Характеристика возможности использования инфузорий с целью биотестирования токсигенных Escheriohia coli, вызывающих диарею у молодняка крупного рогатого скота и свиней. Использование метода биотестирования на стилонихиях для определения экзотоксинов.
Аннотация к работе
Установлено, что в развитии массовых кишечных инфекций у молодняка животных в основном участвуют токсигенные E.coli, продуцирующие термолабильный (TL), термостабильный (TS), шигаподобные (STX I, II) и другие токсины [3, 8, 10, 12]. В настоящее время токсигенные E.coli выявляют с помощью методов, позволяющих обнаружить у бактерий как гены, отвечающие за выработку токсинов, так и собственно продуцируемые ими токсины. В работе использовали инфузорий 4 видов - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis. Тест-объектами служили непатогенный штамм E.coli М-17 (положительный контроль), являющийся пробиотическим (препарат "Колибактерин") и патогенные штаммы E.coli из коллекции НИИ эпидемиологии и микробиологии им. · установить характер реагирования инфузорий на различные варианты токсигенных эшерихий, изолированных от больных животных в хозяйствах Краснодарского края - E.coli 546 (LT), E.coli 533 (ST), E.coli 44 (STX1, 2), E.coli 196 (GEM), E.
Список литературы
1. Виноходов Д.О. Токсилокологические исследования кормов с использованием инфузорий. -СПБ, 1995. -С.64-65.
2. Ефанова Л.И. Этиологическая структура факторных инфекций свиней и крупного рогатого скота в хозяйствах ЦЧЗ России / Л.И. Ефанова, О.А. Ман-журина, А.В.Степанов// Вестник Курской государственной сельскохозяйственной академии. -2012. -N°6. -С.71-72.
4. Мартыненко Л.Д. Динамика накопления термолабильного энтеротоксина E. coli О148 на жидких питательных средах // Л.Д. Мартыненко, Т.Э. Калинина, В.В. Лобанов // Сборник научных трудов НИИЭИМ им Н.Ф. Гамалеи "Бактериальные токсины". -Москва, 1987. -С. 89-92.
5. Патент 2070819 Российская Федерация, МПК А61 К39/108 Способ получения вакцины против эшерихиоза телят /Д.Д.Новак, В Т Вульф. Опубл. 27.12.1996.
6. Паутова И.Г. Изучение условий культивирования штамма Н19 E.coli для получения шигеллоподобного токсина / И.Г Паутова, Ю.В. Вертиев, И.С. Николаева // Сборник научных трудов НИИЭИМ им Н.Ф. Гамалеи "Бактериальные токсины". -Москва, 1987. -С. 103-108.
7. Пирожков М.К. Биологические препараты для специфической профилактики и терапии эшерихиоза животных / М.К. Пирожков // Дисс. док. вет. наук. -Москва, 2002. -298 с.
8. Терехов В.И. Антигенный состав и патогенные свойства штаммов Е. coli, изолированных от телят и поросят в Краснодарском крае / В.И. Терехов, Я.М. Караев, Н.В Когденко, Н.В. Коткова // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. -2008. -N°4. -С. 6-8.
9. Шахов А.Е. Этиология факторных инфекций животных и меры их профилактики. / А.Е Шахов //Ветеринарная патология. -2005. -N°3. -С. 22-24.
10. El-Mahrouk I. Study of some virulence factors of E. coli from diarrheic sheep and goats / I.El-Mahrouk, A.M.O.M.G.Agour, A.M.Montasser // Bulletin of Animal Health and Production in Africa. -2012. -Т.60. -N°2. -P.153-163.
11. Rouillard T. Detection et identification par PCR des facteurs de virulence de souches d"Escherichia coli responsables de diarrhees neonatales / T Rouillard, J.Guennec, P.Y. Moalic // Revista de Medicina Veterinaria. -2002. -Т.153. -N°4. -P.261-268.
12. Truszczynski M. Vaccines against porcine colibacillosis, particularly after weaning / M. Truszczynski, Z. Pejsak //Medycyna Weterynaryjna. -2014. -R.70. -N°1. -S.3-6. биотестирование скот молодняк диарея
Резюме
Изучена возможность использования инфузорий с целью биотестирования токсигенных Escheriohia coli, вызывающих диарею у молодняка крупного рогатого скота и свиней. Было испытано 4 вида инфузорий - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis. Инфузорий выращивали на среде Лозина-Лозинского. Эшерихии инкубировали в бульоне Хоттингера. Суть метода заключалась в том, что на предметное стекло наносили 3 капли суточной среды культивирования инфузорий, после чего проводили подсчет их количества под увеличением 2 х 8, после чего добавляли 1 каплю бульонной тест-культуры E.coli. Спустя 5 минут производили предварительный, а через 2 ч окончательный просмотр и подсчет количества живых инфузорий.
Установлено, что инфузории видов Paramecium caudatum, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis не пригодны для тестирования токсигенных свойств эшерихий, так как первые два не погибают при добавлении культуры патогенной E.coli, а третий вид напротив весьма чувствителен и погибает даже при добавлении стерильного бульона Хоттингера. Специфически чувствительным к экзотоксинам эшерихий оказался только вид Stylonychia mytilus. В наибольшей степени на стилонихии оказывают губительное влияние цито-токсины (STX, CNF) эшерихий, обуславливая гибель данных инфузорий при 2-часовой экспозиции с суточной культурой в количестве 22-47%. Под действием цитотонинов (TL, TS, GEM) эшерихий стилонихии погибали в меньшем количестве - 7-21%. Использование метода биотестирования на стилонихиях позволило установить, что накопление экзотоксинов в среде культивирования происходит в течение 6-7 дней. Однако культивирование энтеротоксигенных эшерихий более 6 дней приводит к инактивации TL-, TS-токсинов.