого дня жизни полученных от сук при кормлении полнорационным кормом и кормлении традиционным кормом, при бактериологическом исследовании фецеса выявлены статистически значимые различия, патогенетическое значение которых не вполне ясно, так как развитие щенков в обеих группах происходит адекватно. Вместе с тем индикация во второй группе животных условно патогенных микроорганизмов дает основание говорить о большей вероятности развития у этих животных бактериальных поражений желудочно-кишечного тракта.

4. Результаты применения методик донозологической диагностики

Результаты изучения иммунологического статуса у щенков с гипотрофией разной степени тяжести

Нами было проведено исследование иммунного статуса щенков полученных от сук с разным кормлением и получающих также соответствующее кормление. Использовались те же группы животных, что и в предыдущем исследовании.

Процентное снижение Т-лимфоцитов с 39,51±1,8 до 23,53±2,4 у щенков на традиционном кормлении, по сравнению с щенками на полнорационном кормлении, сопровождалось гораздо более выраженными изменениями абсолютного количества Т-лимфоцитов с 0,91±0,035?109/л до 0,8±0,051?109/л. При гипотрофии развивалась выраженная лейкопения и лимфопения, количество Т-лимфоцитов периферической крови снижалось до 23,53±2,4 при гипотрофии первой степени и увеличилось 38,96 ± 2,7% при гипотрофии второй степени. Но на фоне лимфопении абсолютное значение лимфоцитов снижалось до 0,45±0,069?109/л при гипотрофии первой степени и до 0,27±0,1?109/л при гипотрофии второй степени. Соотношение Т-хелперов к Т-супрессорам также изменялось, и по мере развития гипотрофии снижалось с 2,57 до 1,79. Анализ показателей, характеризующих гуморальное звено иммунитета у щенков 6-ти месячного возраста, выявил, что относительное содержание в крови В-лимфоцитов у щенков на традиционном кормлении по сравнению с щенками на полнорационном кормлении снижалось с 25,7±3,3 до 22,61±4,2%, что в абсолютных значениях составило 0,51±0,01?109/л и 0,45±0,039?109/л соответственно. Разница в общем количестве лейкоцитов у щенков первой и второй группы не имела статистических значимых отличий. Отдельные популяции лимфоцитов у щенков на традиционном кормлении статистически отличались от этих показателей у щенков на полнорационном кормлении, а сдвиги эти были в сторону показателей, характерных для щенков гипотрофиков.

Результаты изучения состояния сердечно-сосудистой системы и вегетативного статуса у щенков с гипотрофией разной степени тяжести

Анализ функционального состояния симпатоадреналовой системы (САС) показал, что щенки с различным исходным вегетативным тонусом в сердечно-сосудистой системе отличаются по уровню экскреции КА и их предшественников. У 30% щенков, находящихся на полнорационном кормлении, с преобладанием симпатических влияний на сердечный ритм в условиях покоя отмечается уровень секреции адреналина 9,83±0,37, что несколько выше, чем у животных с эйтонией в этой же группе. Между щенками с эйтонией и ваготонией на полнорационном кормлении не отмечалось статистически значимых отличий в уровне адреналина. В уровне норадреналина имелись более выраженные изменения: так у щенков с симпатикотонией уровень секреции норадреналина оказался на 10% выше, чем у щенков с эйтонией, и на 20% выше, чем у щенков с ваготонией (р<0,05). Очень интересная динамика в показателях предшественников адреналина и дофамина, так уровень дофамина у щенков с симпатикотонией оказался на 20%, а уровень ДОФА - на 58% ниже, чем у собак с ваготонией (р<0,01). Таким образом, именно показатели предшественников адреналина и норадреналина имели наибольшие различия у щенков с разным типом вегетативной активности.

На фоне относительно высоких значений адреналина у щенков с симпатикотоническим вариантом исходного вегетативного тонуса (ИВТ), и находящихся на традиционном кормлении отмечалось снижение экскреции с мочой норадреналина на 21%, по сравнению с животными, находящимися на полнорационном кормлении. Такая же тенденция была отмечена и у щенков с эйтонией. Если уровень норадреналина у щенков в первой и второй группе с нормотонией не имел статистических отличий, то уровень норадреналина был на 17% ниже в группе животных с традиционным кормлением. Поскольку ваготоников в группе животных с традиционным кормлением не было, то не было и сравнительного анализа. Отмечены резкие отличия в уровне предшественников адреналина и норадреналина у щенков первой и второй групп. Уровень дофамина был на 20% ниже у щенков во второй группе с симпатикотонией и на 30% ниже во второй группе у щенков с эйтонией, и составлял соответственно 128,29±6,41 нг/мин и 109,33±4,73 нг/мин у симпатотоников и 141,17±8,35 нг/мин и 111,40±6,21 нг/мин у щенков эйтоников. А вот уровень ДОФА был соответственно 9,35±1,01 нг/мин и 13,42±1,09 нг/мин у симпатотоников; 8,17±1,33 нг/мин и 14,34±4,80 нг/мин у щенков эйтоников.

