Видова ідентифікація мікроорганізмів роду Enterococcus, вилучених із різних екотопів. Рівень активності факторів патогенності у мікроорганізмів роду Enterococcus. Фенотипові і генетичні властивості мікроорганізмів. Вивчення патогенного потенціалу.
Аннотация к работе
В останні роки науковцями багатьох країн світу відмічено зростання ролі грампозитивної умовно патогенної мікрофлори, зокрема ентерококів, у виникненні нозокоміальних та гнійно-септичних інфекцій (Wisplinghoff H. et al., 2004; Вищезазначене свідчить про необхідність розширення вимог до проведення лабораторної діагностики мікроорганізмів роду Enterococcus та доцільність розробки нових методичних рекомендацій щодо їх виділення та ідентифікації. Незважаючи на досить чисельну кількість публікацій щодо етіологічної ролі ентерококів, патогенний потенціал цих мікроорганізмів вивчено недостатньо. Значущість мікроорганізмів роду Enterococcus як етіопатогенів визначається також їх природною резистентністю до багатьох антибактеріальних препаратів та набутою до препаратів, які найбільш часто призначаються в клініці (Сидоренко С. В., 2004). Усе вищезазначене свідчить про актуальність досліджень, спрямованих на вивчення комплексу біологічних властивостей мікроорганізмів роду Enterococcus, їх патогенного потенціалу та чутливості до антибіотиків.Комплексна оцінка вивчення факторів патогенності та антибіотикочутливості мікроорганізмів роду Enterococcus дозволила встановити рівень фенотипового і генетичного поліморфізму ентерококів, вилучених із різних екотопів, визначити спрямованість адаптаційних зсувів у популяціях цих мікроорганізмів. Встановлено відмінності за видовим складом мікробної популяції ентерококів у залежності від еконіші їх вегетування. У кишечнику здорових дітей домінуючими видами є E.faecalis - (40,0±9,8) % і E.faecium - (32,0±9,3) %, із суттєво меншою частотою (28±4,3) % виявляються види E.avium, E.solitarius, E.mundtїi, E.cecorum та інші неідентифіковані види цих мікроорганізмів. У кишечнику хворих на цукровий діабет домінуючим є вид E.faecalis (69,6±9,6) %, інші види ентерококів вилучаються з меншою частотою: E.faecium (17,5±7,9) %, E.mundtїi, E.durans, E.raffinosus (13,9±5,6) %. Вилучені з обєктів оточуючого середовища стаціонару “Центру діабетичної стопи” ізоляти ентерококів віднесено виключно до виду E.raffinosus.
План
ОСНОВНИЙ ЗМІСТ ДИСЕРТАЦІЇ мікроорганізм екотоп патогенний enterococcus
Вывод
Комплексна оцінка вивчення факторів патогенності та антибіотикочутливості мікроорганізмів роду Enterococcus дозволила встановити рівень фенотипового і генетичного поліморфізму ентерококів, вилучених із різних екотопів, визначити спрямованість адаптаційних зсувів у популяціях цих мікроорганізмів.
1. Встановлено відмінності за видовим складом мікробної популяції ентерококів у залежності від еконіші їх вегетування. У кишечнику здорових дітей домінуючими видами є E.faecalis - (40,0±9,8) % і E.faecium - (32,0±9,3) %, із суттєво меншою частотою (28±4,3) % виявляються види E.avium, E.solitarius, E.mundtїi, E.cecorum та інші неідентифіковані види цих мікроорганізмів. У кишечнику дітей, хворих на ГКІ, при домінуванні видів E.faecalis (43,3±9,0) %, E.faecium (33,4±8,6) % значно рідше виділяються (23,3±3,9) % - E.mundtii, E.cecorum, E.raffinosus, E.columbae та інші неідентифіковані види цих мікроорганізмів.
2. У кишечнику хворих на цукровий діабет домінуючим є вид E.faecalis (69,6±9,6) %, інші види ентерококів вилучаються з меншою частотою: E.faecium (17,5±7,9) %, E.mundtїi, E.durans, E.raffinosus (13,9±5,6) %. У виділеннях трофічних виразок - E.faecalis (89,3±5,8) %, E.faecium (7,1±4,8) %, E.mundtii (3,6±3,5) %. Вилучені з обєктів оточуючого середовища стаціонару “Центру діабетичної стопи” ізоляти ентерококів віднесено виключно до виду E.raffinosus.
