Отримання поліклональних та моноклональних антитіл проти адаптерного білка Ruk/CIN85. Аналіз профілю експресії ізоформ Rukl/CIN85 в лініях клітин різного тканинного походження. Експресія ізоформ адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах нирки і мозку людини.
Аннотация к работе
Зміни функціональної активності білкових продуктів протоонкогенів і генів супресорів пухлин, так само як і зміни в рівні їхньої експресії, викликані генетичними причинами, ведуть до порушень в регуляції сигнальних мереж, залучених до контролю клітинного циклу, апоптозу, генетичної стабільності, клітинної диференціації, морфогенетичних реакцій, що в кінцевому рахунку призводить до трансформації клітин. Наявні функціональні дані свідчать про те, що адаптерний білок Ruk/CIN85/SETA виконує важливу роль не тільки у підтриманні гомеостазу нормальних клітин, але може бути також залученим до регуляції шляхів злоякісної трансформації клітин людини і тварин і, як наслідок, слугувати молекулярним маркером канцерогенезу та, в перспективі, представляти привабливу мішень для антипухлинної терапії. У роботі використані результати досліджень, отримані в рамках бюджетної теми: „Роль SH3-вмісних адаптерних білків Ruk/CIN85/SETA в регулюванні сигнальних мереж нормальних і трансформованих клітин”, № держреєстрації 0104V000724, 2004-2006 рр. Робота виконувалась також у рамках вітчизняних конкурсних програм: проекту Державного фонду фундаментальних досліджень „Зясування біологічної ролі адаптерного білка Ruk в регуляції процесів проліферації, диференціації та апоптозу клітин людини і тварин”, № 05.07/00283, 2001-2005 рр. та проекту “Моніторинг профілю експресії адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах людини як фактора прогнозу захворювання та параметра чутливості клітин до протипухлинної терапії” в рамках програми “Новітні медико-біологічні проблеми та оточуюче середовище людини”, договір №5. Дослідити експресію ізоформ Ruk/CIN85 в пухлинах нирки людини на рівні МРНК та білка. Дослідити експресію ізоформ Ruk/CIN85 в пухлинах передміхурової залози людини на рівні МРНК та білка.Результати проведених досліджень дозволяють припустити, що виявлене зниження експресії адаптерного білка Rukl/CIN85 в проаналізованих типах пухлин людини може призводити до втрати узгодженого контролю процесів апоптозу і проліферації в трансформованих клітинах та вносити вклад в прогресію пухлинного росту. Продемонстровано, що профілі експресії ізоформ Ruk та його ортолога у людини, білка CIN85, їх здатність до олігомеризації є специфічними для ліній клітин різного видового та тканинного походження. виявлені закономірності можуть відображати особливості функціонування ізоформ Ruk/CIN85 залежно від конкретного клітинного контексту. Показано, що зниження рівня експресії Rukl/CIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини супроводжується змінами субклітинної локалізації адаптерного білка - транслокацією до ядра та переважним накопиченням в примембранній зоні.
План
Основний зміст роботи
Вывод
Досліджено особливості експресії ізоформ адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах нирки, передміхурової залози та головного мозку людини. Результати проведених досліджень дозволяють припустити, що виявлене зниження експресії адаптерного білка Rukl/CIN85 в проаналізованих типах пухлин людини може призводити до втрати узгодженого контролю процесів апоптозу і проліферації в трансформованих клітинах та вносити вклад в прогресію пухлинного росту.
1. Отримано і охарактеризовано поліклональні та моноклональні антитіла до адаптерного білка Ruk/CIN85.
2. Продемонстровано, що профілі експресії ізоформ Ruk та його ортолога у людини, білка CIN85, їх здатність до олігомеризації є специфічними для ліній клітин різного видового та тканинного походження. виявлені закономірності можуть відображати особливості функціонування ізоформ Ruk/CIN85 залежно від конкретного клітинного контексту.
3. Встановлено як зниження (у 12 випадках з 20), так і підвищення (у 5 випадках з 20) експресії повнорозмірної форми Ruk/CIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини порівняно з відповідними контрольними зразками. Виявлені зміни в рівні експресії Rukl/CIN85 корелюють із ступенем злоякісності досліджених зразків пухлин.
4. Показано, що зниження рівня експресії Rukl/CIN85 у зразках світлоклітинної карциноми нирки людини супроводжується змінами субклітинної локалізації адаптерного білка - транслокацією до ядра та переважним накопиченням в примембранній зоні.
5. Виявлено поліморфізм у рівні експресії повнорозмірної форми Ruk/CIN85 у зразках доброякісної гіперплазії передміхурової залози, тоді як в аденокарциномах експресія Rukl/CIN85 детектується на дуже низькому рівні або зовсім не детектується. Низький рівень експресії Rukl/CIN85 в зразках аденокарцином співпадає з їх високим ступенем злоякісності.
6. встановлено обернену залежність у рівні експресії Rukl/CIN85 і EGFR в центральній і периферійній ділянках зразків гліобластом: високий рівень експресії EGFR в центральних ділянках пухлин відповідає низькому рівню експресії Rukl/CIN85 і навпаки.