Отношение норадреналина к адреналину внутри групп щенков с одинаковым кормлением отличалось слабо, но в группе животных на традиционном кормлении было на 30-50% ниже, чем у щенков на полнорационном кормлении.

Дальнейший анализ уровня катехоламинов у щенков с гипотрофией первой и второй степени показал резкое снижение предшественников адреналина и норадреналина в экскретируемой моче. Так у щенков с гипотрофией первой степени уровень дофамина был 95,57±3,27 нг/мин, 91,33±5,12 нг/мин, 85,01±5,84 нг/мин соответственно у щенков с симптатико-, эй- и ваготонией. Интересно отметить, что если в группе щенков на полнорационном кормлении уровень предшественников адреналина и норадреналина был наиболее высок у ваготоников, то при гипотрофии у ваготоников отмечался наименьший их уровень. Это связано с тем, что в группе с полнорационным кормление высокое содержание предшественников катехоламинов у ваготоников связано с их более экономным использованием, и, по всей видимости, отображает особенности типа ЦНС. В группе ваготоников с гипотрофией уровень предшественников отображает их истощение. При гипотрофии второй степени истощение адренергических структур достигало еще больших значений и составило соответственно 81,47±7,62 нг/мин и 80,14±9,11 нг/мин при ваготонии и эйтонии.

Таким образом, ваготония при полнорационном кормлении и гипотрофии имеет разную природу, в первом случае это особенный тип ЦНС и мы имеем дело с истиной ваготонией, во втором случае речь идет об истощении адренергических структур.

Тестирующая функциональная проба в виде дозированного внутривенного введения адреналина позволила выявить реактивность и функциональные резервы САС в исследуемых группах.

Проведенный анализ показал, что характер реакций САС на адреналиновую пробу у щенков зависит от ИВТ, фонового уровня экскреции катехоламинов и имеет ярко выраженные отличия у щенков с разным типом кормления. Так, у щенков-симпатотоников при полнорационном кормлении на фоне относительно высоких фоновых значений экскреции норадреналина (9,83±0,37 нг/мин) в ответ на адреналиновую пробу происходит ее прирост, составляющий до 11,75±1,54 нг/мин, что на 16% выше, по отношению к фону. Повышается и экскреция норадреналина с 20,41±1,94 нг/мин до 22,71±2,32 нг/мин, то есть на 10%. При этом выделение ДОФА поднимается с 9,35±1,01 нг/мин до 14,31±3,43 нг/мин, что на 65% выше фонового уровня функционирования САС.

У щенков-эйтоников этой же группы происходит повышение адреналина и норадреналина на 8,31±0,76 нг/мин и 12,24±0,98 нг/мин; 18,15±1,68 нг/мин и 39,41±2,97 нг/мин, соответственно, что выше на 32% и 15,9%. Тогда как уровень ДОФА поднялся с 13,42±1,09 нг/мин до 24,42±2,89 нг/мин, что на 45% выше, чем фоновый уровень.

У щенков-ваготоников отмечался самый высокий уровень прироста катехоламинов и их предшественников с 8,33±0,34 нг/мин до 15,71±1,65 нг/мин адреналина, с 22,71±2,32 нг/мин до 24,31±1,95 нг/мин норадреналина и с 21,24±3,21 нг/мин до 27,38±3,94 нг/мин ДОФА, что на 47%, 69% и 23% выше, чем фоновый уровень. Таким образом, реакцию САС на адреналиновую пробу у щенков, получавших полнорационное кормление, можно назвать адекватной, при данной реакции происходит повышение как катехоламинов, так и их предшественников, что говорит о высокой функциональной и потенциальной способности САС.

Несмотря на достоверно более высокий фоновый уровень экскреции адреналина и норадреналина у щенков с гипотрофией первой степени, значения катехоламинов и их предшественников после адреналиновой пробы имеют отрицательную динамику, уменьшаясь по сравнению с фоном.

Таким образом, в ответ на адреналиновую пробу у щенков с гипотрофией первой степени отмечается парадоксальная реакция САС, не происходит повышение уровня катехоламинов и их предшественников, а отмечается их снижение. На наш взгляд это отображает не только истощение САС, но еще и компенсаторные изменения в ее работе, направленные на сохранение энергии и более экономное ее расходование, адреналиновый стимул, или любая другая стрессовая реакция приводит не к стимуляции САС, а к ее торможению.