3. Встановлено значні розбіжності в антибіотикочутливості штамів, вилучених із різних екотопів. Визначено, що від (60,0±12,6) % до (72,0±6,3) % штамів характеризуються високим рівнем резистентності до аміноглікозидів (HLAR). Рівень розповсюдженості штамів з (HLAR) вище серед вилучених від хворих на цукровий діабет. Встановлено високу протиентерококову активність амоксициліну, питома частка нечутливих штамів становила (5,7±2,2) %, і низьку - інших бета-лактамів (пеніциліну, ампіциліну) - (65,1±4,7) % і (31,1±4,4) % відповідно. Виявлено високий відсоток штамів E.faecalis, резистентних до ампіциліну та пеніциліну (25,0±5,2 % і 68,6±5,6 % відповідно).
4. Підтверджено високу протиентерококову активність лінезоліду та глікопептидних антибіотиків (тейкопланін, ванкоміцин). Виявлено (8,5±2,7) % штамів, помірно стійких до ванкоміцину та (1,0±0,9) % стійких до тейкопланіну, серед ізольованих від хворих на цукровий діабет. Встановлено високу розповсюдженість поліантибіотикорезистентних штамів ентерококів, від (48,0±9,9) % серед виділених з кишечника здорових дітей до (85,7±6,6) % - з трофічних виразок при цукровому діабеті.
5. Доведено на фенотиповому і генетичному рівні, що за типом експресії гену резистентності до ванкоміцину (VANA) штами Enterococcus можуть бути гомо- або гетеротипні. У деяких штамів, які фенотипово чутливі або помірно чутливі визначено неекспресуючий ген VANA.
6. Визначено, що пенентрантність та ступінь вираженості желатиназної, казеїназної, фібринолітичної, гіалуронідазної, РНК-азної та антилізоцимної активностей у штамів ентерококів корелює з наявністю гнійно-запального процесу в екотопі їх вегетування. Усі штами ентерококів володіють адгезивністю середнього та високого рівня, але ентерококи, які вилучено при патологічних станах, характеризуються вірогідно більш високими показниками адгезії. Показники пенентрантності та експресивності факторів патогенності штамів, ізольованих із виділень трофічних виразок хворих на цукровий діабет перевищували в 1,1 - 3,5 рази аналогічні показники групи порівняння.
7. Встановлено, що ентерококи, вилучені із різних еконіш, гетерогенні за факторами патогенності. Зміна умов існування ентерококів у природній еконіші та транслокація їх у “маргінальну” еконішу веде до зсуву патогенного потенціалу в напрямку його посилення шляхом зростання адгезивної, казеїназної, желатиназної, фібринолітичної, гіалуронідазної, РНК-азної та антилізоцимної активностей.
8. Доведено, що для кожної екологічної ніші вегетування характерний набір бактеріальних фенотипів ентерококів з домінуванням певних біопрофілей. Домінуючі фенотипові варіанти штамів ентерококів, вилучених при гнійно-запальних захворюваннях, характеризуються більш вираженою агресивністю біопрофілей з широким представництвом виявлених факторів патогенності.
9. Удосконалено методи виділення і розроблено схему видової ідентифікації бактерій роду Enterococcus, які раціонально використовувати у практичній діяльності бактеріологічних лабораторій лікувально-профілактичних та санітарно-епідеміологічних закладів охорони здоровя України.
Список литературы
1. Перетятко Е. Г. Адгезивные свойства энтерококков, выделенных из содержимого трофических язв больных сахарным диабетом / Е. Г. Перетятко // Вісник Харківського національного університету імені В. Н. Каразіна. Серія Медицина. - 2007. - № 774, Вип. 14. - С. 120 - 123.
2. Приготування суспензій мікроорганізмів із визначеною концентрацією мікробних клітин / Є. М. Бабич, С. В. Калініченко, Н. І. Скляр, Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко, Т. А. Рижкова // Лабораторна діагностика. - 2007. - №. 3. - С. 58 - 61. (Здобувач визначив кількісний вміст ентерококів у різних за оптичною щільністю суспензіях).
3. Мироненко Л. Г. Ванкомицинрезистентные энтерококки (обзор литературы) [Электронный ресурс] / Л. Г. Мироненко, Е. Г. Перетятко // Анналы Мечниковского института. - 2007. - № 2. - С. 6 - 10. - Режим доступа к журналу: . (Здобувач зібрав та проаналізував літературні джерела, підготував матеріали до друку).
4. Мироненко Л. Г. Протеолітична активність ентерококів, вилучених з вмісту трофічних виразок хворих на цукровий діабет / Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко // Лабораторна діагностика. - 2008. - № 1. - С. 67 - 70. (Здобувач визначив казеїназну та желатиназну активність ентерококів, підготував матеріали до друку).
5. Влияние условий криоконсервирования на сохранность жизнеспособности и биологических свойств бактерий рода Enterococcus / Е. Г. Перетятко, М. Н. Калашникова, Л. Г. Мироненко, И. П. Высеканцев, Т. М. Гурина / Вісник проблем біології і медицини. - 2008. - Вип. 3. - С. 26 - 30. (Здобувач визначив життєздатність та біологічні властивості ентерококів до та після кріоконсервування).
