Определяемый компонент в ферментативных методах анализа, его содержание. Применение ферментативных методов в научных исследованиях, при разработке новых пищевых технологий и биотехнологических процессов. Этапы определения первичной структуры белков.
Аннотация к работе
УЧРЕЖДЕНИЕ ОБРАЗОВАНИЯ «ГРОДНЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»Достоинства ферментативных методов анализа: высокая чувствительность, обусловленная активностью ферментов, природой индикаторных реакций (с помощью которых определяют в-во) и способами детекции аналитического сигнала; высокая селективность и мягкие условия проведения анализа. Определяемым компонентом в ферментативных методах анализа могут быть субстраты (вещества, превращение которых катализирует фермент), сами ферменты, коферменты (вещества, необходимые для осуществления каталитического действия фермента) и эффекторы (изменяющие каталитическую активность фермента - активаторы, ингибиторы). Специфичность действия ферментов, основанная на комплементарное™ пространственной конфигурации активного центра и субстрата является гарантом достоверности и надежности ферментативного метода при исследовании отдельных соединений в многокомпонентных смесях, имеющих сложный состав и строение, таких, какими и являются пищевые продукты. При разработке ферментативных методов и подборе реагентов, в первую очередь, выбирают ферменты с наибольшей специфичностью действия, для которых подбираются оптимальные условия проведения анализа. C = [(E 2 - E 1) опыт - (E 2 - E 1) контроль]•V•M•F ?•d•v•10000 где (E 2 - E 1) опыт - разница конечной и начальной оптической плотности в кювете с пробой; (E 2 - E 1) контроль-разница конечной и начальной оптической плотности в кювете без пробы; V - общий объем реакционной смеси, мл; М - молярная масса искомого соединения, г/моль; F - фактор разведения пробы; ? - молярный коэффициент экстинкции (например, кофермента НАДФ/НАД при ? = 340 нм, ? = 6,3 л/ммоль • см); d - толщина кюветы, см; v - объем пробы, добавляемый в кювету, мл.