При гипотрофии второй степени эти изменения в работе САС еще более выражены, так у этих щенков не отмечается исходного симпатического тонуса соответствующего симпатикотонии, а в ответ на адреналиновый стимул САС отвечает торможением выработки катехоламинов и их предшественников во всех случаях.

У щенков-эйтоников уровень секреции адреналина снижается с 9,99±0,56 нг/мин до 8,21±0,56 нг/мин; секреции норадреналина с 14,56±1,90 нг/мин до 7,38±1,90 нг/мин, ДОФА с 7,51±1,10 нг/мин до 6,14±1,10 нг/мин, что ниже, чем фоновый уровень на 20%, 100% и 14% соответственно.

У щенков с низким ИВТ, в ответ на адреналиновый тонус отмечается 15% повышение уровня секреции адреналина при снижении на 70% уровня норадреналина и на 16% ДОФА, что составило 6,32±0,87 нг/мин; 10,41±1,53 нг/мин; 5,41±1,76 нг/мин соответственно.

Параллельно с анализом функциональной активности САС нами оценивались и гемодинамические параметры, позволившие выявить различия в состоянии ССС в зависимости от типа кормления и особенностей вегетативной регуляции сердечного ритма. Так, в покое у щенков на полнорационном кормлении с симпатикотоническим вариантом ИВТ, показатели УОК и МОК выше, чем в состоянии нормо- и ваготонии и составили 5,1±0,45 мл.; 0,714±0,03 л.; тогда как у щенков-эйтоников 4,6±0,21 мл; 0,519±0,07 л.; щенков ваготоников 4,4±0,25 мл.; и 0,479±0,06 л. соответственно (р<0.05 и р<0.01).

Аналогичные различия наблюдаются и в отношении УИ и СИ, которые у симпатотоников выше и составляют13,4±0,76 мл/м2 и 2,1±0,01 л/мин/м2 по сравнению с группой эйтоников и ваготоников, у которых этот показатель оказался равным 12,4±0,54 мл/м2 и 1,7±0,03 л/мин/м; 11,2±0,12 мл/м2 и 1,5±0,09 л/мин/м2 2 (р<0.05 и р<0.01). При этом значения УПСС, уровень которого обуславливается состоянием периферического сосудистого русла, оказался ниже, что может указывать на физиологическую сбалансированность между периферическим сопротивлением сосудов и МОК, которые находятся в обратно пропорциональной связи (Р.А. Калюжная, 1973). Относительное снижение УОК, МОК и СИ у эйтоников и ваготоников в этой группе, сопровождающееся более высокими значениями ОПСС может свидетельствовать о преобладающей активности сосудистого компонента в регуляции АД.

У щенков на традиционном кормлении с симпатикотоническим вариантом ИВТ, показатели УОК и МОК выше, чем в состоянии нормо- и ваготонии и составили 5,0±0,65 мл.; 0,685±0,12 л.; тогда как у щенков-эйтоников 4,5±0,24 мл; 0,517±0,02 л.; щенков ваготоников 4,3±0,25 мл.; и 0,455±0,08 л. соответственно (р<0.05 и р<0.01). На полнорационном кормлении эти показатели оказались несколько выше, чем при традиционном кормлении, но достоверные отличия отмечены только в МОК (р<0.05). УИ и СИ у щенков на традиционном кормлении также, как и в предыдущей группе у щенков симпатотоников выше, чем у эйтоников, и составили у симпатотоников 13,2±0,89 мл/м2 и 1,9±0,04 л/мин/м2 , у эйтоников и ваготоников этой же группы эти показатели оказались равными 11,1±0,55 мл/м2 и 1,6±0,06 л/мин/м; 10,2±0,14 и 1,5±0,07 л/мин/м2 (р<0.05 и р<0.01).

Несмотря на более высокий ИВТ и показатели вариабельности сердечного ритма, интегральные показатели производительности ССС у щенков на традиционном кормлении оказались несколько ниже, чем у щенков на полнорационном кормлении, по всей видимости, это связано с увеличением УПСС уровень, которого оказался выше, чем в предыдущей группе и составил 3105,5±387,3; 3429,0±397,3; 3543,1±342,1 у.е., у симпатотоников, эйтоников и ваготоников соответственно. Снижение УОК, МОК и СИ в группе щенков на традиционном кормлении, сопровождающееся более высокими значениями УПСС, по всей видимости, также свидетельствует о более высокой активности сосудистого компонента в регуляции АД, что увеличивает нагрузку на сердце.

У щенков с гипотрофией первой сте