6. Мироненко Л. Г. Розповсюдженість антибіотикорезистентності мікроорганізмів роду Enterococcus / Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко, С. О. Молокова // Український медичний альманах. - 2007. - Т. 10, № 5. - С. 121 - 123. (Здобувач визначив чутливість ентерококів до антибактеріальних препаратів).
7. Мироненко Л. Г. Стабильность биологических свойств Enterococcus faecium в процессе криоконсервирования / Л. Г. Мироненко, Е. Г. Перетятко, Т. В. Холодная // Методи одержання чистих культур мікроорганізмів та їх довгострокового зберігання в колекціях. - 2009. - Вип. 7. - С. 48 - 54. (Здобувач визначив біологічні властивості E. faecium до та після кріоконсервування).
8. Методи виділення та ідентифікації ентерококів : [метод. рек.] / уклад. : О. І. Поліщук. Л. Г. Мироненко, Т. Г. Глушкевич, В. В. Яновська, О. П. Покас, О. Г. Перетятко. - К. : Знання України, 2009. - 24 с. (Здобувач зібрав та проаналізував літературні джерела, підготував матеріали до друку).
9. Стандартизація приготування мікробних суспензій : [інфор. лист] / авт. : Ю. Л. Волянський, Л. Г. Мироненко, С. В. Калініченко, Н. І. Скляр, О. Б. Колоколова, Л. М. Ткач, О. Г. Перетятко - К. : Укрмедпатентінформ, 2006. - 7 с. (Здобувач визначив кількісний вміст ентерококів у різних за оптичною щільністю суспензіях).
10. Перетятко О. Г. Використання мікротест - системи EN-COCCUSTEST для міжвидової ідентифікації мікроорганізмів роду Enterococcus / О. Г. Перетятко // Пошук та розробка нових профілактичних і лікувальних засобів, антисептиків, дезінфектантів та пробіотиків : науково-практична конференція з міжнародною участю, 20 - 21 листопада 2006 р. : тези доп. - Х., 2006. - С. 155.
11. Перетятко О. Г. Скринінг ванкоміцинрезистентності штамів ентерококів, вилучених від дітей хворих на ГКЗ / О. Г. Перетятко // Вклад молодих вчених в розвиток медичної науки і практики : всеукраїнська науково-практична конференція (з міжнародною участю), 12 квітня 2006 р. : тези доп. - Х., 2006. - С. 83.
12. Перетятко О. Г. Протеолітична активність мікроорганізмів роду Enterococcus / О. Г. Перетятко // Медична наука : сучасні досягнення та інновації: науково-практична конференція молодих вчених, 22 листопада 2007 р. : тези доп. - Х., 2007. - С. 58 - 59.
13. Мироненко Л. Г. Антилізоцимна активність E. faecalis, вилучених у хворих на цукровий діабет / Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко // Шпитальні інфекції: сучасний стан проблеми : науково-практична конференція, 11 - 12 грудня 2008 р. : тези доп. - Х., 2008. - С. 47. (Здобувач визначив антилізоцимну активність E. faecalis, підготував матеріали до друку).
14. Микробиологический мониторинг антибиотикорезистентности кишечной флоры / Л. Г. Мироненко, И. А. Воронкина, Е. Г. Перетятко, Т. В. Холодная // Сучасні проблеми науки та освіти : 7-а міжнародна міждисциплінарна науково-практична конференція, 25 червня - 2 липня 2006 р. : тези доп. - Сімеїз, 2006. - C. 98. (Здобувач визначив чутливість ентерококів до антибактеріальних препаратів, підготував матеріали до друку).
15. Определение фенотипа ванкомицинрезистентности VANA в ПЦР у микроорганизмов рода Enterococcus / Л. Г. Мироненко, Е. Г. Перетятко, В. В. Яновская, А. И. Савчук // Актуальні питання стратегії, тактики застосування та дослідження антибіотиків, антисептиків, дезінфектантів : міжнародна науково-технічна конференція, 9 - 10 жовтня 2008 р. : тези доп. - Вінниця, 2008. - С. 188. (Здобувач підготував штами до дослідження в ПЛР, проаналізував отримані результати, підготував матеріали до друку).
16. Мироненко Л. Г. Гіалуронідазна активність мікроорганізмів роду Enterococcus / Л. Г. Мироненко, О. Г. Перетятко, Л. М. Руденко // Поєднані інфекційні та паразитарні хвороби : конгрес до 122-річчя від народження академіка Л. В. Громашевського, 8 - 9 жовтня 2009 р. : тези доп. - Чернівці, 2009. - С. 155 - 156. (Здобувач визначив гіалуронідазну активність мікроорганізмів роду Enterococcus, підготував матеріали до друку).