7. Виявлені особливості експресії Rukl/CIN85 в досліджених типах пухлин можуть бути використані як прогностичний фактор розвитку онкологічних захворювань.
Список литературы
1. Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Дрель В.Р., Дульцева Н.А., Ковальова В.А., Поспішіль Ю.О., Шуляк О.В., Бухман В., Дробот Л.Б. Експресія гена ruk/cin85 у пухлинах передміхурової залози людини // Експер. і Клін. Фізіологія і Біохімія. - 2004.-N 1. -С.35-42.
2. Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Маєвська О.М., Ігуменцева Н.І., Ржепецький Ю.А., Машталір О.М., Поспішиль Ю.О, Шуляк О.В., Возіанов С.О., Дробот Л.Б. Експресія адаптерного білка Ruk/CIN85 в пухлинах нирки людини // Експер. і Клін. Фізіологія і Біохімія. - 2004.-N 4. -С.92-99.
3. Дробот Л.Б., Маєвська О.М., Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Барська М.Л., Ігуменцева Н.І., Басараба О.І., Федорко О.І. Поліклональні та моноклональні антитіла проти адаптерного Ruk/CIN85 білка: отримання характеристика, можливості застосування // В зб.: фундаментальні орієнтири науки (біологія та науки про Земдю і навколишнє середовище).-К.: Академперіодика.-2005.-С.105-118.
4. Vynnytska B.O., Basaraba O.I., Bobak Ya.P., Shuvayeva G.Yu., Mayevska O.M., Barska M.L., Fedorko O.I., Drobot L.B. Study of Ruk/CIN85 isoforms expressionin normal and transformed human tissues // Visnyk of Lviv Nation. University. Biology Series.-2006.-Vol.41.-P. 26-30.
5. Шуваєва Г.Ю., Бобак Я.П., Дрель В.Р., Ковальова В. А., Дульцева Н.М., Ігуменцева Н.І., Маєвська О.М., Федишин Я.Я., Воробець Д.З., Шуляк О.В., Борис Ю.Б., Дробот Л. Б. Дослідження експресії ізоформ адаптерного білка Ruk в пухлинах нирки та передміхурової залози людини // Матеріали всеукраїнської науково-практичної конференції “Біохімія”. - Дніпропетровськ (Україна). - 2003. - С. 49-50.
6. Shuvayeva G.Yu., Bobak Ya.P., Kovalyova V.A., Dulceva N.A., Igumenceva N.I., Shulyak O.V., Drobot L.B. Expression of adapter protein Ruk isoforms in kidney, urinary bladder and adenoma prostate tumors // Abstracts of Conference for students, PHD students and young scientists on molecular biology and genetics. - Kyiv (Ukraine). - 2003. - P. 127.
7. Бобак Я., Шуваєва Г., Ігуменцева Н., Машталір Н., Басараба О., Дрель В., Федорко О., Бухман В., Дробот Л. Дослідження експресії гену ruk/cin85 в гліальних пухлинах головного мозку людини // Установ. зїзд Укр. товариства клітин. біології. - Львів (Україна). - 2004. - С. 117.
8. Mayevska O. M., Bobak Ya. P., Shuvayeva G. Yu., Igumentseva N. I., Barska M. L., Dultseva N. A., Basaraba O. I., Fedyshyn Ya. Ya.,Rzhepetsky Yu. A., Mashtalir N. B., Havrylov S. V., Lyzogubov V. V., Usenko V. S., Buchman V. L., Drobot L. B. Monoclonal and polyclonal antibodies produced against adaptor/scaffold protein Ruk/CIN85/SETA: characterization and practical applications // Ukr. Biochem. J. - Abstracts of 5th Parnas Conference. - Kyiv (Ukraine). - 2005.-Vol. 77.-2.-P. 211.
9. Shuvayeva G., Bobak Ya.P., Igumentseva N., Dultseva N., Mayevska O., Zhurovchak A., Sheremeta R., Shulyak O., Buchman V., Drobot L. The study of ruk/cin85 gene expression in human behind prostatic hyperplasia and malignant prostate // Poland Urological Congress. - Lublin (Poland). - 2005. - P.82-83.
10. Mayevska O.M., Shuvayeva G.Yu., Ihumentseva N.I., Barska M.L., Drobot L.B. Monoclonal anti-SH3A antibodies against Ruk/CIN85 in studying of full-length form expression in various transformed cell lines // Materials of VII Int. Conf. of young oncologists “Current problems of experimental and clinical oncology”. - Kyiv. - 2006. - P.91.
11. Shuvayeva G.Yu., Bobak Ya.P., Mayevska O.M., Basaraba O.I., Barska M.L., Shulyak A.V., Buchman V.L., Drobot L.B. Expression of adapter protein Ruk/CIN85 isoforms in human renal tumors // Materials of VII Int. Conf. of young oncologists “Current problems of experimental and clinical oncology”. - Kyiv. - 2006. - P.92.
12. Basaraba O.I., Shuvayeva G.Yu., Mayevska O.M., Fedorko O.I., Bobak Ya.P., Drobot L.B. Study of the adaptor protein Ruk/CIN85 isoforms expression in human brain tissues // Materials of VII Int. Conf. of young oncologists “Current problems of experimental and clinical oncology”. - Kyiv. - 2006. - P.89.